猪流行性腹泻病毒蛋白结构与功能的初探

猪流行性腹泻是猪流行性腹泻病毒引起的猪肠道传染性疾病.该病毒属于尼多病毒目,冠状病毒属.虽然猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)首次在欧洲发生,但是目前已经成为包括中国、韩国、日本、菲律宾以及泰国等亚洲国家猪产业中严重的传染性疾病,造成了严重的经济损失.目前猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)二联灭活苗及弱毒苗的应用大大降低了两种病毒病的发生率,但是我国目前PED的流行仍呈逐年上升趋势.目前对PEDV的致病机制了解较少,本综述目的旨在借助其他冠状病毒病毒蛋白结构和功能的研究成果,对PEDV编码的病毒蛋白进行初步分析,以期为深入研究PEDV提供一些新的思路.

假单胞菌sp.130 GL-7-ACA酰化酶的核苷酸和蛋白质序列分析

对来源于假单胞菌sp .130的戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (GL 7 ACA)酰化酶结构基因的全序列及所编码蛋白质的α,β亚基的N末端和C末端的氨基酸序列进行了测定。将蛋白质序列与其他同类的GL 7 ACA酰化酶进行了同源性比较 ,结果显示该酶与来源于假单孢菌GK16和C42 7的酰化酶的序列有较高同源性 ,而与其它同类酰化酶的同源性较低。这些酶的α亚基N 末端差别较大 ,但是 β 亚基的N

全阻断(隔)胃癌根治术与传统胃癌根治术的比较

目的介绍胃癌全阻断(隔)根治术技术要点及操作规范,并在手术时间、手术费用及术后并发症等方面与传统胃癌根治术比较。方法选择符合入组标准的胃癌患者30例,随机分为两组:A组行全阻断(隔)胃癌根治术,B组行传统胃癌根治术。分析比较肿瘤部位、完成阻断所需时间、胃肠重建方式比例、手术时间、完成阻断所需耗材费用、术后病理TNM分期、住院时间、术后并发症及术后化疗方案。结果A组除手术时间长于B组外(P<0.05),两组间其余比较指标均无显著统计学差异。结论胃癌全阻断(隔)技术可在术中较完全阻隔肿瘤,操作简便,费用低廉,阻断后基本不影响其后的手术操作,术后并发症发生率和住院时间与传统手术无显著统计学差异。

钩端螺旋体血小板激活因子乙酰水解酶基因特征分析

目的 由于钩端螺旋体病的主要特征之一是组织器官广泛性出血 ,出血部位发生在黏膜、脏器、浆膜和皮肤等处 ,严重者出现大面积肺弥散性出血、咳血 ,是危重钩端螺旋体病早期最常见的死因 ,其致病机理仍不清楚。本文使用生物信息学软件分析钩端螺旋体基因LA2 14 4 (血小板激活因子乙酰化酶 ,PafAH)所编码蛋白的结构和功能 ,并探讨其在致病过程中的作用。方法 使用NCBI ,Swissprot/TrEMBL ,ProDom ,Pfam ,Jpred2 ,SWISS -MODEL ,TMpred ,SignalP ,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株全基因组ORF基因诠释 ,编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果 确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株血小板激活因子乙酰化酶基因 ,该基因编码蛋白质与哺乳动物 pafAH在一级结构上相似性达 4 2 % ,以牛脑 pafAH(Ib)γ亚基 (1WAB/PDB)为模件模拟该蛋白三级结构 ,发现两者立体结构与非常相似 ,催化位点完全相同 ,均由Ser-His-Asp组成催化三合体。结论 该基因可能与钩体染色体所编码的胶原酶基因 ,溶菌酶基因 ,YopM基因 ,VwA基因协同在钩端螺旋体病出血过程中起作用 。

DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染HeLa细胞系的建立

为研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)与树突状细胞特异性粘附分子-3-结合非整合素分子(dendritic cell specific intercellular adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)的相互作用对NDV感染树突状细胞(dendritic cell,DC)的影响,本研究拟构建能够稳定表达DC-SIGN蛋白的细胞系,为研究DC-SIGN蛋白与病毒蛋白互作提供基础。以小鼠DCs提取的c DNA为模板,通过PCR方法获得DC-SIGN基因,连入真核表达载体,并命名为pcDNA-DCSIGN,利用LipofectamineTM 2000转染HeLa细胞,G418进行药物压力筛选,经RT-PCR和Western blot鉴定,获得了一株可以高效表达DC-SIGN蛋白的HeLa细胞,且经过多次传代后仍然可以稳定表达DC-SIGN,说明该细胞系构建成功。

用计算机模型研究葡激酶与人微小纤溶酶原的相互作用

利用计算机同源模建预测人微小纤溶酶原的三维结构，与葡激酶Ｘ射线晶体结构进行了分子对接，研究了葡激酶与微小溶酶原的结合区，并设计了分子量小、低抗原性的新型葡激酶分子。

头状链轮丝菌染色体复制起始区的克隆和对变铅青链霉菌的转化

头状链轮丝菌 (Streptoverticillumcaespitosus)ATCC2 742 2是抗肿瘤药物———丝裂霉素A的产生菌 ,根据高GC含量革兰氏阳性菌染色体复制起始区两端基因序列的保守性 ,采用PCR方法从该菌中克隆了一段包含染色体复制起始区 (oriC)的 1 3kb片段。序列分析发现 ,克隆片段与天蓝色链霉菌的oriC及邻近区域的同源性达 80 %以上 ;头状链轮丝菌oriC中含有 2 2个DnaA box ,保守序列为TTGTCCACA。以克隆片段构建的质粒可以跨属转化变铅青链霉菌 (S .lividans)ZX7,原生质体转化效率为 3 2× 10 2 个 μgDNA ;质粒在S .lividansZX7中能以低拷贝形式稳定存在 ;转化子的菌落和菌丝形态均正常。头状链轮丝菌oriC序列与几种链霉菌的oriC有较高的同源性 ,以及在变铅青链霉菌中仍具有复制起始活性等说明链轮丝菌属与链霉菌属在系统发生上关系较近 ;但采用最大似然法分析oriC序列构建的头状链轮丝菌与几种链霉菌的系统进化树表明 ,头状链轮丝菌与几种链霉菌之间的分化距离远大于链霉菌之间的分化距离。

小鼠抗青霉素和头孢菌素酰化酶抗体制备及交叉反应研究

为探讨用不同方法制备的抗原对抗体效价的影响以及抗体之间的交叉反应 ,采用 3种不同方法制备的抗原分别免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备出抗青霉素酰化酶 α亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶α亚基、β亚基 4种抗体 ,测定了它们的效价 ;同时还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述 4种抗体之间对应抗原的交叉反应。结果表明 ,用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得抗体效价较高 ;同样用割胶法制备的抗原免疫小鼠后所得的两类抗体效价无显著差异 ;在交叉反应测试中 ,抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶 ,但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶 ,即抗头孢菌素酰化酶抗体更为活跃 ,而抗青霉素酰化酶抗体则更为专一。同类抗体对应抗原 2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位结构的类似 。

GL-7ACA酰化酶表达检测系统的建立

戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (GL 7ACA)酰化酶能够催化GL 7ACA分解生成 7 ACA ,后者是工业半合成生产头孢类抗菌素所需的重要前体。为了准确地检测GL 7ACA酰化酶及其突变体的表达 ,本研究通过构建一系列质粒载体 ,建立了两个简便有效地测定GL 7ACA酰化酶基因acy表达量的系统 ,从而可对酶的比活力进行定量。我们将两个报告基因 ,即儿茶酚双加氧酶基因 (xylE)和 β 半乳糖苷酶基因 (lacZ)分别置于acy基因的下游 ,使之与acy基因共用一个启动子 ,进行串联表达 ,各自构成一个多顺反子系统。实验证明 ,基因融合后的儿茶酚双加氧酶或 β 半乳糖苷酶的活力可以间接反映acy的表达量。

新城疫病毒感染通过蛋白激酶激活NF-κB信号通路诱导干扰素和炎症因子的表达

[目的]本文旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染过程中细胞因子显著上调的机制。[方法]NDV感染He La细胞,用RT-PCR法检测IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平。Western blot分析和免疫荧光分析检测NDV对双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)与NF-κB信号通路的影响。[结果]与未感染组相比,IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平显著上调。NF-κB信号通路在感染后12~24 h被激活,转录因子p65入核,而使用NF-κB信号通路抑制剂IKK16则显著降低了干扰素和炎症因子的表达,证明NF-κB信号通路介导NDV感染过程中的细胞因子表达和炎症反应。另外,在病毒感染过程中,病原模式识别受体PKR被诱导表达并且被磷酸化激活。使用抑制剂2-氨基嘌呤抑制PKR活性后,能够抑制p65的入核,并减少由NDV诱导的干扰素和炎症因子表达。[结论]NDV感染能够通过PKR调控NF-κB信号通路,引起细胞因子显著上调。

猪Ⅱ型圆环病毒江苏株全基因进化及ORF3蛋白的生物信息学分析

对NCBI已经登记的国内分离的PCV2江苏株(GQ358994.1)进行序列比对及进化分析,并对其ORF3编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学方法分析,对其组分、理化性质、跨膜结构域、二级结构、糖基化位点、磷酸化位点和B细胞抗原表位进行预测和推断。结果表明,PCV2江苏株与国内分离株序列同源性极高(>99%),ORF3蛋白无跨膜区域,二级结构中自由卷曲含量最高,为54.81%,不含有糖基化位点,但有8个磷酸化位点。综合分析得出,ORF3蛋白具有大量的抗原决定簇。通过对ORF3蛋白进行生物信息学方法分析,为PRRSV疫苗设计提供理论基础。

新型鸭肝炎病毒GT株的全基因组序列分析

从河北省某鸭场发病鸭中分离到一株Ⅲ型鸭肝炎病毒(DHV)GT株,采用组织切片、全基因组测序和动物回归试验对其进行鉴定。结果显示:该毒株接种1日龄雏鸭,能引起显著的临床症状和肝细胞病变,该毒株的LD50为105.2;全基因组测序显示:该毒株全长7 802 bp,含652 bp的5′非编码区和366 bp的3′非编码区,编码2 516个氨基酸的多聚蛋白。根据Blast比对发现,该毒株属于DHV-C,与中国分离毒株C-YCW(98.1%)的同源性最高;从进化关系来看,与韩国型毒株的亲缘关系最近。表明该毒株属于我国流行的新型鸭肝炎病毒,命名为DHV-HBGT株。

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2的生物信息学分析

[目的]为临床上构建PRRSV的拮抗性小肽及相关疫苗设计提供理论参考。[方法]对NCBI上国内分离的PRRSV毒株(FJ175688.1)Nsp2的氨基酸序列进行生物信息学方法分析,并对其组分、理化性质、跨膜结构域、二级结构、糖基化位点、磷酸化位点和B细胞抗原表位进行预测。[结果]Nsp2含有7段的跨膜区域,二级结构中自由卷曲含量最高(57.64%),同时含有4个糖基化位点和76个磷酸化位点。综合分析表明,Nsp2具有大量的抗原决定簇。[结论]通过对Nsp2的生物信息学分析,可为PRRSV疫苗设计提供理论基础。

PRRSV非结构蛋白2-半胱氨酸结构域的原核表达及抗原表位预测

为了获得PRRSV非结构蛋白2-半胱氨酸结构域的高纯度原核表达蛋白以及了解该蛋白的抗原表位,试验以从PRRSV-VR2332毒株上提取的病毒全基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增非结构蛋白2-半胱氨酸结构域(Nsp2pro)基因,连接构建原核表达载体SUMO-Nsp2pro,转入宿主菌Rosetta2,经IPTG诱导,获得高浓度的可溶蛋白Nsp2pro,经亲和层析His-Bind后得到高纯度的目的蛋白。同时,运用生物信息学方法对Nsp2pro二级结构及抗原表位进行预测。结果显示,Nsp2pro的α螺旋及β折叠区域较多,转角区域较少,结构较为复杂,位于蛋白分子表面且亲水的区段很可能是B细胞表位的优势区段。获得较高纯度的蛋白,将为后续进一步研究Nsp2pro基因编码的蛋白在病毒复制过程中的作用奠定基础。

动物腹泻性疾病-现状、进展与展望——猪流行性腹泻的研究进展

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性接触性肠道传染病,以呕吐、腹泻、食欲下降和脱水为基本特征.近年来,该病的流行区域和强度有不断扩大和增强的趋势,对哺乳仔猪造成了很高的致死率,给养猪业造成了很大经济损失.为了能有效的防制PED,本文就PED病原学、发病机制、诊断和预防等方面的研究进展做一概述.

法道(Fadal)机床设备维修知识讲座——第4讲 法道(Fadal)机床直流、交流伺服系统常见故障及解决措施

所有法道(Fadal)机床无论其规格如何,它所采用的伺服系统都是Fadal公司自身的系统,唯一的区别在于:1996年之前出厂的机床配备直流伺服系统,1996年以后的都是配备交流伺服系统。 下面就Fadal机床伺服系统常见故障及解决方法作一简单介绍,供广大Fadal机床用户参考。 首先,要说明的是放大板如何正确调整。

法道(Fadal)机床设备维修知识讲座——第5讲 法道(Fadal)机床直流、交流伺服系统常见故障及解决措施(续)

上一讲讲到机床伺服放大板常见故障及如何解决,刊登了流程表1,现将补充的流程表2、3、4、5登出。

法道(Fadal)机床设备维修知识讲座 第2讲 法道(Fadal)立式加工中心的全面保养和精度调整

加工中心与传统机床相比,虽然在结构上和控制上有根本的区别,但维护与保养与传统机床仍有相似之处。大部分用户由于种种原因,机床往往缺少正常的维护,带病工作造成较大的经济损失。根据我们公司维修人员在现场工作的服务经验得出,机床有60％以上的问题是由于缺少较好的维护,

法道(Fadal)机床设备维修知识讲座——第9讲 法道(Fadal)机床在DNC中常见的死机现象及解决措施(上)

DNC加工就是我们常说的在线加工,它可以不占用机床数控系统自身内容,通过外部计算机、RS232电缆线、传输软件执行大容量的加工程序。DNC加工应用相当广泛,尤其在模具中更为普遍。

起搏器植入术后传导阻滞与窦房结功能不良患者动态心电图检查及临床意义

目的探讨起搏器植入术后传导阻滞与窦房结功能不良患者动态心电图检查及临床意义。方法对2017年5月至2020年5月在本院实施起搏器植入术的72例病患进行回顾性分析,依据起搏器干预适应症分为A组(窦房结功能不良,41例)与B组(传导阻滞,31例)。所有患者均进行动态心电图检查,对比两组起搏工作模式[双腔按需起博(DDI)、心房按需起搏(AAI)、心室按需起搏/心房同步心室起搏(VDD/VAT)]、起搏比例、异常以及患者本身心律失常发生率(包括房性心动过速、室性期前收缩、频发房性期前收缩、多源性室性期前收缩、成对性室性期前收缩、阵发性心房颤动)。结果A组AAI起搏工作模式明显高于B组,VDD/VAT起搏工作模式明显低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组DDI起搏工作模式、起搏比例、以及异常状况相比,差异均无统计学意义(P>0.05);A组频发房性期前收缩、房性心动过速明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论起搏器植入术后传导阻滞与窦房结功能不良患者的工作主要模式能够经动态心电图辨别,充分了解起搏器的工作状态,同时为合理程控起搏器提供依据,值得应用推广。