大蒜素对脑胶质瘤C6细胞增殖和凋亡的实验研究

[目的]探讨大蒜素对体外培养的脑胶质瘤C6细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。[方法]培养脑胶质瘤C6细胞至对数生长期,不同浓度大蒜素作用下,于倒置显微镜及Hoechst33258荧光染色显微镜下观察C6细胞形态学变化;四甲基偶氮噻唑蓝法(tetrazolium salt colorimetry,MTT)检测不同浓度大蒜素对C6细胞增殖的影响并计算抑制率;钙依赖性磷脂结合蛋白-荧光素/碘化丙啶双染法(Annexin V-fluorescein/propidium iodide,Annexin V-FITC/PI)检测凋亡率;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期;蛋白质印迹法(western blotting,WB)检测Bax、Bcl-2基因的表达。[结果]大蒜素作用C6细胞24h后,于倒置显微镜观察可见C6细胞生长明显抑制,部分细胞皱缩变形,出现成泡现象;Hoechst33258荧光染色显微镜下观察发现凋亡的细胞,细胞的体积变大,核固缩、凝集,核染色质边集,出现浓染致密的颗粒块荧光信号,并随着大蒜素浓度增加表现越加明显。不同浓度(5、10、20、40、80μg·m L^(-1))大蒜素作用C6细胞(24h、48h、72h)后,细胞增殖受到抑制,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);同一浓度大蒜素作用C6细胞48h、72h后,与24h比,差异有统计学意义(P<0.01)。随着大蒜素浓度的增加,C6细胞凋亡率上升,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);其中80μg·m L^(-1)大蒜素显著抑制C6细胞增殖、诱导其凋亡,与各浓度大蒜素比,差异有统计学意义(P<0.01)。20μg·m L^(-1)大蒜素作用C6细胞24h后,与0μg·m L^(-1)大蒜素比G0/G1期细胞比例增加,S、G2/M期细胞比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。随着大蒜素浓度的增加Bax表达水平上升、Bcl-2表达水平下降,Bcl-2/Bax比值逐渐上升,与0μg·m L^(-1)大蒜素比较差异有统计学意义(P<0.01);其中80μg·m L^(-1)大蒜素与5、20μg·m L^(-1)大蒜素比,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]大蒜素能体外抑制C6细胞的增殖,并诱导其凋亡,其中80μg·m L^(-1)大蒜素作用最强,分子机制涉及调控Bax、Bcl-2基因的表达。