HO1工程化无细胞提取液联合石墨烯远红外光促糖尿病溃疡修复的疗效及机制

目的探讨HO1工程化无细胞提取液(CE)联合石墨烯远红外光(FIR)在糖尿病溃疡创面修复中的疗效及机制。方法将40只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠建立正常创面模型(对照组,n=8)及糖尿病溃疡模型(n=32),其中将糖尿病溃疡模型小鼠随机分为糖尿病组、HO1BMSCs-CE组、FIR组、联合组。构建过表达血红素氧合酶1(HO1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs),获取工程化富含HO1蛋白的无细胞提取液(HO1BMSCs-CE),运用Western blot、ELISA、RT-PCR、Masson染色、免疫组化等检测各组创面愈合率、组织修复情况、创面氧化应激及炎症水平等。结果Western blot及ELISA检测结果显示,HO1BMSCs-CE中HO1、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β)表达水平显著高于BMSCs-CE(P<0.05)。治疗后第5、11天,联合组的创面愈合率均显著高于HO1BMSCs-CE组和FIR组(P<0.05)。与HO1BMSCs-CE组及FIR组相比,联合组在治疗后第3、7、11天创缘组织中Ca2+浓度较高,TNF-α、IL-6表达水平较低,而ROS水平仅在治疗后第3、7天较低(P<0.05)。治疗后第14天,联合组创面组织的表皮厚度较厚,真皮Masson染色胶原容积分数和VEGF免疫阳性信号OD值均显著高于FIR组和HO1BMSCs-CE组(P<0.05);治疗后第7天,联合组创面组织中凋亡相关蛋白Caspase-3表达水平显著低于FIR组和HO1BMSCs-CE组(P<0.05)。结论糖尿病溃疡创面中运用工程化富含HO1蛋白的HO1BMSCs-CE联合石墨烯FIR治疗可明显抑制局部组织氧化应激反应,减少炎症因子释放和细胞凋亡发生,加快创面区域皮肤组织上皮化形成、真皮胶原和血管增生,较HO1BMSCs-CE或FIR治疗的促愈疗效更为突出,为探索临床糖尿病难愈性创面的新型联合治疗提供了基础研究证据。

纳米脂质体修饰齐墩果酸通过上调caspase-3表达抑制胶质瘤细胞增殖与迁移的研究

神经胶质瘤是最常见的高恶性度和预后不良的颅内肿瘤,传统手术、放化疗等疗效欠佳,探索新型治疗药物意义重大。齐墩果酸是一种传统中药的提取物,已有研究证实其在血液、肝等系统具有抗肿瘤效应。但受限于其大分子量和低溶解度,颅内抗胶质瘤的效应尚不明确。纳米载药系统是通过纳米脂质体的修饰后达到调节释药的速度,增加生物膜的透过性、提高生物利用度等的新型给药系统。本研究构建齐墩果酸的纳米脂质体修饰体,运用胶质瘤U87细胞系和裸鼠颅内原位移植瘤模型,研究齐墩果酸的抗胶质瘤效应。

膜联蛋白A6促进神经祖细胞定向少突胶质细胞分化发育的机制研究

目的探讨膜联蛋白A6(annexin A6,AnxA6)调控神经祖细胞(neural progenitor cells,NPCs)定向少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)分化的作用机制。方法构建AnxA6基因敲减(AnxA6敲减组)和过表达(AnxA6过表达组)病毒载体,以空载体作为对照组。运用qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色、活细胞钙成像等技术,对比检测AnxA6敲减与过表达后,体外培养的NPCs胞内Ca^(2+)的动态变化差异及其对定向分化转录因子Olig2(定向OLs)、Hes1、Ascl1等表达的影响,评估AnxA6对NPCs分化过程的影响。结果与对照组相比,AnxA6敲减组未见明显AnxA6蛋白条带(P<0.05),而AnxA6过表达组阳性蛋白条带光密度值显著升高(P<0.01);NPCs分化1 d后在静息状态下,AnxA6过表达组细胞可见胞内Ca2+自发振荡的频率和振幅均高于对照组和AnxA6敲减组;在NPCs分化3 d的细胞中,可见AnxA6过表达组Olig2 mRNA表达升高,而Hes1、Ascl1 mRNA则表达减少;Olig2荧光阳性细胞的百分率升高,CNPase荧光信号代表的髓鞘分布增大;同时突起形成相关细胞骨架因子Vimentin、Fyn mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论过表达AnxA6不仅能增强NPCs分化早期细胞内Ca^(2+)的动力变化,还促进OLs定向转录因子的表达,加快髓鞘形成。