不同分化的角质形成细胞对成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究Ca2+诱导分化的人角质形成细胞(HKC)上清液对人成纤维细胞(HFB)增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白合成的影响。方法分别用0.09,1.0和1.5mmol/L Ca2+的K-SFM培养液培养HKC 3d,分化标记物K10染色鉴定HKC的分化程度;采用HKC上清液与DMEM 1∶1比例的混合液培养HFB 2d,以DMEM培养的HFB为对照组;MTT法测定HFB增殖;ELISA法测定HFB上清液中Ⅰ,Ⅲ型胶原含量。结果 1.0或1.5mmol/L Ca2+的K-SFM培养HKC 1d时,HKC出现复层生长,3d时K10的表达均较0.09mmol/L Ca2+组的增强(P<0.05);相较于DMEM培养HFB组,0.09mmol/L Ca2+HKC上清液与DMEM混合液促进HFB增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原的合成,1.0和1.5mmol/L Ca2+HKC上清液分别与DMEM混合均抑制HFB增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的合成(P<0.05)。结论不同分化程度的HKC上清液可以调控HFB的增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白合成。

压力下角质形成细胞与成纤维细胞共培养对细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究压力下人角质形成细胞(human keratinocytes,HKC)和人成纤维细胞(human fibroblasts,HFB)的三维共培养对细胞增殖及胶原蛋白合成的影响。方法将HKC与HFB分别接种于壳聚糖-明胶支架2 d后,将气-液界面诱导分化1 d后的HKC-壳聚糖-明胶复合物与HFB-壳聚糖-明胶复合物共培养12 h,3.4 k Pa气体压力加载24 h,并以压力单独培养、无压力单独培养或无压力共培养作为对照。HE染色观察细胞在支架中的分布及生长情况,MTT法测定细胞增殖情况,羟脯氨酸试剂盒测定上清液中的胶原含量。结果 HE染色发现,HKC与HFB均可以在壳聚糖-明胶支架上正常增殖成片;3.4 k Pa压力或共培养均可以促进HKC增殖和胶原合成,抑制HFB增殖及胶原合成。结论压力及共培养是影响HKC与HFB增殖及胶原蛋白合成的重要因素,研究结果为手术切除瘢痕后移植组织工程表皮结合压力法治疗增生性瘢痕的可能机制提供参考。

IL-1β对人体皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的探讨白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)对人体皮肤成纤维细胞增殖的影响及其可能机制。方法胶原酶消化法提取人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblasts,HFB)。分别用0,0.04,0.2,1与5 ng/m L浓度的IL-1β培养HFB 24 h,以0 ng/m L浓度的IL-1β培养HFB 24 h为对照组,采用流式细胞分析法测定各组细胞周期分布情况,MTT法测定各组细胞增殖情况。结果细胞周期分析结果显示,各实验组与对照组相比,S期所占比例增加,且随着培养液中IL-1β浓度增高,S期所占比例上升。MTT法测定结果表明,各实验组OD值均比对照组高,且实验组OD值随着培养液中IL-1β浓度增高而增高。细胞周期和MTT结果均表明,IL-1β浓度为5 ng/m L时,其促进细胞增殖的效果最明显。结论 IL-1β浓度是影响HFB增殖的重要因素,本实验为创伤后表皮细胞和真皮细胞大量分泌IL-1β并促进HFB增殖的现象提供了参考。

周期性机械拉伸对人真皮成纤维细胞增殖及胶原蛋白代谢的影响

目的体外研究周期性机械应力刺激对成纤维细胞生物学行为的影响,进一步了解皮肤创面愈合的生物学机制。方法原代提取人真皮成纤维细胞(human skin fibroblasts,HFB)。采用FX-4000柔性基底应变加载系统对HFB施加周期性机械拉伸,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测各组成纤维细胞内Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,ELISA方法检测各组上清液中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的浓度。结果与静态对照组比较,10%拉伸幅度加载培养24h后,细胞增殖明显;10%拉伸幅度作用24h,48h可以促进成纤维细胞Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达;20%拉伸幅度作用24h,48h可以促进上清液中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的合成。结论力学刺激可以改变HFB的细胞周期,促进HFB的增殖;也能够影响细胞外基质中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的代谢,且与力学刺激的幅度和时间有关。

压力下角质形成细胞上清液对成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

探讨人皮肤角质形成细胞(human keratinocytes,HKC)对成纤维细胞(human fibroblasts,HFB)增殖及胶原合成的影响,对于临床治疗增生性瘢痕有重要的理论和实际意义。DMEM与HKC上清液的混合液(1∶1)培养HFB,3.4 kPa气体压力加载5 h或10 h;MTT法测定HFB增殖;羟脯胺酸比色法测定HFB上清液中胶原蛋白合成量。实验结果显示,静态或加压时,HKC组与K-SFM组比较,HFB数量及胶原合成量显著增多(P<0.05);压力组与无压力组比较,HFB数量及胶原合成量显著下降(P<0.05);HKC且加压10 h组与K-SFM且静态10 h组比较,HFB数量显著增多(P<0.05),胶原合成量显著下降(P<0.05)。以上结果说明,HKC上清液可以促进HFB增殖及胶原的合成,3.4 kPa气体压力可以抑制HFB增殖及胶原的合成。