人工水和自然水环境中嗜肺军团菌mip基因分型

目的比较人工水体与自然水体环境中军团菌的mip基因差异。方法将2003-2008年间广州和新会两市水样中分离的121株嗜肺军团菌分为人工与自然水体环境分离株两组,分别对其mip基因进行系统进化树重建,基因多态性分析,分子方差分析与中性检验,并比较两种分离来源菌株的mip基因差异。结果 121株嗜肺军团菌mip基因按分离环境来源不均匀地分布在系统进化树的拓扑分支。人工水体环境分离株共有8个等位基因型,以等位基因1型为优势群,比例55.36%,自然水体环境分离株有11个等位基因型,以等位基因28型为优势群,比例40%。人工水体环境分离株的核苷酸多态性与平均核苷酸差异大于自然水体环境分离株。分子方差分析结果显示两种环境分离株mip基因差异占总体差异的14.43%。中性检验证明人工水体环境分离株的mip3′末端处,Tajima检验P<0.05,D值显著大于0。而自然环境分离株在此区域未见显著性差异。结论嗜肺军团菌mip基因在人工与自然水体环境分离株之间存在显著差异,这种差异可能来源于人工水体环境对嗜肺军团菌种群大小的影响或平衡选择作用。

广州市环境及空调冷却水中釜山军团菌的分离与鉴定

目的对广州市环境水源及中央空调冷却水中分离的两株疑似嗜肺军团菌进行分子生物学鉴定。方法通过培养特征、生化反应特性、军团菌属特异性引物PCR鉴定、PCR-酶切分型方法，16SrRNA基因、mip基因和rpoB基因序列分析，确定两株疑似嗜肺军团菌的分类地位。结果两株疑似嗜肺军团菌均为革兰氏阴性杆菌，在BCYEa平板上生长，36℃培养48h可见白色菌落，氧化酶、明胶液化与马尿酸水解实验均为阳性，尿素酶、硝酸盐还原实验阴性，按表型特征极易鉴定为嗜肺军团菌。军团菌属特异性引物PCR扩增阳性，PCR-酶切分型结果为单-226bp片段。16SrRNA基因、mip基因和rpoB基因序列比对与系统进化分析显示两株菌与釜山军团菌最相似。结论这是我国首次分离得到釜山军团菌，且同时存在于自然环境中和空调冷却塔水中；由于其生化特征，易错误鉴定为嗜肺军团菌，PCR-酶切分型与多基因鉴定的方法可有效鉴定釜山军团菌。

长滩军团菌荧光原位杂交探针的设计研究

目的设计一条特异性的长滩军团菌荧光原位杂交探针,并验证其特异性与敏感度,初步建立长滩军团菌的荧光原位杂交检测法。方法以长滩军团菌16S rRNA特异性位点设计杂交探针。在数据库中对探针序列进行特异性检验,优化反应条件,以军团菌标准菌株和环境分离菌株验证探针的特异性,并以模拟水样验证探针灵敏度。结果生物信息学分析表明,设计的探针LEG long序列与长滩军团菌16S rRNA序列完全配对,与其他军团菌种均存在1个碱基以上的错配。菌株验证实验证明LEG long探针可与长滩军团菌的标准菌株和环境分离株特异性杂交,与其他军团菌种和非军团菌属菌株无杂交信号。探针检测灵敏度可达1.49×103 CFU/ml。结论本研究设计的探针LEG long可用于长滩军团菌的高特异性和高灵敏度检测。

基因芯片在军团菌分型检测中的应用

基因芯片技术已广泛地应用于微生物研究中,它具有高通量、高时效性、重复性强等优点。本文主要阐述基因芯片技术的基本原理及其在军团菌检测、血清分型与分子分型等方面的应用概况。