高同型半胱氨酸通过抑制SETDB1促进肝脂肪沉积

目的研究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)和SET结构域分支型1(SET domain bifurcated 1,SETDB1)在肝脏脂肪沉积中的作用和分子机制。方法选取C57BL/6N雄性小鼠共14只。依据经典的Lieber-De Carli方法和高甲硫氨酸饮食(high methionine diet,HMD)建立酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)和高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)模型,将6只雄鼠随机分为对照组(pair fed,PF组)和酒精组(alcohol fed,AF组),每组3只,持续喂养5周,分别给予对照饲料和酒精液体饲料建立ALD模型;将8只雄性小鼠随机分为对照饲料饮食组(Chow组)与高甲硫氨酸饮食组(HMD组),每组4只,持续喂养5周建立HHcy模型。在AML12细胞中分别加入3.33μmol/L油酸(oleic acid,OA)、100μmol/L同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy),将OA与Hcy共同培养48 h,SETDB1 siRNA干扰AML12细胞6 h后培养至48 h。应用甘油三酯(triglyceride,TG)检测试剂盒和Hcy ELISA检测肝脏、血浆和细胞中TG和Hcy水平,使用qRT-PCR和Western blot检测肝脏及细胞SETDB1 mRNA、蛋白水平及其活性,提取细胞总RNA进行RNA表达芯片分析并富集功能通路。结果ALD小鼠模型出现肝脏脂肪沉积,AF组与PF组比较,血浆和肝脏Hcy水平增高,肝脏SETDB1表达和活性降低(P<0.05)。HMD中出现肝脏脂肪沉积,HMD组与Chow组比较,血浆和肝脏Hcy水平上升,肝脏SETDB1表达和活性降低(P<0.05)。外源Hcy导致AML12细胞SETDB1表达和活性下降,同时细胞内TG含量增加(P<0.05)。敲低SETDB1导致AML12细胞TG含量增加(P<0.05)。结论同型半胱氨酸通过抑制肝脏SETDB1表达和活性促进肝脏脂肪沉积。