去氢骆驼蓬碱致细粒棘球蚴DNA损伤修复相关基因表达量的检测

目的观察去氢骆驼蓬碱(HM)对细粒棘球蚴不同类型DNA损伤修复基因表达量的影响。方法以细粒棘球蚴为实验材料,以HM为药物,以虫体不同类型DNA损伤修复方式(同源重组修复、非同源末端连接修复、碱基切除修复)及核苷酸切除修复通路的关键修复基因为目的基因设计引物,筛选确定qRT-PCR反应体系,采用该体系检测基因的差异表达水平,分析HM对细粒棘球蚴不同类型DNA损伤修复相关基因的影响。结果筛选的细粒棘球蚴DNA损伤修复类型代表基因BRCA1引物F:5’-TGATTGCGACCTAAGAGAC-3’,R:5’-TTCCATACACAAGCCATCC-3’);KU70引物F:5’-TGATTGCGACCTAAGA GAC-3’,R:5’-GTCGCCATCTCAACTTCA-3’);OGG1引物5’-CGCTATGGTAAGAAGATGTG-3’,R:5’-CGTGAAGATGGATGGAGAA-3’);ERCC1引物F:5’-TCGTGCTCATTGTGTTAGT-3’,R:5’-CTCCTCTGGTGGCTTATTC-3’)。各基因扩增曲线Ct值可用,溶解曲线特异性良好。qRT-PCR检测各样品组BRCA1,KU70,OGG1基因表达均有不同程度上调,DOX组分别为26.05倍,323.44倍,29.63倍,HM组分别为7.24倍,55.65倍,3.22倍,以KU70和BRCA1基因上调尤为明显。ERCC1基因表达量DOX组显著上调(上调倍数25.24),HM组无显著变化。结论 HM对DNA双链断裂修复类型代表基因BRCA1,KU70,OGG1表达量有较大影响,而对ERCC1基因表达无显著影响。