降香提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的抗炎、抗氧化作用和对人毛乳头细胞的促毛发生长作用

目的:探讨降香提取物(DOE)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞的抗炎及抗氧化作用及其对人毛乳头细胞(h DPCs)的促毛发生长作用。方法:将RAW264.7细胞分为空白对照组、模型组、4%DOE组和8%DOE组。空白对照组不予处理,模型组使用LPS诱导体外炎症模型,4%DOE组和8%DOE组用LPS处理后分别加入4%和8%的DOE,分别采用Griess法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内的活性氧(ROS)含量。体外培养人毛囊分离的hDPCs,设置空白对照组、4%DOE组和8%DOE组,采用CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR法检测毛发生长因子CTNNB1和毛发抑制因子DKK1基因的表达,western blotting法检测β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果:与模型组相比,4%DOE组和8%DOE组RAW264.7细胞NO、TNF-α、ROS含量降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,4%DOE组和8%DOE组hDPCs细胞活力升高,CTNNB1基因和β-catenin蛋白表达上调,且DKK1基因表达下调(均P<0.05)。结论:DOE对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞具有抗炎和抗氧化作用,并且可以通过增加hDPCs的活力及调节关键基因的表达促进毛发生长。

基于Jurkat细胞分析circ_0006689对系统性红斑狼疮中IL2的作用及机制研究

目的:在Jurkat细胞基础上初步探讨circ_0006689在系统性红斑狼疮(SLE)中调控白介素2(IL2)的作用机制。方法:使用慢病毒转染Jurkat细胞构建circ_0006689低表达株。用PMA、PHA活化低表达组(si-circ_0006689组)、病毒空载组(si-NC组)及未转染组(control组)细胞后通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组IL2、miR-95-5p的相对表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞IL2浓度;生物信息学分析预测circ_0006689的目标miRNA及IL2的目标miRNA;双荧光素酶报告实验检测circ_0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2的靶向关系。结果:Jurkat细胞活化后IL2分泌显著增加(P<0.05);下调circ_0006689后细胞IL2表达及分泌减少(P<0.05),miR-95-5p表达水平显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验提示circ_0006689与miR-95-5p、miR-95-5p与IL2存在结合作用。结论:在Jurkat细胞中低表达circ_0006689可抑制IL2的表达;miR-95-5p可分别与circ_0006689、IL2结合;circ_0006689可能在SLE中通过竞争性结合miR-95-5p影响IL2的表达及分泌。

环状RNA hsa_circ_0008647在系统性红斑狼疮PBMC中的表达及意义的初步研究

目的:验证环状RNA hsacirc0008647在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中差异表达并探讨其临床意义。方法:选取SLE患者31例作为病例组(SLE组)、健康志愿者35例作为健康对照组(HC组);采用RT-qPCR检测PBMC中hsacirc0008647表达水平,并将其与临床参数进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)评价hsacirc0008647作为诊断指标的临床价值。结果:SLE组PBMC中hsacirc0008647表达较对照组显著升高(P<0.001),但与临床活动性参数无相关性(均P>0.05)。采用ROC曲线评估hsacirc0008647作为SLE诊断指标,敏感性为93.55%,特异性为74.29%,其敏感性优于抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)、抗Sm抗体及抗核小体抗体(AnuA)(均P<0.001);当使用抗dsDNA抗体、抗Sm抗体及抗核小体抗体分别与hsacirc0008647进行联合检测时,其敏感性可分别提高到83.87%、80.65%、80.65%,均较单一抗体明显提高(均P<0.001)。结论:hsacirc0008647在SLE患者中具有较高的敏感性和特异性,联合运用可提高特异性抗体抗dsDNA抗体、抗Sm和抗核小体抗体等指标的敏感性,但与疾病活动性无明显相关。

光老化人角质形成细胞模型的构建

目的:探讨中波紫外线(UVB)辐射导致人角质形成细胞(HaCaT细胞)光老化的模型构建及机制研究。方法:体外培养HaCaT细胞分为空白组和实验组,模型组细胞用不同照射剂量的UVB照射,空白组细胞不予紫外线照射,采用CCK-8法检测细胞相对活力,筛选出最适合的照射剂量用于建立光老化模型;应用同样的方法体外培养HaCaT细胞,分为空白组和模型组,模型组细胞使用筛选出的UVB照射剂量,空白组细胞不予紫外线照射,应用试剂盒检测光老化细胞模型的相关因子。结果:照射剂量为60 mj/cm2时,细胞增殖率接近空白组的50%(P<0.05),最适合建立光老化模型;与空白组比较,模型组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量均升高(均P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)含量及总抗氧化能力(T-AOC)水平均降低(均P<0.05);白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量均升高(均P<0.05)。结论:UVB照射剂量60 mj/cm2最适合用于建立光老化人角质形成细胞模型,可能是UVB照射导致HaCaT细胞光老化与细胞内的抗氧化水平降低、炎症因子含量升高有关。

TLR9-MYD88-TARF6-IRF5信号通路与系统性红斑狼疮患者疾病活动的相关性研究

目的:探讨TLR9-MYD88-TRAF6-IRF5信号通路在系统性红斑狼疮(SLE)中的调控作用。方法:选取2016年5月至2017年10月广西医科大学第一附属医院收治的SLE患者38例为观察组,另选取同期在本院进行体检的19例健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两组血清中干扰素α(IFN-α)水平,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测两组外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体9(TLR9)、接头蛋白髓系分化蛋白88(MYD88)、肿瘤坏死因子相关受体因子6(TRAF6)、干扰素调节因子5(IRF5)mRNA相对表达量。结果:观察组血清IFN-α水平及PBMC中TLR9、MYD88、TRAF6、IRF5mRNA水平均较对照组明显升高(均P<0.05)。在观察组中,TLR9的表达量与MYD88、TRAF6、IRF5、IFN-α的表达量及系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)均呈正相关关系(P<0.05),与补体C3、补体C4的表达量呈负相关关系(P<0.05);MYD88、TRAF6、IRF5的表达量均与SLEDAI呈正相关关系(P<0.05)。结论:TLR9-MYD88-TRAF6-IRF5信号通路可能参与SLE发病的过程,该信号传导途径的激活可能与疾病活动相关。

环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮中的分子机制的初步研究

目的:研究环状RNA hsa_circ_0006689在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达并初步分析其分子机制。方法:选取广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2019年3月至2020年9月收治的SLE患者30例(观察组)和健康志愿者34例(对照组),采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测hsa_circ_0006689在PBMC中的表达。验证hsa_circ_0006689的一般生物学特性。双荧光素酶报告基因实验验证hsa_circ_0006689、hsa-mir-1255a的靶向结合关系。对hsa_circ_0006689进行生物信息学分析,分析其调控网络,预测潜在的生物学功能。结果:与对照组比较,观察组PBMC中的hsa_circ_0006689表达明显降低(P<0.01);hsa_circ_0006689可以耐受RNase消化。hsa_circ_0006689可以靶向结合hsa-mir-1255a(P<0.001)。生物信息学分析发现,与hsa_circ_0006689相关的靶基因与跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号转导途径及TGF-β信号通路等免疫相关通路有关。结论:hsa_circ_0006689可能通过靶向结合hsa-mir-1255a来调节跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号转导途径及TGF-β信号通路,从而影响了SLE的发生发展,并且有潜力成为帮助SLE诊断和评估病情的生物标志物。

核纤层蛋白病小鼠模型的研究进展

LMNA基因编码A型核纤层蛋白(lamin),其突变导致一系列复杂多样的遗传病。目前,人们已经发现了900多个LMNA基因突变,这些突变造成多种表型各异的核纤层蛋白病(laminopathies)。如:下颌骨锁骨发育不全(mandibuloacral dysplasia,MAD)、埃-德型肌营养不良(Emery-Dreifuss muscular dystrophy,EDMD)、早老症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)等。研究者为了更好的了解核纤层蛋白病的分子机制以及治疗药物筛选,已经构建了一系列LMNA基因突变的小鼠品系,这些小鼠模型为了解核纤层蛋白的功能和及其在个体生长发育中的作用提供了有价值的研究材料。本文就核纤层蛋白病小鼠模型进行综述,并讨论了它们在核纤层蛋白病和生理性衰老中的意义。

降真香水提取物对光老化角质形成细胞模型的保护作用及其机制研究

目的探讨降真香水提取物对中波紫外线诱导的人角质形成细胞(HaCaT)光损伤的保护作用及机制。方法2018年12月至2020年4月,在广西医科大学基础医学院遗传学实验室进行实验。用前期构建的光老化角质形成细胞模型,用不同浓度降真香水提取物与细胞共培养,用CCK-8法检测细胞增殖率,用试剂盒检测细胞氧化指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、总抗氧化能力(T-AOC)水平,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、ɑ-肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果浓度为0.5~2.0 mg/L降真香水提取物对HaCaT细胞增殖有促进作用,与对照组比较,实验组HaCaT细胞增殖率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,实验组细胞ROS含量显著降低(F=214.67,P<0.05),MDA含量显著降低(F=811.88,P<0.05),SOD含量升高(F=28.95,P<0.05),CAT含量升高(F=213.31,P<0.05),GPx含量升高(F=65.10,P<0.05),T-AOC水平升高(F=305.58,P<0.05),IL-1β含量降低(F=15.46,P<0.05),IL-6含量降低(F=59.2,P<0.05),TNF-α含量显著降低(F=33.13,P<0.05)。结论0.5~2.0 mg/L降真香水提取物对光老化细胞模型有保护作用,可能与其提高光老化HaCaT细胞内SOD、CAT、GPx等抗氧化酶活力及T-AOC水平,降低ROS、MDA含量,降低炎性细胞因子表达有关。