稀土元素及其配合物生物学效应研究进展

近年来,稀土在生命科学领域的研究不断深入,发现其具有独特的生理生化特性,同时还有很好的抗菌、消炎、抗肿瘤等作用。并且在探索抑菌机理的理论基础上,稀土元素这些独特的性质得到了广泛的应用,本文论述了稀土元素在抑菌,抗病毒,抗肿瘤等方面的研究进展及其应用。

稀土元素Eu络合物的合成及其抑菌性能

利用稀土元素Eu,以α-萘甲酸、β-萘甲酸、α-萘乙酸、β-萘乙酸作为络合物的第1配体,以1,10-邻菲口罗啉作为络合物的第2配体,合成了4种稀土络合物:Eu(α-NMA)3phen.H2O,Eu(α-NAA)3phen,Eu(β-NMA)3phen.H2O,Eu(β-NAA)3phen.成品为固体白色干燥粉末,热稳定性较好.通过滤纸条扩散法对所合成稀土络合物进行了抑菌性能测定,发现稀土络合物较单纯的稀土离子及配体对不同菌株均表现较强的抑制作用,具广谱抗菌性能;采用滤纸片扩散法,对所合成的稀土络合物以及相应配体的抑菌能力进行测定并比较,Eu(α-NMA)3phen.H2O稀土络合物的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)分别是:MIC12为43.5μg/mL,MIB12为87μg/mL.根据稀土元素在紫外激发下发荧光的原理,通过荧光倒置显微镜观察,对稀土络合物的菌体作用位点进行了初步的定位;利用电子扫描显微镜观察了络合物对菌体形态的影响,结果表明稀土络合物对菌体生长的抑制,可能是先破坏菌体的表面结构,包括细胞膜和细胞壁,进而进入细胞内部,影响细菌细胞的生命活动.

白藜芦醇诱导前列腺癌细胞系PC-3凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇诱导前列腺癌细胞系PC-3细胞凋亡的作用。方法采用MTT比色法检测白藜芦醇对前列腺癌细胞系PC-3细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术检测前列腺癌细胞系PC-3细胞周期阻滞、诱导凋亡情况;采用RT-PCR法检测相关凋亡基因m RNA表达的情况。结果 B、C、D组PC-3细胞均有不同程度的抑制。24、48、72 h C、D组细胞生长抑制率高于B组,D组细胞生长抑制率高于C组(P<0.05)。B、C、D组48、72 h细胞生长抑制率高于24 h,72 h细胞生长抑制率高于48 h(P<0.05)。S期、G2/M期细胞比例明显下降,G0/G1期细胞比例明显上升,且随药物浓度的增加,凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。C、D组PC-3细胞bcl-2表达水平低于A组,D组低于B组(P<0.05);B、C、D组PC-3细胞bax表达水平高于A组,C、D组高于B组,D组高于C组(P<0.05)。结论白藜芦醇具有诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、阻滞细胞周期等作用,能达到很好的抗肿瘤效果,值得临床上广泛应用。

绵羊肺炎支原体Y98 P26-P40融合基因的表达及免疫原性

根据猪肺炎支原体(Mycoplasma Hyopneumoniae,Mhp)外膜蛋白P30基因和P46基因序列设计引物,通过PCR克隆了绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)标准株Y98膜蛋白P26基因和P40基因片段。通过对该序列的同源性分析表明MO P26基因与Mhp P30基因核酸序列同源性为79%,MO P40基因与Mhp P46基因核酸序列同源性为74%。分别将MO P26基因、MO P40基因以及P26-P40融合基因与原核表达载体pET28a连接构建了表达质粒pET28a-P26,pET28a-P40,pET28a-P26-P40,并转化受体菌BL21(DE3)得到重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26),BL21(DE3)(pET28a-P40),BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)。经IPTG诱导后SDS-PAGE表明有26 000,40 000和66 000左右的目的条带出现;Western blotting表明表达的目的蛋白具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26),BL21(DE3)(pET28a-P40),BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)表达的蛋白对小鼠的保护率分别为90%,90%和100%;重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)表达的蛋白对绵羊的保护率为85%。本试验结果为研制绵羊肺炎支原体基因工程疫苗奠定了坚实的基础。

采用LC-ESI/MS方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分含量

目的:建立同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分(升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A)含量的LC-ESI/MS方法。方法:通过优化,建立了如下方法同时测定荆防败毒口服液中4个有效成分(升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A):采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),柱温为30℃,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~10 min,90%A→0%A;10~11 min,0%A→90%A;11~13 min,90%A),流速0.2 m L·min^(-1),分析时间为13 min,进样量1μL;采用ESI正负离子模式,多反应监测(MRM),应用Masslynx V4.1软件进行数据分析。结果:升麻素苷、紫花前胡苷、二氢欧山芹醇当归酸酯和欧当归内酯A能够在13 min内完全分离,质量浓度在一定范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2>0.998),日内精密度RSD为0.19%~0.68%,日间精密度RSD为0.74%~1.9%,重复性RSD为0.11%~1.9%,稳定性RSD为3.3%~8.6%,加样回收率在97.7%~102.3%(RSD为0.50%~2.7%);测得的4批样品中升麻素苷、二氢欧山芹醇当归酸酯、紫花前胡苷和欧当归内酯A的含量范围分别为2.27~2.52、6.35~7.06、143.14~180.534和0.076~0.186μg·m L^(-1)。结论:该方法可以用于荆防败毒口服液中4个有效成分的含量测定和质量控制。

42例流产组织、257例羊水样本和59例脐带血样本全染色体SNP基因芯片分析

目的对流产组织、羊水样本和脐带血样本进行全染色体SNP基因芯片分析,以明确SNP基因芯片在这些样本类型中的检测意义。方法结合常规染色体G显带技术和Cyto-12 SNP基因芯片对收集到的检材实施检测,严格参照检测说明和实验实施流程。结果 47.62%的流产组织、11.28%的羊水样本和11.86%的脐带血样本检出基因拷贝数变异,家系分析结果也证明了部分拷贝数变异具有遗传性。结论基因芯片检测的分辨率较传统核型高,适用于较难实施细胞培养的检测样本,或者有明显症状但常规核型分析未检出异常的样本。目前基因芯片无法分析染色体的结构变异,因此在产前诊断时在完成基因芯片检测的同时,常规核型分析也需要同步实施。