蔺草基因组DNA提取条件的优化研究

以来自宁波高桥种质资源圃中的15个蔺草样品为材料,进行了基因组DNA提取条件的优化研究,结果表明:加入Proteinase K后,DNA的浓度普遍在600μg/mL以上,A260/A280值在1.8-2.0之间,浓度随加入量的增加呈递增状态,在加入量为6μL时提取效果最好。Proteinase K水浴温度与时间的条件优化试验中发现,最佳的水浴温度为65℃,水浴时间以30 min,离心条件在转速10,000 r/min,时间8 min时获得的DNA质量较好。加入RNase A后,A260/A280值在1.8-2.0之间,随加入量的增加纯度也增大,加入量以3μL为宜;RNase A水浴时间在10 min时A260/A280值普遍最接近1.8,浓度也较高。应用所获得的优化提取条件对宁波市高桥镇种植的15个蔺草样品进行提取DNA测试,电泳结果表明所有品种都出现了特异性DNA条带。由此,在进行蔺草实生苗基因组DNA提取时,建议采用如下条件:Proteinase K加入量6μL,水浴温度为65℃,时间为30 min;第一步DNA沉淀的离心转速为10,000r/min,离心时间为8 min。RNase A加入量3μL;RNase A水浴时间10 min。