中兽药研发与创新课程教学探索

中兽药研发与创新课程为河北农业大学的通识选修课,面向全校本科学生开设。通过学情分析发现,选课学生具有较高的学习兴趣和参加创新创业活动的热情,课程教学需要满足学生个性化发展和提高知识运用能力的需求。基于学情分析结果,教学团队对课程内容进行重构,挖掘中兽医药发展的创新点,培养学生分析中兽医药行业宏观发展和运用中兽医药知识的能力,设计场景互动、案例分析、项目式教学、小组合作教学等多样化教学活动,并将课程思政融入教学全过程,采用“目标导向+全过程+多元主体”考核方式检测教学效果。通过本课程学习,使学生提高了对中兽药研发与创新的兴趣,增强了主动学习能力、学科交叉应用能力和创新创业能力,完成了多项学科交叉双创项目。本课程教学探索可为中兽医学相关课程的创新创业教学实践提供参考。

新时期中药渣资源化利用的多样性和局限性

中药资源产业化过程要走资源节约型、环境友好型循环经济发展模式,解决中药渣资源化痛点问题是前提和保障。大量的药渣因无有效利用途径而废弃,传统的处理方式不仅威胁生态环境安全同时造成了资源的浪费。现阶段中药渣在农业、畜牧业、能源和医药等领域的应用处于起步阶段,存在应用的弊端和局限性,对中药渣未来资源化利用途径进行探讨,提出中药渣资源转化高附加值产品的相关思考和建议,以期解决中药渣消纳难的问题,延伸中药资源产业链,将助力中药资源循环经济产业高质量、绿色发展。

女贞子水提液促MC3T3-E1细胞增殖和OPG表达的相关通路试验

本试验以MC3T3-E1细胞为模型细胞,用一定浓度的女贞子水提液组、通路抑制剂(ICI182780、RO318220和PDTC)组,女贞子水提液与通路抑制剂的混合组作用细胞72 h后,用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性及细胞上清中骨保护素(OPG)蛋白水平。结果显示,与对照组相比,女贞子水提液组的细胞活性显著提高,ICI182780组、RO318220组、水提液+ICI182780混合组和水提液+RO318220混合组细胞活性显著下降。水提液组OPG蛋白水平显著提高,3种抑制剂组及3种混合组的OPG蛋白水平均显著下降;并且女贞子水提液可以加强ICI182780抑制OPG蛋白的作用。表明女贞子水提液可通过ER、PKC和NF-κB通路发挥促进MC3T3-E1细胞增殖及OPG蛋白表达的作用。

制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及OPG-RANKL mRNA表达的影响

为研究制何首乌水提液对小鼠成骨细胞MC3T3-E1的影响,将不同浓度的制何首乌水提液作用于MC3T3-E1细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、碱性磷酸酶(ALP)活力检测试剂盒和实时荧光定量PCR法对细胞增殖、ALP蛋白分泌及骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平进行检测。结果显示,药物作用2d和3d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞增殖;药物作用6d后,各浓度制何首乌水提液均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP;药物作用1d后,较高浓度制何首乌水提液可上调MC3T3-E1细胞OPG/RANKL mRNA表达比。表明制何首乌水提液具有促进成骨细胞增殖、分化和上调成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达比的作用。

二苯乙烯苷对成骨细胞抗氧化损伤的保护机制

为探索二苯乙烯苷(THSG)保护成骨细胞抗氧化损伤的作用机制,本试验使用不同浓度THSG预处理MC3T3-E1成骨样细胞1 h,加入0.3 mmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))共同培养细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bad)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA表达水平;Western blot法检测细胞OPG和β-catenin蛋白水平。结果显示,与对照组相比,H_(2)O_(2)组细胞生存活力显著下降(P<0.05),Bad和RANKL mRNA表达水平显著上升(P<0.05),OPG和β-catenin mRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,THSG(10^(-4)mg/mL)保护组细胞生存活力显著上升(P<0.05),Bad和RANKL mRNA表达水平显著下降(P<0.05),OPG和β-catenin mRNA和蛋白水平均显著上升(P<0.05)。结果表明,THSG能够拮抗H_(2)O_(2)对成骨细胞生存活力、OPG/RANKL mRNA比和Wnt/β-catenin通路的抑制作用,保护成骨细胞抗氧化损伤。

自拟催乳汤对溴隐亭致大鼠产后缺乳的治疗效果观察

本试验旨在观察自拟催乳汤对大鼠产后缺乳模型的效果。采用溴隐亭灌胃SD大鼠方法建立缺乳模型,同时用自拟的催乳汤灌胃进行治疗,通过观察母鼠每小时泌乳量、仔鼠每窝净增重、母鼠乳腺湿重等方面的变化,评价自拟催乳汤对产后缺乳的治疗效果。结果发现,自拟催乳汤能极显著提高母鼠每小时泌乳量(P<0.01)、显著提高仔鼠每窝净增重(P<0.05),显著提高母鼠乳腺湿重(P<0.05),同时方剂治疗组和空白对照组相关数据也具有显著差异性。证明白拟催乳汤可以显著提高泌乳量,维持产后缺乳母鼠乳腺的结构,对产后缺乳具有治疗作用,但其治疗效果还需进一步的观察和优化改进。

催乳汤对产后缺乳大鼠乳腺的影响

本研究采用溴隐亭灌胃SD大鼠方法建立产后缺乳模型,同时用自拟的催乳汤灌胃进行治疗,通过观察母鼠每小时泌乳量、仔鼠每窝净增重、母鼠乳腺湿重、母鼠乳腺结构等方面的变化,研究催乳汤对产后缺乳大鼠乳腺的影响。结果发现催乳汤能极显著提高母鼠每小时泌乳量(P<0.01)、显著提高仔鼠每窝净增重(P<0.05),显著提高母鼠乳腺湿重(P<0.05),明显恢复母鼠乳腺结构。证明催乳汤显著提高产后缺乳母鼠的泌乳量和仔鼠净重量,恢复产后缺乳母鼠的萎缩乳腺结构,说明催乳汤能够显著恢复产后缺乳母鼠的乳腺功能和结构。

基于动物实验和网络药理学的板参散防治蛋鸡脂肪肝综合征作用机制分析

为探究板参散防治蛋鸡脂肪肝综合征的作用机制,试验使用高能低蛋白日粮饲喂蛋鸡造模,检测板参散对模型蛋鸡肝脏组织形态和肝脏抗氧化性的影响,然后采用网络药理学方法获得板参散防治脂肪肝综合征的靶点蛋白信息,并对其进行蛋白互作关系分析、GO功能注释、KEGG信号通路富集分析和分子对接分析。结果表明:与模型组相比,饲喂板参散的药物组蛋鸡肝细胞内脂肪小滴蓄积减少,肝细胞形态结构正常,肝细胞间隙清晰,肝脏丙二醛含量显著降低(P<0.05),总抗氧化能力显著提高(P<0.05);筛选得到板参散中β-谷甾醇、木犀草素、丹参酮ⅡA及隐丹参酮等89个活性成分,其主要作用于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt(AKT1)、肿瘤抗原P53(TP53)和信号转导子与转录激活子3(STAT3)等94个潜在蛋白靶点,β-谷甾醇、木犀草素、丹参酮ⅡA与关键靶点AKT1、TP53均具有良好的分子对接活性;核心靶点主要富集于细胞凋亡过程的负调控、细胞凋亡过程的正调控和RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控等生物学过程,大分子复合物、核质、受体复合物等细胞组分,酶结合和相同蛋白结合等分子功能,以及脂质和动脉粥样硬化、PI3K/Akt信号通路、缺氧诱导因子信号通路等信号通路。说明板参散可通过多成分、多靶点、多通路机制防治脂肪肝。

基于动物实验和网络药理学的大蒜素防治肺炎作用机制分析

为了分析大蒜素防治肺炎的作用机制,试验将脂多糖(LPS)注入用大蒜素预灌胃的小鼠气管中,检测小鼠肺脏湿干比、肺脏病理组织变化和白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA水平;然后采用网络药理学方法,获得大蒜素防治肺炎的靶点信息,并对其进行蛋白质相互作用关系分析、分子对接分析、GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。结果表明:与LPS组相比,大蒜素+LPS组小鼠肺脏湿干比显著下降(P<0.05),肺脏组织病理变化减轻,IL-6和TNF-αmRNA水平显著下降(P<0.05);获得68个大蒜素防治肺炎的潜在靶点,蛋白质相互作用核心靶点为信号转导子与转录激活子3(STAT3)、转录因子JUN、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和TNF等,大蒜素与按照度值排名前15位的核心靶点均具有较好的结合能力;潜在靶点主要参与的生物学过程包括衰老、对过氧化氢的反应和对药物的反应等,细胞定位于细胞外隙、胞外区和线粒体等,分子功能包括相同蛋白质结合、酶结合和氧化还原酶活性等,信号通路包括凋亡、PI3K-Akt信号通路和TNF信号通路等。说明大蒜素可能是通过影响多靶点、多通路的机制来防治肺炎的。

齐墩果酸和熊果酸对MC3T3-E1细胞增殖及OPG蛋白表达影响的机制研究

为了研究齐墩果酸和熊果酸对成骨细胞作用机制,试验以MC3T3-E1细胞为模型,采用一定浓度的齐墩果酸(或熊果酸)、雌激素受体(ER)、蛋白激酶C(PKC)和核因子κB(NF-κB)通路抑制剂(ICI 182780、RO 318220和PDTC)及齐墩果酸(或熊果酸)加抑制剂的混合药液作用细胞72 h后,用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性及细胞上清液中骨保护素(OPG)蛋白水平。结果表明:与对照组相比,齐墩果酸(或熊果酸)组和齐墩果酸(或熊果酸)+PDTC混合组细胞活性显著上升,齐墩果酸(或熊果酸)+ICI 182780混合组、齐墩果酸(或熊果酸)+RO 318220混合组和三种抑制剂组细胞活性显著下降,PDTC组细胞活性无显著变化。齐墩果酸(或熊果酸)组的OPG蛋白水平显著上升,三种抑制剂组的OPG蛋白水平均显著下降,齐墩果酸(或熊果酸)+三种抑制剂混合组的OPG蛋白水平显著下降;而且ICI 182780与熊果酸联合使用会显著下调OPG蛋白分泌水平。说明齐墩果酸和熊果酸可通过ER和PKC通路发挥促MC3T3-E1细胞增殖的作用,通过ER、PKC和NF-κB通路发挥细胞OPG蛋白表达的作用。