香蕉果肉类胡萝卜素提取与测定方法

大规模开展香蕉类胡萝卜素种质资源评价,发掘高类胡萝卜素的品种资源,提高主栽品种中类胡萝卜素的含量,对于提升香蕉产业竞争力具有重要的作用。开展此项研究需要建立高效的香蕉果肉类胡萝卜素提取和测定体系。本文拟建立基于超高效液相色谱仪(Agilent 1290),适用于香蕉果肉的类胡萝卜素提取及测定的方法。利用YMC-C30色谱柱,在450 nm检测波长和柱温20℃条件下,比较了不同的料液比(g∶mL,1∶6、1∶9、1∶12、1∶15)、定容溶液的比例(V∶V,MTBE∶甲醇=1∶0、1∶1、1∶2)、流动相(V∶V,甲醇∶乙腈=4∶0、3∶1、2∶2、1∶3、0∶4)、流速(0.6、0.8、1.2 mL/min)等对类胡萝卜素组分鉴定和含量测定的影响。结果表明,当提取试剂正己烷∶丙酮∶无水乙醇=2∶1∶1(V∶V∶V),果肉与提取试剂的料液比为1∶9,超声波破碎30 min,重复3次,定容溶液MTBE∶甲醇=1∶1时,香蕉类胡萝卜素组分分离的效果最好。当色谱条件A相以甲醇∶乙腈,B相以MTBE(100%)为流动相,进样量为10μL,流速为1mL/min进行梯度洗脱时,可以很好的鉴定并分离类胡萝卜素的主要组分。利用优化后的体系进行检测不同类胡萝卜素含量的香蕉品种,发现香蕉果肉中的主要类胡萝卜素组分为叶黄素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素。高类胡萝卜素含量的‘Frenchsomber’香蕉品种约含9.79μg/g,而低含量的‘中蕉8号’香蕉品种只有约0.201μg/g,这也表明不同香蕉品种中类胡萝卜素的含量差异相对较大。本文中以香蕉果肉为材料所建立的类胡萝卜素提取与检测方法,操作简单,精确度高,为科研工作者在香蕉类胡萝卜素的功能研究方面提供参考。

香蕉栽培品种基因组类型的分子标记鉴定体系建立

常见的栽培香蕉品种资源的基因组类型有AA、BB、AB、AAA、AAB、ABB、AAAA、AAAB等,一般依赖于外部植物学特征性状鉴定,耗时长、易出错。为建立一个快速、准确的香蕉基因组类型鉴定体系。本研究以已知基因组类型的香蕉品种资源为材料,利用流式细胞术与分子标记,建立了该体系:(1)首先使用流式细胞术鉴定倍性;(2)提取基因组DNA后,使用ITS-PCR-RFLP或BanActin分子标记鉴定是否含有A、B基因组;若只含有A或只含B基因组,结合倍性结果即可鉴定出类型为AA、BB、AAA、AAAA等;若同时含有A和B,倍性结果为二倍体,即可鉴定出类型为AB;(3)若同时含有A和B,且倍性结果为三倍体或四倍体时,则需下一步copia-IRAP分子标记鉴定。copia-IRAP分子标记结果在200 bp处有两条特异条带且倍性结果为三倍体,则鉴定为ABB类型,若为四倍体则鉴定为ABBB类型;若在300 bp和100 bp处有特异条带,如倍性结果为三倍体则鉴定为AAB类型,如果为四倍体则鉴定为AAAB或AABB类型。此外,本研究还使用该体系对8份未明确基因组类型的香蕉种质进行了鉴定,测得‘鸡蕉’、‘Vellapalayan kodan’为AAB类型,‘Dwarf French Plantain’、‘MY3’、‘YN5’、‘佳丽蕉’和‘佛手蕉’为AA类型,‘贵妃蕉’为AAA类型。本研究建立的体系可基本满足常见香蕉栽培品种的基因组类型鉴定,可为种质资源精准评价和杂交种质鉴定奠定基础。