基于离子液体修饰碳纳米管电极的碱性磷酸酶电化学检测

利用自制的离子液体修饰碳纳米管电极(CNTs-ILE),在对CNTs-ILE的特性及对碱性磷酸酶(AP)酶促反应的底物磷酸对硝基苯酯(PNPP)和产物对硝基苯酚(PNP)进行电化学研究的基础上,采用安培法对酶促反应进程实现了持续动态的检测。实验表明,CNTs-ILE的循环伏安特性优于传统玻碳电极,且它在检测PNP时呈现出良好的抗钝化特性。当AP浓度范围在1.0～100 U/L时,电流大小与AP的浓度呈良好的线性关系。本方法可快速检测AP浓度,检测时间在20 min内。CNTs-ILE具有良好的抗钝化、操作简单及制作成本低等特点,在碱性磷酸酶的检测领域中有望得到进一步发展。在传统ELISA基础上,利用CNTs-ILE对具体样本最终的AP酶促反应产物进行电化学检测,通过峰值电流大小确定抗原浓度,为检测以AP为标记酶的抗原和抗体提供了理论依据。

分光光度法快速检测细菌

采用分光光度法来检测完整细胞内H2O2酶的活性,以实现细菌的快速检测。由于细菌(本研究以E.coli DH5α为模型)内含有H2O2酶,当往菌液中加入H2O2时,H2O2会在胞内H2O2酶的作用下分解,其分解过程遵循一级动力学反应。通过测量该反应中H2O2在240nm处吸光度的变化,可以得出该一级反应的速率常数,从而获悉菌液的浓度。结果表明:大肠杆菌单位细胞浓度酶活为4.2×10-13L/(s·cell),其速率常数与浓度在5.7×106～5.7×107cfu/mL范围内呈现良好的线性关系,检出限为5.7×106cfu/mL。本方法是一种检测细菌总数的快速方法,测试时间为5～10min。