山奈酚通过Wnt/β-catenin信号通路调节骨细胞合成代谢进而改善骨质疏松的作用机制

目的在细胞水平探讨山奈酚对成骨细胞的促进作用及对信号通路蛋白Wnt/β-catenin表达的影响。方法复苏与培养小鼠原成骨细胞MC3T3-E1 Subclone14,用不同浓度(1、2、5、10、20、50 mmol/L)的山奈酚处理细胞不同时间(24、48、72 h),利用细胞计数试剂(CCK-8)测定细胞活力,筛选山奈酚最适处理浓度及处理时间。将探究山奈酚促进成骨的相关检测的实验分为对照组与山奈酚组,对照组细胞进行正常培养,山奈酚组细胞用10 mmol/L山奈酚处理24 h;分别利用碱性磷酸酶(ALP)与前列腺素(PG)E2酶联免疫试剂盒、一氧化氮(NO)生化检测试剂盒对细胞内ALP、PGE2与NO含量进行测定;利用Western印迹检测细胞内骨保护蛋白(OPG),核转录因子配体受体激活体(RANKL)及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。Wnt/β-catenin信号通路介导山奈酚作用的实验分为对照组、山奈酚组、MSAB组、MSAB+山奈酚组,对照组细胞进行正常培养,山奈酚组细胞用10 mmol/L山奈酚处理24 h,MSAB组细胞用5 mmol/L MSAB处理24 h,MSAB+山奈酚组用5 mmol/L MSAB与10 mmol/L山奈酚共同处理24 h,利用CCK8检测各组细胞活力;利用Western印迹检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达情况。结果山奈酚最适处理浓度为10 mmol/L,最佳处理时间为24 h。与对照组相比,山奈酚组细胞中ALP含量显著升高(P<0.05),而细胞中PGE2、NO含量显著降低(P<0.05),细胞中OPG蛋白、Wnt1蛋白与p-β-catenin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),RANKL蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与山奈酚组相比,MSAB组细胞抑制率显著升高(P<0.05);与MSAB组相比,MSAB+山奈酚组细胞抑制率显著降低(P<0.05);与对照组相比,山奈酚组细胞内Wnt1蛋白与p-β-catenin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),MSAB组细胞内Wnt1蛋白与p-β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与MSAB组相比,MSAB+山奈酚组内细胞Wnt1蛋白与p-β-catenin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论山奈酚可以增加小鼠原成骨细胞的活力、增殖作用,通过Wnt/β-catenin信号通路发挥促进成骨的作用,可能是其防治骨质疏松的机制。

miR-141-3p通过靶向生长分化因子-6对RANKL诱导RAW264.7破骨分化的影响

目的研究miR-141-3p通过靶向生长分化因子-6(growth differentiation factor 6,GDF-6)对RANKL诱导的RAW264.7细胞在破骨分化中的调控作用。方法RAW264.7细胞使用RANKL处理,诱导分化为破骨细胞,通过qRT-PCR和Western blot法检测GDF-6及抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达。实验分为未诱导组、RANKL诱导并转染载体对照组(RANKL+OE-NC)和RANKL诱导并转染GDF-6过表达载体组(RANKL+OE-GDF-6),对各组细胞进行TRAP染色,qRT-PCR和Western blot法检测破骨相关指标TRAP、CTSK、金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及GDF-6的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达水平。实验分为过表达对照组(mimics NC)、过表达miR-141-3p组(mimics)、敲低对照组(inhibitor NC)、敲低miR-141-3p组(inhibitor)及过表达miR-141-3p转染过表达GDF-6载体组(miR-141-3p mimics+OE-GDF-6),检测方法同上,对各组细胞进行TRAP染色,qRT-PCR和Western blot法检测破骨相关指标TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2及GDF-6的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达水平。通过双荧光酶实验检测miR-141-3p和GDF-6的靶向关系。结果与未诱导组相比,RAW264.7诱导分化5 d后细胞内TRAP、CTSK、miR-141-3p表达水平升高(P<0.01),同时GDF-6表达水平降低(P<0.01)。转染OE-GDF-6载体后,RAW264.7向破骨细胞的分化受到抑制,TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2表达降低(P<0.01),TRAP染色阳性的破骨细胞数目减少。转染miR-141-3p mimics后,RAW264.7向破骨细胞分化受到促进,TRAP染色阳性的破骨细胞数量增多,破骨相关标志物TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2表达升高(P<0.01),GDF-6表达降低(P<0.01)。转染miR-141-3p抑制剂后,上述实验结果与模拟物组相反,RAW264.7向破骨细胞分化受到抑制。与miR-141-3p模拟物组相比,OE-GDF-6转染细胞后,可以在一定程度上拮抗miR-141-3p模拟物对破骨细胞分化的促进作用。双荧光素酶实验结果表明miR-141-3p可以与GDF-6-3′UTR-WT结合,抑制荧光素酶活性。结论miR-141-3p促进RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,其可能是通过靶向抑制GDF-6完成对破骨细胞分化的调控。

杜仲主要化学成分分类总结

本文综述了近年来国内外对中药杜仲主要化学成分的分类总结。为进一步研究杜仲药材的有效成分,控制其质量提供参考依据。

紫外分光光度法测定香菇调脂胶囊中香菇总多糖含量

目的建立香菇调脂胶囊中香菇总多糖的含量测定方法。方法采用紫外分光光度法,以葡聚糖(相对分子质量5×105)为对照品,在波长485nm处对香菇调脂胶囊中香菇总多糖进行含量测定。结果线性范围:0.02～0.10mg·mL-1(r=0.9996);平均加样回收率为99.0%,RSD为1.13%(n=6)。结论该方法稳定、快速、灵敏度高,可作为香菇调脂胶囊的质量控制指标。

清热止痛巴布剂基质处方的优化

目的:优选清热止痛巴布剂的基质处方。方法:以持黏力和综合感官的综合评分为考察指标,选取聚丙烯酸钠、羧甲基纤维素钠、水合氯化铝和甘油的配比为考察因素,采用正交试验优选复方清热止痛巴布剂的基质处方。结果:清热止痛巴布剂的最佳基质处方配比为:聚丙烯酸钠-羧甲基纤维素钠-水合氯化铝-甘油=14∶1∶1∶120。结论:按优选的最佳基质处方制得的清热止痛巴布剂具有良好的持黏力与综合感官,工艺参数稳定可行。

四川产杜仲药材高效液相色谱指纹图谱的建立

目的 比较四川省4个主产区杜仲药材高效液相色谱（HPLC）共有模式,建立四川产杜仲药材HPLC指纹图谱。方法 采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）对四川4个主产区杜仲药材进行HPLC指纹图谱分析,建立各产区对照指纹图谱及共有峰,在此基础上建立四川产杜仲的指纹图谱。结果 四川达州、都江堰、广元和通江等4个产区各自的10批杜仲HPLC指纹图谱共有峰数目分别为17,24,21,14,其整体相似度范围分别为0.818~0.985,0.913~0.971,0.945~0.989,0.457~0.956。比较4个产区杜仲指纹图谱的共有模式,确定11个共有峰,各产区之间HPLC指纹图谱整体相识度在0.585~0.950。结论 四川省4个产区间杜仲药材质量基本一致,通过本方法评价四川地区杜仲药材质量更加科学合理。

正交试验法优选营心宁胶囊中三七与红参水提工艺

目的优选营心宁胶囊三七与红参的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1为检测指标,考察料液比、提取时间、提取次数对各成分提取量的影响。结果营心宁胶囊中三七与红参最佳水提工艺为:加入8倍量水,提取3次,每次1 h。结论优选的水提工艺简便易行,重现性好,皂苷类成分提取量最高,适合大生产。

道地产区湖北应城石膏X-射线衍射专属特征峰的分析研究

目的:确定道地产区湖北应城石膏X-射线衍射专属特征峰。方法:应用X-射线衍射方法,对不同产地中药石膏进行指纹图谱分析,确定共有峰;并对道地产区湖北应城石膏的特征峰进行专属性鉴别。结果:获得不同产地石膏X-射线衍射指纹图谱,确定16个平均值共有峰;道地产区湖北应城产淡黄色纤维状石膏,其X-射线衍射图谱中具有两个专属特征峰,晶面间距(d)分别为1.68与1.51。结论:道地产区湖北应城石膏X-射线衍射专属特征峰的确定,可区别其他产地石膏,为进一步评价中药石膏的品质提供依据。

香荷胶囊中香菇总多糖提取工艺

研究香荷胶囊中香菇总多糖的最佳提取工艺。采用正交试验法,考察加水量、提取时间和提取次数3个因素对提取工艺的影响;采用紫外分光光度法进行测定。香荷胶囊中香菇总多糖的最佳提取工艺为:加入12倍量水,沸水提取3次,每次1 h。优选的工艺简便可行、稳定性好。

基于Ucinet和Netdraw的国内新型冠状病毒中医药研究热点的可视化分析

目的分析国内新型冠状病毒病(COVID-19)的中医药研究现状,立足于该领域的研究热点和主流观点,选择与核心科研单位、科研工作者开展深入合作,开展针对COVID-19的系统研究工作,从COVID-19的预防、轻证的治疗、普通型的治疗、后期的调护方面,归纳总结经验,服务临床。方法通过检索中国知网(CNKI)数据库,检索策略为"主题"新型冠状病毒"并含"中医"",检索时间为2019年11月1日-2020年3月23日,将检索出来的中文期刊导出为Refworks格式,使用Ucinet软件、Netdraw软件生成作者、发文机构、关键词的可视化共线网络图。通过分析找到高频关键词、作者之间合作关系、机构合作关系,选择与核心作者、研究机构合作,分析主流观点,结合医院实际情况,以形成医院治疗COVID-19从预防到康复阶段的系统化治疗方案。结果(1)COVID-19中医药研究在中医疾病归属、发病机制、中医证型、临床表现、诊疗方案、中医方剂等整个理论体系均有研究,其中,"新型冠状病毒""中医药诊疗方案""辨证论治""病因病机""中医证型""治法治则"是目前研究的热点和重点所在。在疾病归属方面,将COVID-19归属"瘟疫"范畴仍是目前主要观点;在病因病机方面,"湿浊""湿疫""湿毒""湿毒疫""疫毒"研究相对较多;在中医证型方面,"风温夹湿证""气阴两虚证"两种证型纳入的研究最多;在诊疗方案中,主张"病证结合""分期论治",采用"宣畅气机法""解毒法""化湿法""开窍醒神法""扶正祛邪法"为多数医者所推崇;在中医方剂方面,"清肺排毒汤""宣白承气汤""达原饮""玉屏风散"四个方剂较为突出,研究较多。(2)在全国研究地域分布方面,全国将近三分之二的省份均有相关研究论文产出,有将近1140名科研工作者参与该疾病研究。比较核心的研究人员有王玉光、杨丰文、张俊华、苗青、张伯礼、刘清泉、李晓东、王辉、庞博、王永炎等人,作者之间形成了若干个研究团体。3.在研究机构方面,中国中医科学院、北京中医药大学、上海中医药大学这三家机构发文量位居前三,是本次研究的核心机构。但统观全国范围,作者之间及科研机构之间合作关系较为松散。结论(1)目前,COVID-19中医药研究已引起国内学者的广泛关注,理论研究重点仍应放在中医疾病归属、发病机制、中医证型、临床表现、诊疗方案、中医方剂方面;"辨证论治""病因病机""中医证型""治法治则"是现阶段研究的热点所在,广大科研工作者、各科研机构广泛参与,但科研工作者之间、科研机构之间深入合作不够。(2)结合诊疗实际情况,立足于该领域的研究热点和主流观点,选择与核心科研单位、科研工作者开展深入合作,对COVID-19进行系统性研究,最终确定采用分期论治,辨证论治方案。在疾病预防阶段,选用热门方剂"玉屏风散"进行加减化裁,创立"九味预防方"对疾病进行有效的预防;在疾病治疗阶段,立足于数据分析所得的、被广大科研工作者所认同的"宣畅气机法""解毒法""化湿法""开窍醒神法""扶正祛邪法"等治法,提出"宣透达表法""清热解毒法""表里和解法""辟秽化浊法"四法联用,创立"宣清和化方"用于COVID-19医学观察期和临床治疗期中的轻型发热患者;创立"新冠2号方"用于COVID-19普通型的治疗,有效防止COVID-19普通型疾病的病情进展;在疾病康复阶段,采用药物治疗和康复方法,训练的综合调护包括辨证以"气阴两虚证"为主的药物治疗和以八段锦、简式太极拳、呼吸导引法、灸法、穴位贴敷、耳穴压豆、膳食指导和情志疗法的综合康复训练。从而形成了从预防到康复的治疗体系,极大提高了治愈率。(3)围绕COVID-19中医药研究现状绘制的相关文献知识图谱,通过图谱的方式揭示了相关研究的整体概况,并将此大数据运用到具体的临床科研思路中,指导临床实践活动。在全国肺炎疫情发生以来,迅速把握研究热点和重点,找出核心研究者和研究单位,加强合作,确定中医治疗方案,迅速用于临床救治,具有快速反应、迅速应对等优势。

不同产地石膏中微量元素的比较分析

目的:考察不同产地石膏中微量元素的含量,对其进行质量评价。方法:利用微波消解-电感耦合等离子质谱分析法,对各产地石膏样品中所含Fe、Si、Mg、Na、Al、K等微量元素进行含量测定,比较各地石膏微量元素的差异。结果:不同产地石膏中无机元素的含量差异较大,可能与其产地有关。结论:各产地石膏中除Ca元素外,主要含有Sr、Al、Fe、Mg、K等元素,并且普遍含有重金属As,基本不含重金属Hg元素。

不同产地石膏中主要成分含量比较

目的比较不同产地石膏中主要成分含水硫酸钙的含量。方法采用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)滴定法对各产地石膏样品进行滴定。结果各产区石膏样品硫酸钙含量在98.9%～99.8%,其中湖北应城石膏样品含含水硫酸钙最高,晶须实际为半水合硫酸钙。结论湖北应城产石膏样品的含水硫酸钙含量高于其他产区,而应城产区又以李咀膏矿石膏样品的含水硫酸钙含量最高。蜡黄色石膏含水硫酸钙含量不是最高。

小儿咳喘贴黑膏药皮肤安全性评价

目的考察小儿咳喘贴黑膏药对动物皮肤的刺激性与变态反应。方法将日本大耳白兔分为空白对照组与供试品组,连续多次皮肤给药,进行皮肤刺激性试验;取国际无品系豚鼠,分空白对照组、阳性对照组和供试品组,进行皮肤过敏性试验。结果小儿咳喘贴黑膏药供试品对家兔皮肤具轻度刺激性,未引起豚鼠皮肤变态反应及全身变态反应,无致敏性。结论小儿咳喘贴黑膏药动物皮肤安全性试验合格,可安全用于临床。

妇科洗剂的HPLC指纹图谱研究

目的:建立妇科洗剂的HPLC指纹图谱检测方法。方法:采用Wondasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-水(含0.3%磷酸和0.3%二乙胺)梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长284 nm,柱温30℃,对10批妇科洗剂进行HPLC指纹图谱检测,采用"中药色谱指纹图谱评价系统2004年A版"进行评价。结果:妇科洗剂采用该方法分离效果好,确定了15个共有峰,10批妇科洗剂的相似度均>0.9。结论:该方法重复性、稳定性好,建立的指纹图谱可为妇科洗剂的质量评价提供依据。

青蛾丸含药血清对体外诱导成骨细胞MMP3/OPN通路蛋白水平以及骨重建的作用

目的探讨青蛾丸含药血清对体外培养成骨细胞MMP3/OPN通路蛋白表达水平及骨重建作用的机理。方法将15只饲养12周的去势鼠处死,选取股骨胫骨骨髓,进行体外成骨细胞传代培养。将含青蛾丸(2 g/m L生药)的药液喂养40只SD大鼠,随机均分为空白对照组(给蒸馏水1 m L),青蛾丸低(给药0.5 m L)、中(给药1 m L)、高剂量组(给药2 m L),提取各组处死大鼠含药血清干预成骨细胞,运用MTT法测定成骨细胞增殖能力,RT-PCR法测定通路蛋白基质金属蛋白酶3(Mmp3)、骨桥蛋白(Opn)和丝裂原活化蛋白激酶(Mapk)的mRNA水平。结果术后12周,模型组大鼠腰椎及股骨骨密度为(0.153±0.011)g/cm2和(0.162±0.015)g/cm2,假手术组为(0.336±0.016)g/cm2和(0.293±0.005)g/cm2,两组有明显差异(P<0.05),表明大鼠骨质疏松的模型建立成功。青蛾丸高剂量组中Mmp3含有量明显低于其余各组;Mapk水平,青蛾丸各剂量组明显高于空白组,高剂量组明显高于低剂量组;Opn水平,青蛾丸高剂量组明显高于空白组和低剂量组,随着青蛾丸剂量增加,其对Mapk、Opn和Mmp3的影响越显著。骨重建中,成骨细胞增殖和分化中低剂量至高剂量组均使MTT法检测的光吸收值和碱性磷酸酶活性光吸收值均升高,较空白对照组显著性增加(P<0.01和P<0.05),增加幅度与剂量呈正相关,以高剂量组作用最显著。结论中、高剂量青蛾丸含药血清可以促进去势鼠成骨细胞MMP3/OPN通路蛋白表达激活成骨细胞骨重建。

恩施产杜仲药材HPLC指纹图谱的研究

目的：建立恩施产杜仲药材水提液HPLC指纹图谱的分析方法。方法：10批恩施产杜仲药材水提,采用Wonda Sil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液二元线性梯度洗脱,检测波长230 nm,流速1.0 ml·min^-1,柱温25℃,进样量10μl,进行HPLC指纹图谱分析。结果：确定了12个共有峰,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》计算10批杜仲药材水提液的指纹图谱整体相似度在0.596-0.997,并得出对照指纹图谱。结论：针对恩施产杜仲药材建立的HPLC指纹图谱分析方法,操作简便,稳定性高,重复性好,可有效地控制恩施产杜仲药材的内在质量。

天地精丸质量标准的建立

目的：建立天地精丸的质量标准。方法：显微鉴别天地精丸中的粉碎药材，采用TLC法对天地精丸中的黄精和女贞子进行薄层鉴别；采用HPLC法测定天麻素的含量。结果：显微方法能鉴别地龙、石菖蒲特征片断；薄层鉴别分离度好，易于识别。天麻素在19．80～158．40μg·ml-1浓度范围内，线性关系良好（r=1．0000），平均加样回收率为98．33％，RSD为0．45％（n=6）。结论：本方法简便、重复性好，可用于天地精丸的质量控制。

75例新型冠状病毒肺炎患者中医证候与肺部CT影像相关性分析

[目的]对新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎,COVID-19)患者中医证候与肺部计算机断层扫描(CT)影像的相关性进行分析,为中医药治疗提供参考。[方法]对武汉市中医院2019年12月20日—2020年1月31日,收治的75例COVID-19患者信息进行整理,采用预先设置的数据提取表收集中医证型与肺部CT影像等信息,根据中医证型不同进行分组,评估不同证型、不同病情阶段的CT影像差异,探索中医证型与CT影像的关联性。[结果]湿热并重型COVID-19患者肺部病变以单肺或双肺单发或者多发病灶为主,影像上表现为小斑片或大片状磨玻璃样密度影或结节影;寒湿内侵型、湿毒闭肺型肺部CT病灶变密实,可见空气支气管征,磨玻璃样密度影与实变影或条索影共存,部分患者出现少量胸腔积液;阴气耗伤型双肺呈弥漫性病变,严重时呈“白肺”,可见有肺纤维化。[结论]COVID-19患者的中医证候与肺部CT影像具有相关性,对中西医结合诊治COVID-19提供了新的思路。

“冬病夏治”黑膏药制剂的皮肤刺激性和过敏性研究

目的观察"冬病夏治"黑膏药制剂小儿咳喘贴、坎离贴对实验动物皮肤的刺激性和过敏性。方法通过同体比较法对新西兰兔进行皮肤刺激性实验,分组法对豚鼠进行皮肤过敏性实验。分别观察新西兰兔及豚鼠有无皮肤刺激反应及过敏反应。结果小儿咳喘贴、坎离贴对新西兰兔完整皮肤与破损皮肤无刺激性,对豚鼠皮肤无致敏性。结论皮肤安全性评价实验表明黑膏药制剂小儿咳喘贴、坎离贴对实验动物皮肤安全性实验合格,可安全用于临床。

湿法高效混合制粒法与摇摆式制粒法制备菇茶降脂胶囊的比较

目的以两种不同制粒方法制备菇茶降脂胶囊,优选制粒工艺。方法以湿法高效混合制粒法与摇摆式制粒法分别制备菇茶降脂胶囊,比较两方法所制得颗粒的性质、胶囊的可填充性、装量差异等。结果以高效混合制粒法制备的颗粒,致密均匀,胶囊填充量高,装量差异符合规定。结论高效混合制粒法制备菇茶胶囊剂具有可行性和高效性,可为该产品生产提供制粒工艺指导。