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口蹄疫病毒诱导PK-15细胞发生自噬的研究
被引量:
1
1
作者
范许许
郜原
+1 位作者
郭慧琛
孙世琪
《安徽农业科学》
CAS
2016年第16期160-163,共4页
[目的]探究Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能否诱导自噬的发生,分析细胞自噬对口蹄疫病毒复制的影响。[方法]用未经处理的PK-15细胞和自噬抑制剂3-MA处理的PK-15细胞分别感染口蹄疫病毒,通过蛋白免疫印迹和共聚焦激光显微镜检测自噬...
[目的]探究Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能否诱导自噬的发生,分析细胞自噬对口蹄疫病毒复制的影响。[方法]用未经处理的PK-15细胞和自噬抑制剂3-MA处理的PK-15细胞分别感染口蹄疫病毒,通过蛋白免疫印迹和共聚焦激光显微镜检测自噬的诱导情况。[结果]自噬标志分子LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白水平的比值增加,并且LC3特异的绿色荧光聚集;自噬抑制剂3-MA处理细胞后口蹄疫病毒复制水平显著上调。[结论]Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能够诱导发生自噬,而自噬又促进口蹄疫病毒的复制。
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关键词
口蹄疫病毒
自噬
LC3
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职称材料
非洲猪瘟病毒毒力因子MGF360-4L靶向降解RIPK3促进病毒复制的研究
2
作者
曹雪静
范许许
+9 位作者
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
张继燕
何路
李熙忠
任青峰
郑海学
万博
李伟伟
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期995-1001,I0001,共8页
本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响;通过蛋白免疫印迹(Western-blot)检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响;通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L);利用实...
本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响;通过蛋白免疫印迹(Western-blot)检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响;通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L);利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析ASFV野生毒株(ASFV-WT)与其缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L)复制水平的差异;通过Western-blot检测MGF360-4L缺失对ASFV诱导的细胞坏死的影响。结果表明,MGF360-4L包含1个RHIM,并通过溶酶体途径降解RIPK3,从而抑制细胞坏死通路的活化;MGF360-4L发挥上述功能依赖其RHIM结构域;ASFV-ΔMGF360-4L毒株复制水平低于野生毒株,且该缺失毒株能够诱导更高水平的细胞坏死。本研究证实ASFV毒力因子MGF360-4L依赖其RHIM结构域靶向降解RIPK3,并促进病毒自身复制,为ASFV致病机理的阐明提供了科学数据。
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关键词
非洲猪瘟病毒
细胞坏死
RHIM
RIPK3
MGF360-4L
原文传递
METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响
3
作者
张继燕
李伟伟
+10 位作者
范许许
曹雪静
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
何路
李熙忠
任青峰
张伟
王川
郑海学
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期1010-1018,共9页
利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的...
利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。
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关键词
METTL3
m6A修饰
口蹄疫病毒
原文传递
题名
口蹄疫病毒诱导PK-15细胞发生自噬的研究
被引量:
1
1
作者
范许许
郜原
郭慧琛
孙世琪
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
2016年第16期160-163,共4页
基金
国际科技合作专项(2014DFA31890)
国家科技支撑计划项目(2013BAD12B00)
文摘
[目的]探究Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能否诱导自噬的发生,分析细胞自噬对口蹄疫病毒复制的影响。[方法]用未经处理的PK-15细胞和自噬抑制剂3-MA处理的PK-15细胞分别感染口蹄疫病毒,通过蛋白免疫印迹和共聚焦激光显微镜检测自噬的诱导情况。[结果]自噬标志分子LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白水平的比值增加,并且LC3特异的绿色荧光聚集;自噬抑制剂3-MA处理细胞后口蹄疫病毒复制水平显著上调。[结论]Asia1型口蹄疫病毒感染PK-15细胞后能够诱导发生自噬,而自噬又促进口蹄疫病毒的复制。
关键词
口蹄疫病毒
自噬
LC3
Keywords
Foot and mouth disease virus
Autophagy
LC3
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
非洲猪瘟病毒毒力因子MGF360-4L靶向降解RIPK3促进病毒复制的研究
2
作者
曹雪静
范许许
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
张继燕
何路
李熙忠
任青峰
郑海学
万博
李伟伟
机构
河南农业大学动物医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期995-1001,I0001,共8页
基金
国家重点研发计划项目(2021YFD1801300,2021YFD1800300)
家畜重要疫病感染与免疫防控的基础理论研究项目(22ZD6NA001)
+9 种基金
中央高校基本科研业务费专项资金资助(学科交叉创新团队建设项目)(lzujbky-2022-ct02)
国家自然科学基金青年项目(32202781,32302857)
甘肃省青年科技基金计划项目(22JR5RA034)
中国博士后科学基金项目(2023M743830)
国家生猪产业技术体系项目(CARS-35,CARS-39-13)
国家生猪技术创新中心先导科技项目(NCTIP-XD/C03)
中国农业科学院创新计划项目(CAAS-CSLPDCP-2023002,CAAS-ASTIP-2023-LVRI)
“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2023SDZG02)
兰州兽医研究所基本科研业务项目(1610312021009)
家畜重要疫病诊断研制与产业化项目(22ZD6NA012)。
文摘
本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响;通过蛋白免疫印迹(Western-blot)检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响;通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L);利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析ASFV野生毒株(ASFV-WT)与其缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L)复制水平的差异;通过Western-blot检测MGF360-4L缺失对ASFV诱导的细胞坏死的影响。结果表明,MGF360-4L包含1个RHIM,并通过溶酶体途径降解RIPK3,从而抑制细胞坏死通路的活化;MGF360-4L发挥上述功能依赖其RHIM结构域;ASFV-ΔMGF360-4L毒株复制水平低于野生毒株,且该缺失毒株能够诱导更高水平的细胞坏死。本研究证实ASFV毒力因子MGF360-4L依赖其RHIM结构域靶向降解RIPK3,并促进病毒自身复制,为ASFV致病机理的阐明提供了科学数据。
关键词
非洲猪瘟病毒
细胞坏死
RHIM
RIPK3
MGF360-4L
Keywords
African swine fever virus
necroptosis
RHIM
RIPK3
MGF360-4L
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响
3
作者
张继燕
李伟伟
范许许
曹雪静
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
何路
李熙忠
任青峰
张伟
王川
郑海学
机构
甘肃农业大学动物医学院
中国农业科学院
河南农业大学动物医学院
甘肃农业大学生命科学技术学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第8期1010-1018,共9页
基金
国家自然科学基金青年项目(32202781,32302857)
国家重点研发计划项目(2021YFD1801300,2021YFD1800300)
+6 种基金
甘肃省青年科技基金计划项目(22JR5RA034)
中国博士后科学基金项目(2023M743830)
国家生猪产业技术体系项目(CARS-35,CARS-39-13)
国家生猪技术创新中心先导科技项目(NCTIP-XD/C03)
中国农业科学院创新计划项目(CAAS-CSLPDCP-2023002,CAAS-ASTIP-2023-LVRI)
“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2023SDZG02)
兰州兽医研究所基本科研业务费项目(1610312021009)。
文摘
利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。
关键词
METTL3
m6A修饰
口蹄疫病毒
Keywords
methyltransferase-like 3
N6-methyladenosine modification
foot-and-mouth disease virus
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
口蹄疫病毒诱导PK-15细胞发生自噬的研究
范许许
郜原
郭慧琛
孙世琪
《安徽农业科学》
CAS
2016
1
下载PDF
职称材料
2
非洲猪瘟病毒毒力因子MGF360-4L靶向降解RIPK3促进病毒复制的研究
曹雪静
范许许
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
张继燕
何路
李熙忠
任青峰
郑海学
万博
李伟伟
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
原文传递
3
METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响
张继燕
李伟伟
范许许
曹雪静
朱兆宇
裴丹诗
王一卓
何路
李熙忠
任青峰
张伟
王川
郑海学
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
原文传递
已选择
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