DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的 明确DNA损伤应答通路在高钙磷环境诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HVSMC)钙化过程中的作用。方法 将HVSMC培养分为对照组、模型组、共济失调毛细血管扩张突变激酶(iATM)组、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(iPARP)组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测4组细胞钙化情况,彗星实验检测DNA损伤,Western blotting和免疫荧光方法检测组蛋白γH2AX磷酸化水平,酶联免疫吸附试验检测8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHDG)水平,NucleoCounterNC-3000^(TM)高级细胞分析仪分析4组细胞的存活率。结果 光学显微镜和茜素红S染色发现第9天开始,与对照组相比,模型组出现细胞内钙质沉积,第12天钙质沉积明显。对照组与模型组分别在第3、6、9、12天培养状态下Ca^(2+)/蛋白比较,结果:(1)不同时间点Ca^(2+)/蛋白有差异(F=168.970,P=0.000);(2)模型组与对照组Ca^(2+)/蛋白有差异(F=203.040,P=0.000),模型组Ca^(2+)/蛋白较高,钙化明显;(3)两组Ca^(2+)/蛋白变化趋势有差异(F=13.213,P=0.000)。培养12 d时,茜素红S染色发现模型组比对照组钙化程度高,iATM组和iPARP组比模型组钙化程度低。σ-甲酚酞试验发现,iATM组和iPARP组Ca^(2+)/蛋白低于模型组(P <0.05)。彗星试验发现,对照组比较,模型组第9天开始出现更多数量的DNA受损细胞。对照组与模型组分别在第3、6、9、12天培养状态下“彗星细胞”比较,结果:(1)不同时间点“彗星细胞”有差异(F=13.141,P=0.000);(2)模型组与对照组“彗星细胞”有差异(F=121.521,P=0.000),模型组“彗星细胞”百分比较高,DNA损伤明显;(3)模型组与对照组“彗星细胞”变化趋势有差异(F=89.290,P=0.000)。模型组γH2AX蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05)。对照组、模型组分别在第3和12天免疫荧光显微镜下观察> 3个γH2AX病灶百分比,结果:(1)不同时间点> 3个γH2AX病灶百分比有差异(F=168.970,P=0.000);(2)模型组与对照组> 3个γH2AX病灶百分比有差异(F=203.040,P=0.000),模型组> 3个γH2AX病灶百分比较高,DNA损伤明显;(3)模型组与对照组> 3个γH2AX病灶百分比变化趋势有差异(F=153.410,P=0.000)。模型组8-OHDG水平高于对照组(P <0.05)。模型组细胞存活率低于对照组、iATM组、iPARP组(P <0.05);iATM组、iPARP组与对照组细胞存活率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高Ca^(2+)/P环境激活DNA损伤应答信号通路,诱导HVSMC坏死,进而形成钙化。

高钙磷激活DNA损伤应答诱导人主动脉平滑肌细胞早衰

目的探讨DNA损伤应答(DDR)通路调控人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)钙化机制。方法将HASMCs分为对照组、模型组、ATM干预组、PARP干预组,培养12 d。茜素红-S染色法定性和邻-甲酚酞法定量检测细胞钙化;Western blot检测组蛋白γH2AX磷酸化、p16和p21、ATM上Ser1981的磷酸化水平;β-半乳糖苷酶染色检测细胞早衰;qPCR检测p16和p21 mRNA水平。8-羟基-2′-脱氧鸟苷(8-OHDG)检测氧化应激水平,ELISA方法检测IL-6、IL-8水平。结果模型组较对照组钙化明显,8-OHDG、组蛋白γH2AX磷酸化、β-半乳糖苷酶染色、p16的mRNA和蛋白、p21 mRNA、IL6和IL8、ATM磷酸化等指标有显著变化(P<0.05),ATM和PARP干预组可以缓解模型组的变化。结论高钙磷环境刺激HASMCs产生持续DNA损伤,触发ATM磷酸化并激活p16蛋白表达,诱导细胞早衰导致钙化。

同型半胱氨酸和人血浆脂蛋白磷脂酶A2在冠心病患者中的水平及其诊断价值与危险因素

目的:探讨冠心病患者血清中同型半胱氨酸(Hcy)和人血浆脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)的水平及其诊断价值,并分析相关危险因素。方法:选取243例冠心病患者作为研究组,根据疾病原因分为急性心肌梗死组(AMI组,n=80)、不稳定型心绞痛组(UAP组,n=82)和稳定型心绞痛组(SAP组,n=81)。同时选取80例健康体检者为对照组。比较各组之间血清Hcy和Lp-PLA2水平的差异。使用单因素和多因素Logistic回归对冠心病的危险因素进行分析,利用受试者工作特征(ROC)曲线进一步探索Hcy和Lp-PLA2单独及联合检测时对冠心病的诊断效能。结果:对照组、SAP组、UAP组和AMI组之间血清Hcy和Lp-PLA2水平呈上升趋势,且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。使用Logistic回归分析该疾病的危险因素。单因素分析结果显示,冠心病与Hcy、Lp-PLA2、高血压、糖尿病和高脂血症有关(P<0.05),与肥胖、长期饮酒和长期吸烟无关(P>0.05)。多因素分析结果显示,Hcy、Lp-PLA2、高血压和高脂血症是冠心病的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线分析得出:Hcy和Lp-PLA2对冠心病患者有较高的诊断价值,曲线下面积(AUC)分别为0.925和0.879。在冠心病患者中联合检测血清中Hcy和Lp-PLA2水平的诊断效能高于单项指标检测,曲线下面积(AUC)为0.959。结论:冠心病患者血清中Hcy和Lp-PLA2水平均升高,Hcy、Lp-PLA2、高血压和高脂血是冠心病的独立危险因素,可为冠心病的诊断、治疗和预防提供实用依据。Hcy和Lp-PLA2联合检测可有效提升冠心病患者临床诊断效能,为临床诊疗提供了新的思路。

三代测序技术在临床微生物检验中的应用进展

感染性疾病是一类常见的临床疾病。临床微生物室鉴定病原体物种与耐药性结果对治疗感染性疾病有重要指导作用,但传统培养耗时长、阳性率低,远不能满足临床需求,三代测序(TGS)技术采用不依赖于培养的鉴定方法,直接对DNA或RNA进行测序,耗时短、读长较长、体积袖珍,在临床微生物鉴定、耐药性判断和传染性疾病监控中发挥重要作用,是未来微生物室内与床旁检测病原体的重要发展方向。

肝癌病人血浆氨基酸变化与肝功能的相关性分析

目的探讨肝癌病人血浆氨基酸谱变化与肝功能的相关性。方法对100例肝癌病人进行血浆氨基酸的检测和肝功能的检测,并做两者的相关性分析。结果氨基酸谱变化显示肝癌患者中有9种氨基酸发生变化,其中6种氨基酸升高,3种氨基酸降低。氨基酸谱与肝功能相关性分析显示:1.苏氨酸(THR)、蛋氨酸(MET)与谷丙转氨酶(ALT)成正相关;2.谷氨酸(GLU)、蛋氨酸、酪氨酸(TYR)、苯丙氨酸(PHE)、赖氨酸(LYS)与总胆红素(TBIL)、结合胆红素(DBIL)、游离胆红素(IBIL)成正相关,且蛋氨酸、酪氨酸与其三者成中度正相关;3、缬氨酸(VAL)和亮氨酸(LEU)与白蛋白(ALB)、前白蛋白(PALB)成正相关,且亮氨酸与总蛋白(TP),白蛋白、白球比(A/G),胆碱酯酶(CHE),前白蛋白均成正相关;4、支芳比与ALB,A/G,CHE,PALB成正相关,与TBIL,DBIL,IBIL成负相关。结论肝癌病人血浆氨基酸谱变化广泛,可直接反映机体的代谢及营养状况;氨基酸变化水平与肝功能密切相关,可间接反映肝细胞破坏及坏死程度,氨基酸与肝功能的联合检测对肝癌患者的诊断,治疗及预后具有重要意义。

L-8900氨基酸分析仪血浆氨基酸生物参考区间的建立

目的用国产试剂取代原装试剂并统计得出L-8900氨基酸分析仪血浆氨基酸生物参考区间,为临床诊断提供服务。方法用国产试剂与原装试剂检测标准品和同一批血浆(50例),并进行比较,观察其性能指标(包括分离度和重复性)及准确度;使用国产试剂检测400例健康人的血浆游离氨基酸水平以建立血浆氨基酸生物参考区;同时与肝功能指标进行相关性分析。结果 (1)连续5次检测氨基酸标准品得出其峰分离度高,峰保留时间和峰面积重复性高,国产试剂准确度好。(2)统计得出19种氨基酸的生物参考区间,其中10种氨基酸存在性别差异。(3)丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平与苏氨酸水平呈负相关(P<0.05),血糖(GLU)水平与缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸水平呈正相关(P<0.05),总胆固醇(CHO)水平与异亮氨酸水平呈负相关(P<0.05)。结论国产试剂可以替代原装试剂,在此基础上得出血浆氨基酸生物参考区间对临床诊断及预后具有重要意义。

Logistic回归和ROC曲线分析血清玻连蛋白,ɑ-1-B糖蛋白,抗凝血酶Ⅲ,甲胎蛋白在肝细胞癌早期诊断中的价值

目的评估玻连蛋白(vitronectin,VTN),ɑ-1-B糖蛋白(alpha1 B glycoprotein,A1BG),抗凝血酶Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ),甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值,筛选最佳检测组合.方法利用ELISA方法检测160例HCC患者,70例慢性乙肝肝炎(chronic hepatitis B,CH)患者,70例乙肝肝硬化(Liver cirrhosis,LC)患者和50例健康对照(health comparison,HC)人员的血清VTN,A1BG,AT-Ⅲ浓度,电化学发光方法检测AFP浓度,分别比较玻连蛋白(VTN),A1BG,AT-Ⅲ,AFP在HCC组,LC组,CH组,HC组中变化情况;应用ROC曲线分析血清AFP,HRG,A1BG和AT-Ⅲ单项及联合检测HCC的敏感度和特异度;并以肝病状态(HCC组,非HCC组)为应变量,血清AFP,A1BG和AT-Ⅲ测定结果为自变量,建立HCC诊断综合预测模型.结果血清AFP,VTN,A1BG和AT-Ⅲ水平在HCC组,LC组,CH组和HC组之间差异具有统计学意义(F=1498.93,51.68,84.00,115.34,P<0.05).(1)HCC组和其他组相比,VTN水平差异无统计学意义(F=1.31),作为筛查指标相对效能较差;(2)单独检测时,AFP,HRG,A1BG和AT-Ⅲ曲线下面积(AUC)为0.878,0.579,0.712,0.801,VTN的AUC效能最低,无诊断价值,综合预测模型AUC为0.923,与AFP,A1BG和AT-Ⅲ比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(3)AFP,A1BG和AT-Ⅲ单独诊断HCC的敏感性分别为70.00%,64.37%和61.25%,特异性分别为91.05%,74.74%和83.68%,AUC分别为0.878,0.712,0.801.综合预测模型的敏感性和特异性为85.00%和88.42%,AUC为0.923,与单独诊断比较,差异均有统计学意义(P<0.05).其预测HCC概率P=1/[1+exp(0.152-0.035 AFP-0.006 A1BG+0.021 AT-Ⅲ)],且具有较好的诊断效能.结论 AFP,A1BG,AT-Ⅲ联合检测效果优于AFP单独检测,能够提高肝癌早期诊断率.

私营企业内部审计研究

中国加入WTO以后 ,私营企业将面临着更大的挑战 ,加快现代企业制度建设 ,加强内部控制已成为私营企业的当务之急。内部审计作为内部控制的一部分 ,还没有为私企经营者所重视 ,还没有起到应有的作用。目前私营企业内部审计尚存管理、素质、舆论等障碍 ,应围绕规范化建设加强内控评审 。

HPLC/MS分析乙肝相关性肝细胞癌的血清代谢轮廓分析

目的通过HPLC/MS平台探索血清代谢物对于乙肝相关性肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法选取126例就诊于天津市第三中心医院住院患者,包括27例乙肝DNA阴性乙肝肝炎患者、24例乙肝DNA阳性乙肝肝炎患者、24例乙肝肝硬化患者、27例乙肝相关性HCC行手术/射频治疗患者以及24例乙肝相关性HCC行介入治疗患者,另选取查体中心健康志愿者25例为对照组。将血清样本上机所得数据进行前处理,构建正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,基于乙肝组和正常对照组进行代谢物初筛。根据非参数检验的结果,最终筛选和鉴定特征代谢物。利用ROC分析这些特征代谢物的临床潜在应用价值。结果筛选并鉴定出25种特征代谢物,包括9种溶血性磷脂酰胆碱、2种脂肪酸、17α-雌二醇、二氢神经鞘氨醇、5-甲基胞苷、维生素K2、溶血磷脂酸、甘氨胆酸以及报道较少的8种物质。与正常对照组相比,22种代谢物在乙肝相关性HCC组中存在差异表达。与乙肝肝硬化组相比,4种代谢物在乙肝相关性HCC组中存在差异表达。与乙肝相关性HCC行手术/射频治疗组相比,10种代谢物在乙肝相关性HCC行介入治疗组中存在差异表达。从正常对照组到乙肝相关性HCC行介入治疗组,许多代谢物呈相同的变化趋势。结论基于LC/MS平台,本研究成功地构建疾病区分模型并筛选和鉴定出25种特征代谢物,这些代谢物对乙肝相关性HCC具有一定诊断和分期效能。有些特征代谢物呈连续性的变化预示着癌变的可能;有些代谢物对手术方式的选择也具有指导意义。

基于液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选

目的应用代谢组学技术筛选与乳腺癌转移相关的代谢标志物。方法收集100例乳腺癌患者和50例健康志愿者的血清标本,采用高效液相色谱-轨道离子阱质谱联用(HPLC-LTQ Orbitrap XL MS)代谢组学研究平台分析乳腺癌未转移患者、乳腺癌转移患者和健康人群血清标本的代谢轮廓,并通过模式识别方法结合非参数检验对数据进行分析。结果由乳腺癌未转移组、乳腺癌转移组和健康对照组的代谢轮廓构建的正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型具有很好的判别能力(R^2=95.2%,Q^2=86.7%),可以鉴别出用于区分乳腺癌转移与否的8个代谢标志物,包括溶血磷脂酸[18∶1(9Z)/0∶0]、溶血磷脂酰胆碱(18∶0)、溶血磷脂酰胆碱[20∶3(5Z,8Z,11Z)]、胆碱、磷酸二羟丙酮(18∶0e)、2R,3S-番石榴酸、芥酸、L-氢化乳清酸。结论利用代谢组学方法获得的血清代谢轮廓可以用来构建区分模型和寻找乳腺癌转移相关的代谢标志物,为乳腺癌的早期诊治、预后评估和药物治疗靶点的选择提供支持和依据。

222例心脑血管疾病患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原含量分析

目的探讨心脑血管疾病患者血浆D-二聚体和纤维蛋白原(FIB)检测的临床意义。方法对107例冠心病患者,115例脑梗死患者及70例健康人进行血浆D-二聚体和凝血常规检测,对结果进行统计学分析。结果冠心病组和脑梗死组血浆D-二聚体和纤维蛋白原含量均高于健康对照组,差异有统计学意义,而冠心病组和脑梗死组无显著性差异,且冠心病组和脑梗死组PT、APTT及TT与健康对照组无统计学差异。结论与其他凝血指标相比,血浆D-二聚体和纤维蛋白原含量对于心脑血管疾病的监测及诊断更具有临床意义。

微量元素Cu、Zn浓度及其比值在肝癌患者中的诊断效率

全血铜／锌（ Cu／Zn）比值在多种恶性肿瘤（包括肝癌）中可发生不同程度的变化〔1〕。本实验评估肝癌病人血微量元素Cu、Zn水平及其比值的变化及其诊断效率。

溶血磷脂酰胆碱在乙肝相关性肝细胞肝癌患者中的诊断价值

目的探讨溶血磷脂酰胆碱(LPC)类物质对乙肝相关性肝细胞肝癌的诊断价值。方法选择乙型肝炎患者141例,按照疾病类型分为慢性乙型肝炎组20例、乙肝肝硬化组34例、乙肝相关性肝细胞肝癌组87例,另选择同期健康体检者20例为对照组。测定并分析各组受试者静脉血中肝功相关指标[总胆红素(TBil)、结合胆红素(DBil)、游离胆红素(IBil)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、甲胎蛋白(AFP)及LPC 14:0、LPC 15:0、LPC 16:0、LPC 17:0、LPC 18:0的含量,利用受试者工作ROC曲线比较不同指标对乙肝相关性肝细胞肝癌患者的诊断效能。结果 4组受试者性别、年龄比较差异均无统计学意义(P均>0.05),而肝功相关指标、AFP、LPC类物质水平比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。乙肝相关性肝细胞肝癌组LPC 14:0、LPC 16:0、LPC 18:0含量均明显高于乙肝肝硬化组(P均<0.05),且CTP分级B级患者LPC 16:0和LPC 18:0含量明显高于同级乙肝肝硬化组(P均<0.05)。LPC 14:0、LPC 16:0、LPC 18:0诊断乙肝相关性肝细胞肝癌的AUC分别为0.725(95%CI[0.606,0.843])、0.873(95%CI[0.807,0.936])和0.785(95%CI[0.693,0.876])。结论 LPC类物质对乙肝相关性肝细胞肝癌有较高的诊断价值,其含量高低能够反映肝脏损伤状态和储备功能,不同CTP分级患者间差异显著。

镁离子掺杂对Li_4Ti_5O_(12)/C结构和电化学性能的影响

以乳酸镁为Mg2+的掺杂源和部分碳源,以乙醇为溶剂,在惰性气氛下采用高温固相合成法合成掺Mg2+的Li4Ti5O12/C复合材料。采用X-射线衍射、扫描电子显微镜、激光粒度分析和电性能测试等对复合材料进行表征,考察了Mg2+对于目标化合物结构和电化学性能的影响。结果表明,在C/3倍率下材料掺杂前后第二个循环的放电容量分别为145、162 mAh/g,循环30次后容量为138、150 mAh/g。电化学交流阻抗表明,掺杂后的材料阻抗Rct从180Ω减小到45Ω。掺杂后振实密度比掺杂前提高了0.27 g/cm3。

甲胎蛋白、异常凝血酶原联合检测在肝细胞肝癌诊断中的临床意义

目的探讨血清肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)与异常凝血酶原(APT)联合检测在肝细胞肝癌(HCC)诊断中的临床意义。方法分别采用电化学发光法和酶联免疫法(ELISA)对48例HCC患者、34例肝硬化患者、30例体检健康者进行治疗前血清AFP和APT测定,并比较各组水平差异,用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价这两种血清标志物在诊断HCC中的临床价值。结果 HCC组、肝硬化组、正常组AFP测定值分别为(563.1±466.0)ng/mL、(18.7±10.4)ng/mL、(4.4±1.8)ng/mL,APT测定值分别为(707.2±415.4)mAU/mL、(25.4±8.7)mAU/mL、(11.8±2.6)mAU/mL,HCC组AFP、APT均高于其余两组(P<0.05)。单独检测诊断HCC时,AFP的灵敏度和特异度分别为72.9%、76.5%,APT的灵敏度和特异度分别为68.8%、91.1%,二者联合检测的灵敏度和特异度分别为89.6%、94.1%。ROC曲线显示:APT单独检测诊断HCC的曲线下面积(0.908)大于AFP(0.838),P<0.01。结论 AFP与APT联合检测是区分HCC和肝硬化良好的血清学指标,能更好地用于HCC的临床早期诊断。

脑梗死患者血尿酸与血脂及颈动脉斑块形成的关系

目的探讨脑梗死(CI)患者血清尿酸(UA)与血脂及颈动脉硬化斑块之间的关系。方法分别测定98例CI患者及49例体检健康者血清UA和血脂浓度,并对其中78例CI患者进行颈动脉超声检查。结果 CI组的血清UA为(310.88±90.91)μmol/L,显著高于对照组(266.96±55.04)μmol/L(P=0.000);CI患者的年龄和血清UA水平与颈动脉硬化斑块的形成呈明显正相关;甘油三酯和总胆固醇均升高的患者血清UA水平高于血脂正常、单纯高甘油三酯和单纯高总胆固醇的患者(均P<0.05)。结论血清UA升高与CI密切相关,其与患者血脂水平和颈动脉硬化斑块的形成有关,可作为诊断CI和颈动脉斑块形成的参考指标。

miRNAs在结直肠癌诊断中的价值和预后分析

虽然目前有一些新的治疗方法可以有效延缓结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者的复发,但早期诊断对提高治疗效果至关重要.诊断和监测结直肠癌的常规方法是便潜血试验(fecal occult blood test, FOBT)和结肠镜检,然而, FOBT并不敏感,结肠镜检费用较高,属于侵入性操作.微小RNAs(micro RNAs, miRNAs)作为监测CRC早期诊断和转移、治疗与预后的新型标志物,成为新的研究热点. miRNAs能在CRC组织、细胞和循环体液中检测出来,起抑癌或促癌作用.现就mi RNAs在CRC诊断和预后价值做一综述.

国内外研究生质量保障体系比较研究

研究生质量保障体系的建设是近二十年来国内外高等教育发展的一个新趋势。目前我国的教育体制改革尚未完成,研究生质量保障体系也处在积极的研究和探索中。从国际上看,各国对本国的高等教育质量都给予了很高的重视,并已初步形成了较为完善的质量保障体系,取得了一定的成功经验。本文结合我国的实际和国外的先进经验,提出了我国研究生质量保障体系建设中应进一步完善的几方面内容。

ROC曲线评价T细胞亚群在肝癌中的诊断价值

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发病率在我国居恶性肿瘤发病率的第2位。研究发现,机体的免疫功能状态与肿瘤的发生和发展密切相关,原发性肝癌患者在荷瘤状态下机体的免疫功能发生紊乱。一般认为肿瘤的免疫主要是细胞免疫,T淋巴细胞亚群是反映机体细胞免疫功能的一个指标。