菌种固定化技术生产香芋普洱茶醋的研究

以香芋和普洱茶为主要原料,采用菌种固定化技术生产香芋普洱茶醋。研究结果表明,固定化酵母菌发酵条件为初始糖度16.0%、接种量10.0%、发酵温度32℃;固定化醋酸菌发酵条件为起始酒精度8.0%、接种量10.0%、发酵温度34℃。香芋普洱茶醋色泽棕黄,具有香芋和普洱茶特有的风味。

亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞周期的影响及MPST过表达的干预

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO_2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Western blot法,分别检测细胞活力、细胞贴壁力、细胞周期及p53、CDC25A、CyclinA、CDK2等蛋白表达水平。结果经NaAsO_2处理48 h后,NC组细胞存活率、细胞贴壁率明显降低,而过表达MPST细胞上述变化明显得到改善(P<0.01)。同时,NaAsO_2明显上调BC、NC组细胞S期比例和p53蛋白表达,而下调CDC25A、CyclinA及CDK2蛋白(P<0.01);然而,过表达MPST则明显拮抗上述效应(P<0.05,P<0.01)。结论 NaAsO_2通过诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞,抑制细胞生长,而过表达MPST可拮抗NaAsO_2诱导的毒性效应。

MST过表达及亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞的影响

目的:探讨亚砷酸钠(NaAsO 2)、巯基丙酮酸硫转移酶(MST)基因过表达对SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法:将空载体转染细胞、MST过表达细胞各分为对照组、NaAsO 2组、TUDCA(内质网应激阻断剂)组、NaAsO 2联合TUDCA组,采用MTT、Western blot和酶活性检测等方法观察细胞活力、Bax、Bcl-2凋亡相关蛋白表达及Caspase-3活性。结果:50μmoL/L NaAsO 2暴露24 h显著降低空转组细胞活力和Bcl-2蛋白水平(P<0.01),增加Bax蛋白表达及Caspase-3活性(P<0.01);TUDCA预处理可以逆转以上变化,Bcl-2的蛋白表达则在MST基因过表达细胞砷暴露后发生显著增加,但可被TUDCA所拮抗(P<0.01)。结论:内质网应激可能参与砷、内源性H 2S对SH-SY5Y细胞损伤的影响。

亚砷酸钠诱导SH-SY5Y细胞凋亡及硫化氢的干预作用

目的:探讨亚砷酸钠(NaAsO 2)对SH-SY5Y细胞凋亡的影响,同时观察硫化氢(H 2S)的干预作用。方法:将SH-SY5Y细胞按24 h、48 h各分为对照组、NaAsO 2(20μmol/L)组、NaAsO 2(40μmol/L)组、NaHS(400μmol/L)组、NaHS+NaAsO 2(20μmol/L)组及NaHS+NaAsO 2(40μmol/L)组,采用Hoechst33342/PI双染法、流式细胞术和Western blot检测各组细胞形态、细胞凋亡及相关蛋白改变。结果:荧光显微镜观察发现,与对照组比较,20和40μmol/L NaAsO 2暴露24 h或48 h均剂量依赖性增加细胞凋亡率,20或40μmol/L NaAsO 2仅暴露48 h增加的凋亡率可被NaHS所拮抗(P<0.05),而20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h对凋亡的增长却不被NaHS所拮抗(P>0.05);流式细胞术检测显示,与对照组比较,20、40μmol/L NaAsO 2预处理24或48 h均诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,且呈浓度依赖性效应(P<0.05),20或40μmol/L NaAsO 2仅作用48 h所诱导的凋亡可被NaHS所逆转(P<0.05),而20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h对凋亡的增长却不被NaHS所拮抗(P>0.05);Western blot提示,20或40μmol/L NaAsO 2暴露24 h能够剂量依赖性增加cleaved Caspase-12蛋白表达、且该作用被NaHS所拮抗(P<0.05),NaAsO 2可以降低Caspase-12蛋白表达、但不被NaHS所逆转(P>0.05)。结论:外源性H 2S能抑制NaAsO 2诱导的细胞凋亡,可能与降低激活的Caspase-12蛋白表达有关。

砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。

“展览会+”引领会展行业走向智慧展览

互联网经济的迅速崛起,为实体经济、传统展览行业带来巨大冲击和变化,展览行业不再停留于过去以线下为主的传统模式。中国超过90%的展览会都有了自己的线上平台,大数据互联网时代毋庸置疑地促进了会展行业的转型升级。展览行业正向与互联网融合、新科技运用、跨界合作方面深度推进,从而带动传统展会在组织形式、技术手段、运作方式等方面发生深刻变革,使会展的功能、形态、规模产生重大转型。

问题引领在小学数学教学中的应用研究

在小学课程之中,数学属于重要学科,通过数学教学能够有效培养儿童的数学思维以及数学能力。但因为数学具有较强的抽象性,儿童对抽象知识进行学习期间会遇到不少困难,进而对其学习效率产生影响。基于此,本文旨在对小学时期数学教学当中问题引领这种方法的具体应用展开探究,希望能为实际教学提供些许参考。

MPST基因慢病毒载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达

为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染293T细胞,用获得重组的慢病毒液感染SH-SY5Y细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达MPST基因的(SH-MPST)细胞株。采用Real-time PCR和Western blotting以及ELISA等方法对筛出来的SH-MPST中的MPST的表达及功能进行鉴定。与空转染组(SH-PEB)相比,SH-MPST细胞中MPST mRNA及蛋白的表达水平显著增加,且细胞内MPST酶活性、酶含量及细胞释放硫化氢的水平均显著增加(p<0.05)。以上研究表明,MPST基因慢病毒表达载体成功构建,并获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,这将为MPST功能的深入研究提供依据。