宁夏某医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌临床分布及分子机制研究

目的分析宁夏地区某三甲综合医院临床标本分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的分布及耐药情况,了解该院CRE耐药基因的主要流行现状,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供参考。方法收集2017年1月1日至2018年12月31日住院患者临床分离的CRE菌株,利用自动化仪器进行细菌鉴定和药物敏感性试验(简称药敏试验)检测,利用改良碳青霉烯酶灭活(mCIM)试验联合乙二胺四乙酸-碳青霉烯酶灭活(eCIM)试验检测耐药菌的表型,并采用PCR检测ESBLs(blaSHV、blaTEM)、碳青霉烯酶(blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48)共7种主要的耐药基因,最后对数据进行统计分析。结果临床标本共收集CRE菌株77株,主要为肺炎克雷伯菌52株、大肠埃希菌25株;标本来源主要为痰液、无菌中段尿及血液等;标本来源科室主要为肝胆外科、重症监护室(ICU)和急诊科;药敏试验表明77株耐药菌对β-内酰胺类药物的耐药率均大于95.00%,对喹诺酮类抗菌药物耐药率均为75.00%左右;mCIM试验阳性有58株,eCIM试验阳性有35株、阴性有23株。应用PCR检测耐药基因,ESBLs以blaTEM为主,检出率为49.35%,blaSHV检出率为23.38%;碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,检出率为36.36%,其余blaKPC、blaOXA-48阳性率分别为24.68%、15.58%,未检测到blaVIM和blaIMP基因。测序发现28株blaNDM阳性菌中有10株为blaNDM-1,18株为blaNDM-5。结论宁夏某医院CRE耐药基因检出率较高,CRE对常用抗菌药物耐药率高,应多部门联动加强对CRE的监测与防控,合理应用抗菌药物。

改良麦康凯平板筛查肠道定植耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的性能评价

目的建立一种运用改良麦康凯平板快速筛查肠道定植耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的方法,并进行性能评价。方法分别制备含有终浓度为4μg/mL亚胺培南、4μg/mL美罗培南、2μg/mL厄他培南的改良麦康凯平板。选用临床连续分离45株CRE及30株非CRE菌株,检测改良麦康凯平板的敏感性及特异性,采用其中20株CRE菌株对改良平板的最低检测限进行评估。PCR方法检测CRE菌株耐药基因(TEM、SHV、NDM、KPC、OXA-48、VIM、IMP)。收集142例粪便样本评价改良平板的筛查性能,并与肉汤增菌法及CHROMagar KPC显色培养基进行比较。结果45株CRE菌株中TEM、SHV检出率分别为62.22%(28/45)和24.44%(11/45),NDM、KPC、OXA-48的检出率分别为62.22%(28/45)、15.56%(7/45)和13.33%(6/45),未检出VIM和IMP。45株CRE菌株在厄他培南改良平板上均生长,亚胺培南改良平板生长44株,美罗培南改良平板生长43株,敏感性分别为100%(45/45)、97.78%(44/45)和95.56%(43/45)。30株非CRE菌株在亚胺培南与美罗培南改良平板上均未生长,在厄他培南改良平板上生长2株,特异性分别为100%(30/30)、100%(30/30)和93.33%(28/30)。20株CRE中,接种菌液浓度为10^(5)~10^(8) CFU/mL时,亚胺培南、美罗培南和厄他培南改良平板的检出率分别为70%(14/20)、65%(13/20)和100%(20/20);接种浓度为10^(5) CFU/mL以下时亚胺培南、美罗培南、厄他培南改良平板的检出率分别为10%(2/20)、10%(2/20)和95%(19/20)。亚胺培南、美罗培南改良麦康凯平板最低检测限大多分布在10^(5)~10^(8) CFU/mL接种水平,而厄他培南改良麦康凯平板最低检测限集中分布于10^(2)~10^(3) CFU/mL。142份粪便样本中,亚胺培南、美罗培南、厄他培南改良麦康凯平板分别筛查出3株、2株、4株CRE,均未检出非CRE菌株;肉汤增菌法检出5株CRE及2株非CRE;CHROMagar KPC显色培养基检出5株CRE及1株非CRE。3种改良平板与肉汤增菌法及CHROMagar KPC显色培养基筛查结果间差异均无统计学意义(P>0.05)。与亚胺培南和美罗培南相比,厄他培南平板筛查结果与肉汤增菌法、CHROMagar KPC显色培养基一致性更好,Kappa值分别为0.717和0.885。结论改良麦康凯平板筛查肠道CRE菌株敏感性和特异性高,且操作简便,价格低廉,对操作人员技术要求低。厄他培南改良麦康凯平板具有更低的检测限,且与肉汤增菌法及CHROMagar KPC显色培养基筛查结果有更好的一致性,更适合推广使用。