灯盏花素干预体外培养大鼠脑皮质神经元的存活与生长

背景:神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用。目的:观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响,并初步探讨其机制。方法:取新生SD大鼠胚胎,取其大脑皮质后,对神经元进行原代培养,随机分为3组,其中灯盏花素组加入10 g/L灯盏花素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像,之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶A mRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。结果与结论:正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异(P>0.05),但正常组及对照组均有随时间点延长,3个指标均上调(P<0.05),灯盏花素组细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力均较正常组及对照组升高(P<0.05)。神经生长因子及TrkA mRNA的表达在正常组和对照组在各时间点无明显差异(P>0.05),灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调(P<0.05)。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。

七叶皂苷对体外培养大鼠神经元生长的作用及其与BDNF的关系

目的探讨七叶皂苷对体外培养大鼠大脑皮质神经元生长的作用及其与脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体(TrkB)的关系.方法取新生SD大鼠大脑皮质进行神经元原代培养,随机分为正常组、对照组和七叶皂苷组.七叶皂苷组加入20 mg/mL七叶皂苷(生理盐水稀释),对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理.显微镜下观察各时间点(24 h、48 h)神经元数目、胞体面积、突起长度.采用MTT检测细胞活力.RT-PCR检测BDNF和TrkB mRNA的表达.结果正常组、对照组各时间点神经细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异(P>0.05),但随时间点延长,各指标明显增加(P<0.05).七叶皂苷组各指标均明显高于正常组、对照组(P<0.05).BDNF和TrkBmRNA在正常组、对照组各时间点上无明显差异(P>0.05),而七叶皂苷组明显高于正常组、对照组(P<0.05).结论七叶皂苷可促进SD大鼠脑源性神经元的生长,其作用可能与上调BDNF及TrkB的表达有关.

巢蛋白在不同发育阶段人胚胎脊髓中的表达变化

目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中巢蛋白(nestin)的变化趋势。方法:采用免疫组织化学方法对不同发育时期(3周～8个月)的人胚胎脊髓中巢蛋白(nestin)的表达及变化进行了研究。结果:Nestin阳性细胞在神经上皮贯穿整个发育过程,5周基板、翼板形成后即可见到阳性物,而边缘层6周出现。中央管、基板、翼板、边缘层内nestin阳性细胞达高峰的时间分别是6周、7周、8周、9周,而表达明显减少的时间分别是8周、9周、10周、11周。随着脊髓的发育成熟,灰、白质内nestin阳性产物逐渐减少,而中央管的阳性细胞数至3月后较为稳定。结论:在脊髓不同部位神经干细胞出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位神经干细胞增殖、分化并不同步。

七叶皂苷对大鼠体外培养神经元的影响及其与NGF信号系统的关系

为了探讨七叶皂苷对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响及其与神经生长因子(NGF)信号通路的关系.取新生SD大鼠胚胎的大脑皮质,在24或96孔板中进行原代培养神经元,随机分为正常组(A组)、对照组(B组)、七叶皂苷组(C组),其中C组在细胞长至80%融合度时加入10 mg/mL七叶皂苷(采用生理盐水稀释),B组加入等量生理盐水,A组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组.对24孔板中各组细胞各时间点均采集图像,之后采用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术检测NGF、TrkA mRNA的表达变化.对96孔板中各组细胞各时间点采用MTT检测神经元生长活力.结果显示A组和B组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异(P>0.05),但A组及B组均有随时间点延长,三个指标上调的时间点(P<0.05),C组细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力均较A组及B组升高(P<0.05).NGF及TrkA mRNA的表达在A组和B组在各时间点无明显差异(P>0.05),C组各时间点较A组和B组上调(P<0.05),但随时间的延长,各组组内比较无统计学意义(P>0.05).表明七叶皂苷可促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调NGF及其受体TrkA的表达来实现.

直肠癌组织中proNGF凋亡前信号的研究

目的:探讨proNGF凋亡前信号在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法 :采用RT-PCR及Western blot技术检测直肠癌组织中proNGF凋亡前信号各因子proNGF、Sortilin、p75的表达,以12例瘤周正常组织为对照。结果:proNGF、Sortilin、p75 mRNA在直肠癌组织中的表达分别为031±0.03、0.35±0.07、0.41±0.08,在正常组织中高表达,分别为0.79±0.06、0.73±0.10、0.84±0.11,2组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);proNGF、Sortilin、p75蛋白在直肠癌组织中的表达分别为052±0.05、0.31±0.04、0.41±0.09,在正常组织中分别为0.83±0.16、0.53±0.08、0.72±0.12,正常组织亦明显高于直肠癌组织(P<0.05)。结论:proNGF凋亡前信号所导致的细胞凋亡信号参与了直肠癌的发生、发展过程,其较低的表达可能是导致直肠癌的一种内在机制。

BiPAP呼吸机联合坎地沙坦酯对肺心病急性期合并呼吸衰竭老年患者心肺功能及血清内皮素-1、Clara细胞蛋白和Copeptin水平的影响

目的分析BiPAP呼吸机联合坎地沙坦酯对肺心病急性期合并呼吸衰竭老年患者心肺功能及血清内皮素(ET)-1、Clara细胞蛋白(CC)16、和肽素(Copeptin)水平的影响。方法96例肺心病急性期合并呼吸衰竭老年患者随机分为两组各48例,对照组接受BiPAP无创呼吸机治疗,观察组接受BiPAP无创呼吸机联合坎地沙坦酯治疗。比较两组治疗2 w后的疗效、心肺功能指标及血清ET-1、CC16和Copeptin水平,并统计不良反应发生情况。结果观察组总有效率较对照组显著高(P<0.05)。治疗2个疗程后观察组肺动脉压(PASP)显著低于对照组,而每搏输出量(SV)、射血分数(EF)、舒张早期峰值速度与舒张晚期峰值速度比值(E/A)、1 s用力呼气容积(FEV1)/用力肺活量(FVC)、FEV1%、呼吸流量峰值(PEF)指标水平显著高于对照组(P<0.05)。两组治疗后血清ET-1、CC16和Copeptin水平均显著下降,且观察组降低较多(P<0.05)。主要不良反应为低血压、头痛、恶心、发热等,两组发生率无统计学差异(P=0.726)。结论BiPAP呼吸机联合坎地沙坦酯对老年患者肺心病急性期合并呼吸衰竭疗效显著。

血管内皮生长因子对急性心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能和细胞凋亡的影响。方法采用结扎冠状动脉的方法建立大鼠急性心肌梗死模型,取40只模型大鼠,按照随机数字表法分为模型组20只和VEGF治疗组20只,并设假手术组20只,所有大鼠均尾静脉注射给药。4周后,通过高频率超声影像系统检测以下指标:收缩末期左室内径(LVIDs)、射血分数(EF)、舒张末期左室内径(LVIDd)、每搏输出量(SV)、短轴缩短率(FS)。生化分析法测定血清中心肌酶含量;TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡状况,Western blotting法测定心肌组织caspase-3蛋白表达;RT-PCR法测定心肌组织bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果与模型组比较,经VEGF治疗能够显著降低急性心肌梗死大鼠LVIDd和LVIDs,提高FS、EF和SV;显著降低血清中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量;明显改善肌组织细胞凋亡状况,显著降低心肌细胞凋亡指数(AI),显著下调caspase-3蛋白表达,显著上调bcl-2 mRNA表达并显著下调Bax mRNA表达,提高bcl-2/Bax mRNA表达比值,上述差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF具有改善AMI大鼠心功能的作用,并且可对AMI大鼠心肌细胞凋亡起到有效抑制作用,作用机制可能与VEGF可对凋亡相关基因、蛋白表达起到有效调节作用存在一定的相关性。

三七总皂苷减弱多黏菌素E诱导小鼠肾毒性

目的探究三七总皂苷(PNS)对多黏菌素(PM)E诱导的小鼠肾功能是否具有保护作用及其作用机制。方法建立PME诱导的小鼠肾毒性模型,经PNS处理后,分为对照组、PNS组、PME组及PNS+PME组,分别评估小鼠肾功能指标[肾指数、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)]及氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)]。采用苏木素-伊红(HE)染色检测肾脏病理变化。小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)体外实验中,经PME(100μg/ml)处理的细胞,经过一系列梯度浓度PNS处理(25~200μg/ml)后,分为PNS+PME组、PNS0组、PNS25组、PNS50组、PNS100组及PNS200组,分别检测氧化应激指标(SOD、MDA、GSH-Px)及细胞凋亡相关基因caspase-3、caspase-9 mRNA含量。结果体内实验中,PME组肾功能指标BUN、CRE均显著高于对照组(均P<0.05),PNS+PME组肾功能指标与对照组间无显著差异(P>0.05)。PME组SOD、GSH-Px水平均显著低于对照组,MDA显著高于对照组(均P<0.05),PNS+PME组各项指标均与对照组无显著差异(P>0.05)。小鼠肾脏组织病理结果显示,PME组肾脏组织损伤严重,经PNS处理后得到明显改善。体外细胞实验中,经一系列浓度梯度PME处理的细胞,细胞活性率逐渐降低。同一浓度(100μg/ml)PME和一系列梯度浓度PNS浓度同时处理的细胞,随着PNS浓度的增加,氧化应激指标(ROS、SOD、DAS、GSH-Px)及caspase-3、caspase-9 mRNA含量均越来越接近对照组。结论PNS可通过缓解氧化应激反应及细胞凋亡,达到有效减轻PME诱导的小鼠肾毒性。

三七皂苷R1保护四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的作用

背景:前期研究发现,三七总皂苷对小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用。目的:探究三七皂苷R1对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠的治疗作用。方法:用四氯化碳诱导SD雄性大鼠制备肝纤维化模型,给药组按照60 mg/kg的剂量给予30 g/L三七皂苷R1溶液,1次/d,连续4周和6周。对照组及模型组给予同体积的生理盐水,采用苏木精-伊红染色及Masson染色观察肝脏组织结构和纤维化程度分期;反转录-定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测法检测Ⅰ型胶原、α-平滑肌激动蛋白和转化生长因子β1表达水平。实验方案经昆明医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为approval No.KMMU2018018)。结果与结论:(1)肝组织病理学显示,与模型组相比,三七皂苷R1能显著减轻纤维增生程度;(2)与模型组相比,三七皂苷R1组Ⅰ型胶原、α-平滑肌激动蛋白和转化生长因子β1表达水平显著降低(P<0.05),三七皂苷R1给药4周与6周组比较差异无显著性意义;(3)结果提示,三七皂苷R1对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠具有一定的治疗作用。

金腰带治疗对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及行为学的影响

目的研究中草药金腰带治疗对脊髓损伤(SCI)大鼠行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)表达及N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体水平的影响。方法 SD成年雄性大鼠,随机分为假手术组、脊髓挫伤组(SCI组)、脊髓挫伤后金腰带治疗组〔每日1次胃内灌服金腰带50mg/(kg.d),共7次〕。各组大鼠均在术后(0d、3d、10d、28d)进行后肢行为学评价(BBB运动功能评分)。术后13d,每组取8只大鼠麻醉后取损伤脊髓T10液氮中保存,采用[3 H]MK-801放射性配基分析法测定NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合数量(Bmax);取术后28d组大鼠损伤脊髓进行免疫组织化学染色,观察BDNF在脊髓的定位及表达变化。结果 BBB评分SCI组大鼠各时间点均低于假手术组(P均<0.05),而金腰带治疗组术后各时间点均高于SCI组(P均<0.05)。SCI后13d,脊髓内NMDA受体Bmax较假手术组增高(P<0.05),金腰带组较SCI组减少(P<0.05);SCI后28d损伤处脊髓腹角、背角BDNF阳性神经元数量较假手术组增加(P<0.05),金腰带治疗组BDNF阳性神经元数量较SCI组进一步增加(P<0.05)。结论金腰带治疗能有效改善SCI大鼠后肢运动功能,增加脊髓组织中BDNF的表达和通过影响脊髓NMDA受体减轻脊髓继发性损伤,对SCI有一定的治疗与保护作用。

三七皂苷R1对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3信号的影响

目的:探讨SD大鼠肝纤维化后肝组织及血清中转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)及Smad3的表达和变化,以及三七皂苷R1对肝纤维化的保护作用。方法:72只健康雄性SD大鼠分为对照组、二甲基亚硝胺(NDMA)组和三七皂苷R1组,再按不同时间点分为1、2、4周,3个亚组,每个亚组8只动物。NDMA组采用NDMA 2 m L/kg腹腔注射,三七皂苷R1组同时静脉注射三七皂苷R1,剂量为100 mg/kg体重,对照组注射等量的生理盐水。在各组的不同时间点采用RT-PCR及ELISA技术检测肝组织及血清中TGF-β1、Smad3的表达及变化。结果:1、TGF-β1、Smad3 m RNA及蛋白在各组中均有表达。2、对照组各时间点比较均无统计学意义(P>0.05)。NDMA组中,随着损伤时间的延长,TGF-β1、Smad3 m RNA及蛋白的表达逐渐上调,且各时间点与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。而三七皂苷R1组TGF-β1、Smad3 m RNA及蛋白在各时间点均较NDMA组表达下调,有统计学意义(P<0.05)。结论:1、TGF-β1/Smad3信号参与了肝纤维化的发生和发展过程,且随损伤的逐渐加重,表达越高。2、三七皂苷R1可降低肝组织中TGF-β1/Smad3信号的表达,减轻肝细胞的纤维化,发挥保护肝组织损伤的作用。