人肝癌细胞差异表达基因纤维蛋白原γ-多肽的克隆与鉴定

背景与目的:肝细胞癌(肝癌)的发生、发展与基因的异常表达有关,但详细机制还不清楚,原因在于目前所知的遗传学信息尚欠充分;本研究旨在探索新的人肝癌细胞差异表达基因。方法:应用抑制性消减杂交技术获得肝癌细胞消减cDNA,以T/A方法进行克隆,通过DNA测序分析、Northern印迹杂交、cDNA末端快速扩增(rapidamplificationofcDNAend,RACE)和RT-PCR等方法加以鉴定。结果:在被克隆的消减cDNA之中,一个长度为787个核苷酸的差异表达cDNA片段经Northern印迹分析,发现其在两种人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2中的表达均明显高于正常肝细胞;经过RACE后获得一个长度为1597bp、具有3'端polyA结构的基因序列,它含有完整的开放阅读框,编码437个氨基酸,经同源性分析证实该基因为编码人纤维蛋白原γ-多肽(fibrinogengammapolypeptide,FGG)的基因;RT-PCR分析证明癌组织中FGGmRNA表达水平较癌旁非癌组织明显增加,尤其是在肝癌转移灶中。结论:SMMC-7721和HepG2细胞中发现FGG高表达,FGG基因的上调表达是肝癌病理过程中一个重要分子事件。

头孢曲松钠与1，2-萘醌-4-磺酸钠的光度分析及应用

建立了用1，2-秦醌-4-磺酸钠（NQS）作为显色剂，分光光度法测定头孢曲松钠的新方法。在pH=13．0的缓冲溶液中，NQS与头孢曲松钠发生亲核取代反应生成1：1的红褐色配合物，其最大吸收波长488nm。方法线性范围为2．4～168mg／L，相关系数r=0．9993，检出限为1．3mg／L。该法成功应用于针剂中头孢曲松钠含量的测定，回收率在98．29／6～101．6％。

肝细胞癌患者D-二聚体和γ-纤维蛋白原多肽的改变

目的 探讨在肝细胞癌 (HCC)患者中 D-二聚体和 γ-纤维蛋白原多肽 (FGG)的生化改变及其临床意义 .方法 采用酶联免疫吸附反应定量检测了 5 7例 HCC患者的血浆 D-二聚体 ,通过 RT- PCR分析了编码 FGG的 m RNA在病变组织的转录水平 .结果 HCC患者的血浆 D-二聚体含量(0 .81± 0 .2 1) m g· L- 1 显著高于正常对照组 (0 .15± 0 .0 7)mg· L- 1 (P<0 .0 1) ;在各临床分期之间 D-二聚体含量差别非常明显 ,尤以转移期癌 D-二聚体测定值的升高最为显著 .FGG的 m RNA在癌组织中的表达较癌旁非癌组织明显上调 ,同时还发现这种表达增强与淋巴结转移相关 .结论 D-二聚体的异常增高、FGG m RNA的高表达与 HCC的临床分期和淋巴结状况关系密切 .

MiR-100对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1蛋白表达的作用

目的探讨microRNA-100(miR-100)对肝癌细胞有丝分裂阻滞及Polo样激酶1(PLK1)表达的作用。方法采用实时定量PCR和免疫荧光方法检测miR-100和PLK1在人肝癌细胞HepG2中的表达。利用Oligofectamine脂质体介导将Cy3荧光标记的miR-100模拟物瞬时转染HepG2细胞,分析细胞有丝分裂和PLK1蛋白表达情况。结果肝癌细胞HepG2的miR-100表达量低于正常肝细胞,而PLK1 mRNA和蛋白表达却异常升高。在miR-100模拟物转染后48h,实验组细胞有丝分裂指数显著小于对照细胞,经Western blotting分析显示,实验组细胞PLK1蛋白表达水平较对照组细胞均显著减低。同时免疫细胞化学检测发现,在有丝分裂中晚期和末期位于细胞核内的PLK1蛋白基本消失。结论 miR-100具有抑制PLK1蛋白表达的作用,可引起肝癌细胞有丝分裂阻滞。

硝普钠分光光度法测定对乙酰氨基酚

建立了硝普钠分光光度法测定对乙酰氨基酚的方法。研究表明:在碱性条件下,对乙酰氨基酚与硝普钠以1∶2的化学计量比反应形成一种绿色产物,其最大吸收波长为698nm。对乙酰氨基酚在1.7～102μg·mL-1浓度范围内与吸光度成良好线性关系,线性回归方程为A=0.02804+0.02285c(μg·mL-1),线性相关系数r=0.9986,表观摩尔吸收系数ε698=3.5×103L·mol-1·cm-1,检测限(3s·k-1)为1.42μg·mL-1。本方法成功应用于药物样品中对乙酰氨基酚含量的测定,回收率在97.6%～102.0%,结果满意。

D-二聚体在肝硬化和肝细胞癌患者血浆中的含量分析

目的探讨肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)患者血浆D-二聚体(D-dimer)含量与临床分期的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测40例LC和57例HCC的血浆D-dimer。结果与正常对照组相比,LC组和HCC组的血浆D-dimer含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),特别是HCC组中同时伴有LC的患者。在LC组中,代偿期患者的D-dimer血浆含量明显低于失代偿期(P<0.01);在HCC组中,血浆D-dimer含量随肿瘤分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的逐步进展而升高(P<0.05,P<0.01)。结论LC和HCC患者血浆D-dimer含量的异常与临床分期密切相关,提示其可作为评价患者病情和鉴别诊断的参考指标。

“研究型学习”教学模式在分析化学教学中的应用

通过对分析化学教学现状的分析,提出了将"研究型学习"教学模式应用于药学分析化学教学的必要性、具体措施和方法,并对教学实践的效果进行了评价,提出了存在的问题和改进措施,旨在强化学生实践能力和创新能力的培养成效,提高分析化学的教学质量。

香紫苏油化学成分的GC-MS分析

利用GC/MS联用技术对香紫苏油的化学成分进行分离分析 ,共鉴定出 6 3种化学成分 ,主要成分为邻氨基苯甲酸芳樟酯、芳樟醇、环氧石竹烯、斯巴醇、石竹烯、大根香叶烯、α -松油醇、乙酸橙花醇酯、古巴烯、莰烯、D -烯、荜澄茄油烯等 ,分析结果为产品开发、调香等提供指导 .

纤维蛋白原在肝硬化和肝细胞癌患者血浆中的含量分析

目的探讨肝硬化(livercirrhosis,LC)和肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)患者血浆纤维蛋白原(fibrinogen,FG)含量与临床分期的关系。方法采用凝固比浊法对40例LC和57例HCC的血浆FG加以检测。结果与正常对照组(2.90±0.46)mg/L相比,LC组的血浆FG含量明显降低(1.81±0.83)mg/L,(P<0.01),其中肝功能代偿期为(1.89±0.34)mg/L,失代偿期为(1.53±0.26)mg/L,二者之间具有显著性差别(P<0.05)。相反HCC组的血浆FG含量(3.75±1.41)mg/L则显著高于正常对照组(P<0.01),并且随肿瘤不同分期(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)呈递增趋势。结论血浆FG含量异常与LC和HCC的临床分期密切相关,可作为评估患者病情和结局的重要生化指标。

CO_2对酸碱滴定终点现象影响分析的讨论

文章较详细讨论了CO2对以酚酞为指示剂的NaOH滴定HCl终点的影响,对微红色持续30 s不褪为终点这一传统的方法提出了质疑;解释了以酚酞为指示剂NaOH分别滴定HCl和邻苯二甲酸氢钾溶液终点颜色持续时间不同的原因;讨论了CO2对以甲基橙为指示剂的NaOH滴定HCl终点颜色变化的影响。

木瓜酸奶制作工艺的优化

【目的】优化木瓜酸奶的制作工艺条件,为研制新型的果蔬酸奶及营养强化乳提供新途径。【方法】以木瓜和鲜牛奶为原料,以成品酸奶为发酵剂,加入蔗糖、稳定剂,经杀菌、冷却后发酵制备果汁型酸奶,并通过单因素试验和正交试验优化木瓜酸奶制品的工艺条件。【结果】木瓜酸奶的最佳原料配比为鲜牛奶∶木瓜汁∶蔗糖∶发酵剂(光明益生菌发酵乳)∶稳定剂(CMC∶明胶=1∶1)=100∶30∶12∶60∶0.2,生产工艺为40℃发酵7 h后放入4℃冰箱冷藏12 h。在最佳工艺条件下制备获得的木瓜酸奶酸度为90.02°T,含蛋白质含量3.09 g/100 g,Ca、Fe、Zn含量分别为121.75、3.8575和5.0275mg/L。【结论】以木瓜和鲜牛奶为原料,以市售酸奶为发酵剂制备木瓜酸奶,其原料易得,方法简单可行,发酵时间短,尤其适合家庭式的生产制作。

MicroRNA-100对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响

目的:探讨microRNA-100(miR-100)对肝癌细胞增殖活力和细胞周期的影响及其可能机制。方法:通过脂质体介导将人工合成的miR-100模拟物及其阴性对照转染人肝癌HepG2细胞,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法检测转染后HepG2细胞的增殖活力,用流式细胞术判定细胞周期分布,并进一步用实时荧光定量RT-PCR和Western blotting分析Polo样激酶1(Plk1)的表达水平。结果:荧光显微镜下观察到经阳离子脂质体介导的细胞转染效率大于85%。转染miR-100模拟物的实验组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为(43.5±12.2)%、(46.5±3.7)%和(52.1±0.2)%,均显著高于对照组细胞(P<0.01),并且在72 h实验组细胞增殖指数(35.8±1.4)低于阴性对照组(39.2±1.0)和单纯脂质体组(40.7±2.0)(P<0.05)。同时与对照组相比,实验组细胞Plk1 mRNA和蛋白表达水平在转染miR-100后72 h明显降低(P<0.05)。结论:miR-100可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与其下调Plk1的表达有关。

毛叶香茶菜二萜成分的细胞毒活性研究

目的研究毛叶香茶菜的二萜成分及其细胞毒活性。方法利用硅胶柱层析分离和纯化毛叶香茶菜的二萜成分,用波谱分析方法鉴定其结构,用MTT法筛选其细胞毒活性。结果从毛叶香茶菜叶中分离鉴定14个已知对映-贝壳杉烷类二萜:effusainA(1),lasiodonin(2),skikokianin(3),rabdosichuaninD(4),oridion(5),lasiokaurin(6),1-αO--βD-glucopyranosyl-enmenol(7),rabdoterninA(8),epinodosin(9),epinodosinol(10),isodonal(11),isodonoiol(12),rabdosinB(13),rabdosinate(14);化合物1、2、3、5、6、9、11、12、13对人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人卵巢癌细胞(HO-8910)和人肺癌细胞(A-549)的生长表现出强的抑制作用。结论毛叶香茶菜富含具有细胞毒活性的对映-贝壳杉烷类二萜。

东风菜中甾体成分研究

目的研究东风菜化学成分及生物活性。方法利用硅胶柱层析进行分离和纯化化合物,用波谱分析鉴定其结构。结果从东风菜根中分离鉴定5个化合物:麦角甾-6,22-二烯-3β,5α,8α三醇(1);α-菠甾醇3氧βD葡萄糖甙(2);α-菠甾醇(3);胡萝卜甙(4);β-谷甾醇(5)。结论化合物1～4为首次从东风菜属植物中分离得到。

miRNA-100下调polo样激酶1表达促进肝癌HepG2细胞凋亡

目的:探讨microRNA-100(miR-100)对人肝癌HepG2细胞中polo样激酶1(polo-like kinase 1,Plk1)表达和细胞凋亡的影响。方法:通过oligofectamine介导,将miR-100 mimics转染入HepG2细胞中,RT-PCR和细胞免疫荧光法检测Plk1 mRNA和蛋白的表达,并采用AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测HepG2细胞的凋亡情况。结果:miR-100 mimics成功转染HepG2细胞,转染效率为(88.75±2.22)%。转染48 h后,miR-100 mimics组HepG2细胞Plk1 mRNA的表达水平明显低于阴性对照组、空白对照组和脂质体组[(0.71±0.01)vs(0.95±0.01)、(0.92±0.02)、(0.93±0.02),均P<0.01];转染72 h后,miR-100 mimics组Plk1蛋白几乎不表达,同时其细胞凋亡率明显高于阴性对照、空白对照组和脂质体组[(26.95±6.72)%vs(15.03±5.12)%、(6.88±3.71)%、(9.00±3.37)%,均P<0.05]。结论:miR-100能够抑制Plk1基因的表达,从而促进肝癌HepG2细胞的凋亡。

老年与青年大鼠大脑皮质及血清总胆固醇、三酰甘油和游离脂肪酸的对比分析

目的对比分析老年和青年大鼠大脑皮质及血清总胆固醇、三酰甘油和游离脂肪酸水平的变化。方法青年组(3月龄)和老年组(22月龄)大鼠各11只,大脑皮质及血清总胆固醇采用胆固醇氧化酶法测定,三酰甘油采用磷酸甘油氧化酶法测定,游离脂肪酸采用铜试剂显色法测定。结果与青年组大鼠比较,老年组大鼠大脑皮质和血清的总胆固醇水平显著增高(P<0.05),大脑皮质的三酰甘油水平显著增高(P<0.01),而大脑皮质和血清的游离脂肪酸水平显著降低(P<0.01)。结论大脑脂质成分的改变可能是脑老化的原因之一。

木槿花醇溶性色素的提取及其清除超氧自由基活性研究

测定了木槿花醇溶性色素在可见光区的最大吸收波长;在单因素试验的基础上,采用正交试验,以吸光度与浸提液总体积之积为指标,对提取温度、浸提时间、超声时间和料液比进行优选研究,采用邻苯三酚自氧化法考察该色素清除超氧自由基活性。结果显示最佳提取工艺条件为提取温度40℃,料液比1∶50(W/V,g∶mL),浸提时间1 h(包括超声时间45 min);该色素具有一定的清除超氧自由基活性。

青年与老年结直肠癌C -erbB - 2不同表达与DNA倍体的关系

目的 探讨青年和老年结直肠癌 (CRC)患者C -erbB - 2蛋白的表达与病理学和细胞DNA倍体的关系。方法 采用免疫组化法检测 63例青、老年CRCC -erbB - 2 ,流式细胞学分析青年和部分老年患者的DNA倍体。结果 C -erbB - 2蛋白阳性表达在 31例青年CRC中有 1 4例 (45 .2 % ) ,而 32例老年CRC中仅 4例 (1 2 .2 % ) (P <0 .0 1 ) ;癌的DNA非二倍体发生率青年组为 87.1 % (2 7/ 31 ) ,老年组为 2 8.6 % (4/ 1 4 ) (P <0 .0 0 1 )。在腺癌、高 -中分化、无局部淋巴结转移及浅度浸润的癌中 ,青年组C -erbB - 2蛋白的阳性表达和非二倍体发生率均高于老年组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 0 1 )。结论 青年和老年CRCC -erbB - 2蛋白表达不同与细胞DNA倍体密切相关 。

高校多媒体教学的发展方向

文章综合分析了多年来多媒体教学中的优点和缺点,从教学方法、开发方法以及基于网络的远程教育等方面指出了未来多媒体教学的发展趋势:一方面是和传统教学方法相结合,充分发挥双方的优势,达到最佳的教学效果;另一方面,具有更高交互性的网络多媒体教学课件和虚拟实验室也必将有着广阔的发展空间.基于团队的多媒体课件开发方法也是未来的发展趋势.

E_T(30)染料—2,4,6-三苯基-N-(2,6-二苯基酚氧负离子)-吡啶鎓盐的合成

采用价廉、易得的常规原料和试剂,合成了重要的溶剂极性经验参数ET(30)的标准物—2,4,6-三苯基-N-(2,6-二苯基酚氧负离子)-吡啶鎓盐.该方法设备简单,条件温和.