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异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用 被引量:2
1
作者 范贵荣 杨致邦 黄进 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1036-1040,共5页
目的探讨异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含128μg/ml异烟肼和无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含异烟肼的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养... 目的探讨异烟肼对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含128μg/ml异烟肼和无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含异烟肼的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含异烟肼和无异烟肼的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含异烟肼的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无异烟肼的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对返祖菌及诱导前接种菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无异烟肼的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。128μg/ml异烟肼浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论异烟肼成功诱导脓肿分枝杆菌L型,可用于脓肿分枝杆菌耐药机制和防治研究。 展开更多
关键词 脓肿分枝杆菌 L型细菌 异烟肼 细胞壁
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脓肿分枝杆菌耐利福平机制的研究 被引量:1
2
作者 范贵荣 杨致邦 +1 位作者 黄进 高继业 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1172-1176,共5页
目的探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析... 目的探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平机制中的作用。结果随着TWEEN-80、Trixon X-100、甲苯、乙醚、CCCP、利血平和泮托拉唑浓度的增加,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度逐渐降低。对于TWEEN-80、Trixon X-100、CCCP和泮托拉唑,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512μg/mL降至小于32μg/mL,0.1%的TWEEN-80、0.006 25%的Trixon X-100、0.1μg/mL的CCCP和32μg/mL的泮托拉唑为最适浓度;对于甲苯、乙醚和利血平,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512μg/mL降至64μg/mL,0.25%的甲苯、0.25%的乙醚和8μg/mL的利血平为最适浓度。它们均能促进利福平对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。结论细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平的机制中有重要作用。 展开更多
关键词 脓肿分枝杆菌 利福平 细胞壁通透性 主动外排
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利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用 被引量:1
3
作者 范贵荣 杨致邦 黄进 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期1717-1720,共4页
目的探讨利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含256μg/mL利福平和无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含利福平的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养... 目的探讨利福平对脓肿分枝杆菌L型的诱导作用。方法将脓肿分枝杆菌分别接种于含256μg/mL利福平和无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养。含利福平的培养物经0.45μm孔径滤膜过滤,滤液接种于无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基内返祖培养。将含利福平和无利福平的培养物及返祖菌进行细胞壁染色和透射电镜观察其细胞壁完整性,扫描电镜观察其表面微观结构。含利福平的培养物转种L型菌琼脂平板培养,无利福平的培养物和返祖菌转种营养琼脂平板培养,观察其菌落形态。对诱导前接种菌和返祖菌的16S rDNA进行鉴定。结果在含256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌的细胞壁缺失,形态为球形,L型细菌琼脂平板上菌落呈典型油煎蛋样,而无利福平的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上呈圆形菌落。256μg/mL利福平浓度的结核分枝杆菌快速液体培养基中培养的脓肿分枝杆菌经返祖后,返祖菌细胞壁完整,形态为杆状,营养琼脂平板上菌落也呈圆形。16S rDNA鉴定返祖菌与诱导前接种菌的同源性达100%,为同一种细菌,即脓肿分枝杆菌。结论利福平成功诱导脓肿分枝杆菌L型。 展开更多
关键词 脓肿分枝杆菌 L型细菌 利福平 细胞壁
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SIgA制备的研究进展 被引量:1
4
作者 范贵荣 杨致邦 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第z1期57-58,61,共3页
  分泌型IgA(Secretory immunoglobulin A,SlgA)是60年代初Chodircker和Tomasi等首先在外分泌液中发现的一种lgA,主要存在于乳汁、胃肠液、呼吸道分泌液等外分泌液中,为区别于血清型lgA而命名为SlgA[1].……
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幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定 被引量:1
5
作者 韩飞 杨致邦 +1 位作者 郭丽媛 范贵荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期340-345,共6页
目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp... 目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价。纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori培养;H.pylori定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori感染的免疫保护作用。结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0mg/ml。Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16。预防组H.pylori感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以降低H.pylori的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 hp1188基因 表达 免疫原性 体内试验
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白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系 被引量:1
6
作者 向瑜 杨致邦 +3 位作者 陈瀑 范贵荣 郭丽媛 成凤 《细胞生物学杂志》 CSCD 2009年第2期271-276,共6页
为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-... 为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。 展开更多
关键词 胃十二指肠疾病 基因多态性 幽门螺杆菌 白细胞介素-1 肿瘤坏死因子-Α
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新生儿白细胞直方图异常变化的原因分析
7
作者 张玉蓉 范贵荣 《中华临床医学杂志》 2006年第11期23-25,共3页
目的针对目前全自动血球仪在我国的普遍使用的现状,强调应重视血细胞显微镜检查。方法使用ABXMICROS 60-OT全自动血细胞计数仪计数25例足月新生儿,观察白细胞直方图的改变,井同时用显微镜分类计数。结果由于仪器的的局限性,难以对... 目的针对目前全自动血球仪在我国的普遍使用的现状,强调应重视血细胞显微镜检查。方法使用ABXMICROS 60-OT全自动血细胞计数仪计数25例足月新生儿,观察白细胞直方图的改变,井同时用显微镜分类计数。结果由于仪器的的局限性,难以对新生儿白细胞进行较完善的分类。结论新生儿外周血中杆状细胞增多,异型淋巴细胞增多或其它类型的异常导致白细胞直方圈的不规则多峰。所以只有加强血细胞显微镜检查,才能为临床提供高质量的检验结果,才能更有利于诊断和治疗。 展开更多
关键词 新生儿 镜检
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封闭负压引流联合万古霉素对慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损患者CRP、TNE-α、IL-6水平的影响 被引量:5
8
作者 范贵荣 徐明方 《中国医学工程》 2019年第10期10-13,共4页
目的研究封闭负压引流+万古霉素运用于慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损中的价值。方法选择该院2015年1月至2017年12月纳入的60例慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损患者,按照数字表法随机分为两组各30例,研究组采取封闭负压引流+万古霉... 目的研究封闭负压引流+万古霉素运用于慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损中的价值。方法选择该院2015年1月至2017年12月纳入的60例慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损患者,按照数字表法随机分为两组各30例,研究组采取封闭负压引流+万古霉素,对照组采取常规治疗,对比两组治疗结果及血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平。结果研究组骨吸收、骨缺损愈合时间短于对照组(P<0.05);治疗前两组VAS评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组评分低于对照组(P<0.05)。治疗前两组的CRP、TNF-α、IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组各指标水平均低于对照组(P<0.05)。两组1个月、3个月复发率差异无统计学意义(P>0.05),研究组6个月、1年的复发率低于对照组(P<0.05)。结论封闭负压引流+万古霉素运用于慢性骨髓炎创面不愈合及软组织缺损中效果明显,可缩短治疗时间,促进骨缺损愈合,改善炎症反应,减少复发率,为预后提供保障。 展开更多
关键词 白介素-6 万古霉素 慢性骨髓炎创面不愈合 封闭负压引流 软组织缺损
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射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血临床疗效对比 被引量:9
9
作者 高东霞 王普杰 +2 位作者 汪易辉 郝冰 范贵荣 《西南国防医药》 CAS 2014年第10期1100-1102,共3页
目的比较超声引导下射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血的疗效。方法选择2006年1月~2013年1月确诊为功能性子宫出血的110例患者,根据手术治疗方式分为射频消融术组(观察组)和宫腔镜电切术组(对照组),比较两组手术时间、... 目的比较超声引导下射频消融术与宫腔镜电切术治疗功能性子宫出血的疗效。方法选择2006年1月~2013年1月确诊为功能性子宫出血的110例患者,根据手术治疗方式分为射频消融术组(观察组)和宫腔镜电切术组(对照组),比较两组手术时间、术中出血、住院天数、治疗效果等。结果手术时间:观察组6~15(7.5±2.2)min,对照组16~45(25.4±4.3)min;术中出血:观察组0~5(1.0±0.5)ml,对照组10~50(30.0±6.5)ml;住院天数:观察组0~2(0.3±0.1)d,对照组3~6(4.2±1.1)d。两组均有显著性差异(P〈0.01)。治疗效果:观察组55例中,治愈46例,有效9例;对照组55例中,治愈25例,有效15例,好转10例,无效5例,观察组疗效显著优于对照组(P〈0.01)。结论与宫腔镜电切术比较,射频消融术治疗功能性子宫出血具有手术时间短、术中出血少、治愈率高、无需住院等优点,并且操作简单,易于掌握。 展开更多
关键词 功能性子宫出血 射频消融术 宫腔镜电切术
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甲胎蛋白与α-L-岩藻糖苷酶联合检测在原发性肝癌诊断中的价值 被引量:1
10
作者 黄勇 杨其江 +2 位作者 王普杰 陈静 范贵荣 《中国医刊》 CAS 2013年第10期51-52,共2页
目的研究甲胎蛋白(AFP)与α-L-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测在原发性肝癌中的诊断价值,分析其敏感性及特异性。方法分别用电化学发光免疫分析法及全自动生化速率法检测50例原发性肝癌患者血清AFP和AFU水平含量,并与同期非恶性肝病患者(对照... 目的研究甲胎蛋白(AFP)与α-L-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测在原发性肝癌中的诊断价值,分析其敏感性及特异性。方法分别用电化学发光免疫分析法及全自动生化速率法检测50例原发性肝癌患者血清AFP和AFU水平含量,并与同期非恶性肝病患者(对照组)60例进行比较,探讨AFP及AFU联合检测对诊断原发性肝癌的特异性及有效性,以期确定AFP联合AFU测定对恶性肝病的阳性预测值及阴性预测值。结果 50例原发性肝癌患者AFP及AFU测定值分别为(581±165)μg/L、(916±144)μmol/L;60例非恶性肝病患者AFP及AFU测定值分别为(19±23)μg/L、(245±93)μmol/L,实验组与对照组差异有显著性;AFP单独测定结果对原发性肝癌诊断的敏感性和特异性分别为64.0%、86.5%;AFU测定结果对原发性肝癌诊断的敏感性及特异性分别为90.0%、76.3%;AFP与AFU联合检测对原发性肝癌的阳性预测值及阴性预测值分别为92.0%、98.3%。结论 AFP联合AFU测定对原发性肝癌具有较高的诊断价值,可以作为临床排除恶性肝病的重要试验指标。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 Α-L-岩藻糖苷酶 原发性肝癌
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1例危重症新型冠状病毒肺炎的感染相关指标分析
11
作者 杨洁 杨芝芝 +2 位作者 邓建军 范贵荣 曾娅莉 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第S02期37-41,共5页
目的探讨感染相关指标在危重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者诊疗过程中的动态变化及临床价值。方法回顾性分析该院收治的1例危重症COVID-19患者的临床资料,监测感染相关指标的动态变化特点。结果该患者具有典型流行病学史,以反复发... 目的探讨感染相关指标在危重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者诊疗过程中的动态变化及临床价值。方法回顾性分析该院收治的1例危重症COVID-19患者的临床资料,监测感染相关指标的动态变化特点。结果该患者具有典型流行病学史,以反复发热就诊,并迅速进展至胸闷气紧和呼吸困难,新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测阳性,诊断为COVID-19危重型。在疾病进展期,感染相关指标中性粒细胞比例(NEU%)迅速上升,淋巴细胞百分比(LYM%)持续下降,T淋巴细胞亚群进行性降低,NLR及N8R值随病情轻重呈相应增高趋势,而白细胞介素-6(IL-6)与NLR值变化基本一致,超敏C-反应蛋白(hs-CRP)与N8R值变化基本一致。经对症支持治疗后,患者症状缓解,病毒核酸检测转阴,上述感染指标均逐渐恢复正常。结论实时监测病程期间中NEU及LYM、淋巴细胞亚群、NLR及N8R值、IL-6及hs-CRP水平,将有助于COVID-19患者的病情进展判断及预后评估。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 危重症 感染指标
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偏心性髋臼旋转截骨与Chiari截骨治疗髋臼发育不良的短期疗效比较
12
作者 周冬长 梁建斌 +2 位作者 任健 唐光华 范贵荣 《蚌埠医学院学报》 CAS 2016年第8期1006-1008,共3页
目的:比较偏心性髋臼旋转截骨与Chiari截骨治疗髋臼发育不良的短期疗效。方法:将34例成人髋臼发育不良患者随机分为对照组18例和观察组16例。对照组给予Chiari截骨治疗,观察组给予偏心性髋臼旋转截骨治疗。比较2组患者手术时间、术中出... 目的:比较偏心性髋臼旋转截骨与Chiari截骨治疗髋臼发育不良的短期疗效。方法:将34例成人髋臼发育不良患者随机分为对照组18例和观察组16例。对照组给予Chiari截骨治疗,观察组给予偏心性髋臼旋转截骨治疗。比较2组患者手术时间、术中出血量和切口长度、手术前后日本骨科学会(JOA)评分、中心边缘(CE)角和髋臼(Sharp)角变化及术后并发症发生率。结果:2组患者手术时间、术中出血量和切口长度等指标差异无统计学意义(P>0.05)。2组患者术前JOA评分、CE角和Sharp角差异均无统计学意义(P>0.05),观察组患者术后JOA评分和CE角均显著高于对照组(P<0.01),且Sharp角明显低于对照组(P<0.01)。观察组患者术后并发症发生率与对照组差异无统计学意义(P=1.000)。结论:偏心性髋臼旋转截骨治疗髋臼发育不良短期疗效更优,具有临床应用价值。 展开更多
关键词 髋臼发育不良 偏心性髋臼旋转截骨 Chiari截骨
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两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较 被引量:4
13
作者 范贵荣 杨致邦 +3 位作者 田一玲 向瑜 郭丽媛 韩飞 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第2期81-84,94,共5页
目的比较Ni2+-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni2+-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重... 目的比较Ni2+-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni2+-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni2+-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。 展开更多
关键词 幽门螺旋杆菌 包涵体 重组蛋白 切胶纯化 Ni^2+-NTA树脂纯化
原文传递
幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析 被引量:3
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作者 范贵荣 杨致邦 +3 位作者 栗俊杰 郭丽媛 向瑜 韩飞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期193-196,199,共5页
目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液... 目的探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性。方法克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白。SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件。Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性。结果4 mol/L醋酸钠溶液、pH13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件。经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,West-ern blot显示该蛋白具有良好的抗原性。小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶16,具有良好的免疫原性。结论切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究。 展开更多
关键词 幽门螺旋杆菌 粘附素 切胶纯化
原文传递
硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用 被引量:1
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作者 郭丽媛 杨致邦 +4 位作者 田一玲 黄伟 韩飞 范贵荣 向瑜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期457-460,467,共5页
目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。... 目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d~4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%~60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素抗原 卵黄抗体 硫糖铝 抗体活性
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鸭疫里氏杆菌形态及超微结构与外膜蛋白在抗血清诱导下的改变 被引量:1
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作者 高继业 崔兆莲 +4 位作者 黄伟 杨致邦 王振兴 温亚兰 范贵荣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1109-1114,共6页
为研究鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)感染康复鸭抗血清的体外抗菌活性,将血清2型R.anatipestifer AF株接种于含抗血清的TSB培养基并培养10h,在电子显微镜下观察其细胞形态和超微结构的变化,并分别采用SDS-PAGE和RT-PCR技术对... 为研究鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer)感染康复鸭抗血清的体外抗菌活性,将血清2型R.anatipestifer AF株接种于含抗血清的TSB培养基并培养10h,在电子显微镜下观察其细胞形态和超微结构的变化,并分别采用SDS-PAGE和RT-PCR技术对其OMPs成分和OmpA表达水平进行分析。结果显示,R.anatipestifer菌体细胞由杆状变为中部有环形凹陷的球状,活菌细胞胞内及胞间有大量外膜泡,且部分细胞胞质内及胞内膜泡边缘分布有电子密度较高的稠密小体;另外,菌体细胞的OMPs较阴性对照组和空白对照组缺少6条蛋白多肽,分子质量大小分别为33、36、44、50、55和65ku,且OmpA的表达量显著下降(P<0.01)。研究结果证明,R.anatipestifer在中部及端部存在3个潜在的分裂位点,抗血清能诱导分裂位点发生改变并抑制OmpA的表达,致使其形态由杆状变为球状。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 形态学 超微结构 外膜蛋白
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抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨 被引量:1
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作者 郭丽媛 杨致邦 +4 位作者 田一玲 黄伟 夏丽君 范贵荣 苏善平 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第3期182-186,共5页
目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性... 目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性(AR)。结果在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性。在pH2.0-3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性。结论低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 卵黄抗体 硫糖铝 抗体活性 保护剂
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幽门螺杆菌hp1188基因的克隆及高效表达
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作者 韩飞 杨致邦 +2 位作者 郭丽媛 范贵荣 向瑜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期18-21,共4页
目的克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用PCR法从H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1... 目的克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用PCR法从H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1188,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达形式和表达量。表达蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化,Western blot鉴定其反应原性。结果所构建的重组表达质粒pQE30-hp1188序列完整,插入的基因片段全长810bp,与GenBank中的hp1188基因同源性达98%。表达的重组蛋白相对分子质量约为30600,以1.0mmol/L IPTG诱导4h,表达量最高,破菌上清和沉淀中均有表达,可溶性蛋白表达量占全菌总蛋白的47%。重组蛋白纯化后纯度可达90%,并可被H.pylori患者血清识别。结论已成功克隆了H.pylori hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 hp1188基因 克隆 表达
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重症新型冠状病毒肺炎患者炎症反应及细胞免疫分析
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作者 范贵荣 邓建军 +3 位作者 曾娅莉 李军 胡晓燕 杨芝芝 《重庆医学》 CAS 2020年第S01期217-219,共3页
目的探讨重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血炎症反应及细胞免疫特征。方法回顾性研究2020年1月23日至2月13日,该院收治的重症COVID-19感染患者3例作为观察组,选择同期的轻型和普通型COVID-19感染患者12例作为对照组。检测两组的血... 目的探讨重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者血炎症反应及细胞免疫特征。方法回顾性研究2020年1月23日至2月13日,该院收治的重症COVID-19感染患者3例作为观察组,选择同期的轻型和普通型COVID-19感染患者12例作为对照组。检测两组的血液常规分析、血沉、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)、CD4+淋巴细胞和CD8+淋巴细胞计数。结果两组间白细胞总数及分类中的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞计数、血沉和hs-CRP差异无统计学意义(P>0.05)。观察组的IL-6水平明显高于对照组,CD4+、CD8+T淋巴细胞计数明显低于对照组(P<0.05)。结论重症COVID-19感染患者的细胞因子IL-6水平明显升高,CD4^+、CD8^+T淋巴细胞计数明显降低。这些变化将有助于临床有效救治重症COVID-19感染患者。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 肺炎 细胞因子 细胞免疫
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中医分期辨证结合切开复位内固定术治疗不稳定性骨盆骨折的临床疗效及安全性 被引量:1
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作者 范贵荣 徐明芳 黄荣东 《中国伤残医学》 2019年第10期81-82,共2页
目的:探究中医分期辨证结合切开复位内固定术治疗不稳定性骨盆骨折的临床疗效及安全性.方法:针对2015年5月-2018年5月在我院接受治疗的76例不稳定性骨盆骨折患者进行研究,采用单双号分组法将全部患者分为单一组和联合组,每组各38例.单... 目的:探究中医分期辨证结合切开复位内固定术治疗不稳定性骨盆骨折的临床疗效及安全性.方法:针对2015年5月-2018年5月在我院接受治疗的76例不稳定性骨盆骨折患者进行研究,采用单双号分组法将全部患者分为单一组和联合组,每组各38例.单一组采用切开复位内固定治疗,联合组采用中医分期辨证结合切开复位内固定治疗,比较2组的治疗效果和安全性.结果:单一组的临床治疗总有效率为88.9%,并发症发生率为26.3%;联合组的临床治疗总有效率为94.7%,并发症发生率为7.9%,联合组的临床治疗总有效率明显高于对照组,而并发症发生率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:不稳定性骨盆骨折的治疗中,选择中医分期辨证结合切开复位内固定术治疗的方案,效果明显,安全可靠,值得推广. 展开更多
关键词 中医分期辨证 切开复位内固定 不稳定性骨盆骨折 效果 安全性
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