禽流感H9亚型一步法RT-PCR快速检测试剂盒的研制及应用

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感H9检测方法,本研究根据GenBank中收录的禽流感H9病毒高度保守的基因序列,设计1对H9的特异性引物,建立了一步法快速检测禽流感的PCR,对反应条件进行优化后,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的疑似禽流感病料进行检测。结果显示,试验成功建立了禽流感H9病毒一步法RT-PCR检测方法,在此基础上完成了试剂盒的组装,对30份疑似禽流感病料的检出率高达98%以上,检测灵敏度达101.5 ELD50,稳定性良好,冷冻保存期达12个月。经证实该试剂盒具有操作简便、经济、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。

鸡抗猪产肠毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价卵黄抗体的变化规律及喷干工艺的研究

为获得具有一定保护力的外源性抗体制剂,用于防治仔猪腹泻,利用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)标准菌株K88、K99、987P和导致仔猪副伤寒的2株沙门菌,制备产毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价的灭活苗,免疫接种待开产母鸡400羽,聚乙二醇沉淀法分离纯化卵黄抗体,然后采用直接试管凝集法检测不同时间的卵黄抗体(IgY)效价。将试验结束后无菌收集的全蛋液稀释过滤后,按照喷干设备进口温度165℃,出口温度85℃进行喷雾干燥,制备卵黄抗体粉,并对其进行表观性状及相关指标的测定。结果表明,免疫接种蛋鸡后,卵黄液中抗体IgY的效价呈现规律性变化,喷雾干燥获得的卵黄抗体粉表观性状较好,粗蛋白含量为12.6%,体外消化率高达95%,IgY的效价为1∶29。通过3次免疫接种获得了高免卵黄抗体,并进行了全蛋喷雾干燥工艺的摸索,制备出了效价较高的抗体制剂,为预防和治疗仔猪腹泻提供了一条途径。

产朊假丝酵母菌发酵降解棉酚的效果

棉粕经高温高压处理后,利用产阮假丝酵母对棉粕进行固体发酵脱毒,通过对生物量的测定,获得最适发酵脱毒条件,然后进行发酵降解棉酚实验,通过测定发酵终点和起始点棉酚的含量,获得产朊假丝酵母对棉酚的降解率。结果显示最适发酵条件为:发酵底物含水量为37%,发酵时间48h,发酵温度30℃,接种量为5%。对发酵前和发酵48h后的样品按照国家标准测定方法进行棉酚含量的测定,结果显示棉粕在发酵前后,棉酚去除率在85.7%左右。

禽流感通用型RT-PCR快速检测试剂盒

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感检测方法,根据禽流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立了快速检测禽流感的PCR一步法,并对反应条件进行优化,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的15份疑似禽流感病料进行了检测。结果显示,疑似禽流感病料检出率在100%以上。检测灵敏度达10^(1.5)ELD_(50),稳定性良好,冷冻至少能保存12个月。通过对临床样品的检测,证实该试剂盒具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。

猪瘟和猪蓝耳病病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）和猪蓝耳病病毒（Porcine respiratory and reproductivesyndrome virus,PRRSV）多重RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据GenBank中登录的CSFV和PRRSV疫苗株基因组序列,分别设计针对CSFV和PRRSV的两对引物,建立多重RT-PCR检测方法,并进行敏感性及特异性验证。用建立的多重RT-PCR法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料,并与市售RT-PCR试剂盒的检测结果进行比较;检测病料的部分PCR产物测序后,与9株具有代表性的CSFV毒株和10株具有代表性的PRRSV毒株进行核苷酸序列同源性比对。结果以CSFV和PRRSV混合引物扩增,分别可扩增出286和664 bp的特异性条带。建立的多重RT-PCR检测方法可检出100倍稀释的病毒RNA;该方法可检出CSFV、PRRSV及CSFV与PRRSV混合病毒,而猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Trans-missible gastro-enteritis virus,TGEV）、猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）和猪伪狂犬病病毒（Porcine pseudorabies virus,PRV）的检测结果均为阴性;该方法检测20份疑似猪瘟、猪蓝耳病或混合感染病料的结果与市售RT-PCR试剂盒比较,灵敏度达100%;选取的两份CSFV扩增片段与9株具有代表性的CSFV毒株的核苷酸序列同源性在92.3%~98.2%之间,扩增的PRRSV与10株具有代表性的PRRSV毒株的核苷酸序列同源性在94.1%~97.9%之间。结论成功建立了CSFV和PRRSV多重RT-PCR检测方法,为猪瘟和猪蓝耳病的早期诊断及流行病学调查奠定了基础。

新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据NDV F基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性;应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastle disease,ND)病料进行检测,并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H9亚型,仅NDV为阳性,IBDV和AIV H9均为阴性;该方法最低可检出约4 pg的NDV RNA;23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性,血凝及血凝抑制试验检出13份阳性,两种方法的阳性符合率为85%。结论建立了NDV一步法RT-PCR检测方法,该方法特异性良好,敏感度较高,用时较短,可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调查。

白羽肉鸡禽流感H9亚型与新城疫HI抗体消长规律以及数据分析

鸡新城疫(Newcastledisease,ND)是由属于副黏病毒科的新城疫病毒引起的各种年龄鸡的一种急性致死性传染病,又称"亚洲鸡瘟"或"伪鸡瘟"。