基于ARMS法检测BRAF V600E突变在甲状腺乳头状癌中的临床价值

目的探讨扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测BRAF V600E突变的可行性,并评估BRAF V600E突变对鉴别甲状腺结节性质的临床价值。方法采用ARMS法检测并比较179例甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)和115例甲状腺良性病变组织的BRAF V600E突变状态,计算BRAF V600E突变对鉴别甲状腺结节性质的各项诊断指标,分析BR A F V600E突变与PTC临床病理特征的相关性。结果ARMS法检测甲状腺病灶组织中的BRAF V600E突变方法可行,结果可信。BRAF V600E在PTC中的突变率为82.68%,而在良性组织中的突变率仅为1.74%,两者差异有统计学意义(χ2=183.568,P<0.01)。利用BRAF V600E突变判定甲状腺结节性质的诊断敏感度为82.68%,特异度为98.26%,准确度为88.76%,约登指数为0.8094。BRAF V600E突变与PTC患者的性别、年龄、肿瘤大小、病灶数目、双侧病灶、腺外侵犯以及淋巴结转移等因素无关。结论 ARMS法检测BRAF V600E突变具有较高的诊断敏感度和特异度,其对鉴别甲状腺结节的性质具有重要的临床早期诊断价值。

探针扩增阻滞突变法与数字PCR法检测甲状腺乳头状癌BRAF基因突变

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲状腺癌中最常见的类型,约占甲状腺癌的90%[1]。虽然目前绝大多数PTC预后较好,但仍有30%的PTC患者术后出现反复复发及远处转移[2]。Kimura等[3]研究发现70%的PTC可能存在分子改变,包括编码受体酪氨酸激酶RET、神经营养受体酪氨酸激酶-1(NTRK1)基因,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的两个细胞内效应基因RAS和BRAF。

甲状腺乳头状癌中鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1V600E突变与慢性淋巴细胞性甲状腺炎关系的研究

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)占甲状腺癌的75.5%~87.3%,其预后较好。鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(V-raf murine sarcoma viral oncogenehomolog B1,BRAF)基因编码的B型有丝分裂原激活的蛋白依赖性激酶是RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK信号通路的关键成分,该信号通路调节细胞的生长、增殖和凋亡。

数字油滴PCR法与ARMS法检测结直肠癌BRAF基因突变中应用价值

目的探讨数字油滴聚合酶链式反应法(ddPCR)与扩增阻碍突变系统法(ARMS)在结直肠癌患者丝/苏氨酸特异性激酶基因(BRAF)V600E突变检测中的应用价值。方法收集2018年4月—2019年7月浙江大学医学院杭州市第一人民医院诊治的162例结直肠癌患者的手术标本,采用ARMS法和ddPCR法检测结直肠癌患者BRAF V600E突变,比较ARMS法和ddPCR法检测阳性率及一致性,分析BRAF V600E突变与结直肠癌患者临床病理特征的关系。结果ARMS法和ddPCR法检测BRAF V600E突变阳性率为8.64%(14/162)和9.26%(15/162)。对ARMS法检测BRAF V600E突变存在歧义的1例进行高通量测序,ddPCR法与高通量测序的结果一致。对应ddPCR法,ARMS法的阳性符合率、阴性符合率和一致性分别为93.33%、99.32%和99.38%。年龄越高、组织学类型低分化、临床分期Ⅲ~Ⅳ期患者BRAF V600E突变分布越高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ddPCR与ARMS均可用于检测结直肠癌的BRAF V600E突变,ddPCR有更高的检测效能。

FNA样本BRAF V600E基因突变检测对甲状腺结节定性诊断的应用价值

超声引导下进行细针穿刺细胞学检查(fine needle aspiration,FNA),为当前鉴别甲状腺结节最常用手段,具有准确性高、微创以及易操作等优点,但依然存在10%-40%的甲状腺结节难以经FNA明确诊断^([1])。BRAF V600E基因突变为目前报道最多的一种甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)突变类型。以往研究指出,BRAF V600E基因突变检测能够辅助细胞学诊断^([2])。本文以98个甲状腺结节FNA样本为实验对象,探讨甲状腺结节FNA样本检测BRAF V600E基因突变在良恶性定性诊断中的应用价值,以期为提高甲状腺结节诊断准确性提供有效途径应用依据。现报道如下。

基于实时荧光定量PCR的ARMS法检测BRAFV600E点突变在甲状腺微小乳头状癌中的早期诊断价值

目的探讨BRAF V600E点突变在甲状腺微小乳头状癌(PTMC)和甲状腺良性病变中的表达状况,并评估其在PTMC中的早期诊断价值。方法采用基于实时荧光定量PCR技术的扩增阻滞突变系统(ARMS)法检测并比较104例PTMC和42例甲状腺良性病变中BRAF V600E点突变的表达差异,分析BRAF V600E点突变与PTMC临床病理特征的相关性,计算BRAF V600E点突变对鉴别PTMC及甲状腺良性病变的各项临床诊断指标。结果 104例PTMC的BRAF V600E点突变率为83.65%,而42例甲状腺良性病变的突变率仅为2.38%,BRAF V600E点突变率在2组间差异有统计学意义(χ2=82.531,P<0.05)。BRAF V600E点突变与PTMC患者的性别、年龄、肿瘤大小、病灶数目、双侧累及、被膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期均无相关性(P>0.05)。ARMS法检测BRAF V600E点突变对诊断PTMC的敏感度为83.65%,特异度为97.62%,准确度为87.67%,约登指数为0.812 7,阳性预测值为98.86%,阴性预测值为70.69%。结论 BRAF V600E点突变是诊断PTMC的重要标记物,基于实时荧光定量PCR的ARMS法检测BRAF V600E点突变对PTMC具有良好的早期诊断价值。

组织和血浆BRAF~(V600E)突变联合检测在甲状腺乳头状癌中的临床价值研究

目的探讨组织和血浆BRAF^(V600E)突变对鉴别甲状腺结节性质及评估甲状腺癌病情的临床价值。方法收集188例甲状腺乳头状癌(PTC)和141例甲状腺良性病变患者的新鲜组织和血浆标本。检测并比较PTC和甲状腺良性病变患者组织和血浆中的BRAF^(V600E)突变差异,评价BRAF^(V600E)突变对鉴别甲状腺结节性质的各项诊断指标并分析其与PTC临床病理特征的相关性。结果不论是组织还是血浆标本,PTC和甲状腺良性病变患者之间的BRAF^(V600E)突变差异有统计学意义(P<0.01)。组织学BRAF^(V600E)突变诊断PTC的曲线下面积(AUC)为0.909,敏感度为84.04%,特异度为97.87%,准确度为89.97%,约登指数为0.819。在179例初治PTC患者中,组织和血浆BRAF^(V600E)突变均与PTC患者不同性别、年龄、肿瘤大小、病灶数目、双侧累及、腺外侵犯、淋巴结转移以及复发危险分层等临床病理特征无关(P>0.05)。结论甲状腺良恶性疾病患者组织和血浆中的BRAF^(V600E)突变存在显著差异,组织学BRAF^(V600E)突变检测对鉴别甲状腺结节的性质具有较高的临床诊断价值。

BRAFV600E突变比值在预测甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移中的临床价值

目的 探索BRAFv600E突变比值(The Ratio of BRAFTM expression),在预测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)颈部淋巴结转移(lymph node metastasis,LNM)中的临床价值.方法 收集于浙江大学医学院附属杭州市第—人民医院2018年1月至2019年1月间手术治疗的234例PTC患者,采用微滴数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)定量法检测病理石蜡标本BRAFv600E突变比值,分析突变比值与PTC患者LNM的相关性,构建受试者工作特征曲线(ROC).结果 PTC患者伴有LNM者的BRAFv600E突变比值显著高于无LNM者(P<0.01),ROC曲线显示BRAFv600E突变比值预测LNM的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和曲线下面积(AUC)分别为27.7%、91.0%、73.3%、58.5%、0.581.结论 利用PTC病理石蜡标本中BRAFv600E突变比值预测LNM有较高的特异性,可为PTC颈淋巴结清扫提供临床决策.

BRAF^V600E突变比值在合并桥本甲状腺炎甲状腺乳头状癌中的初步研究

目的探索桥本甲状腺炎(HT)对甲状腺乳头状癌(PTC)中BRAF^V600E突变比值(the ratio of BRAF^V600E alleles)的影响。方法收集242例PTC患者临床资料,其中PTC合并HT 63例,PTC不合并HT 179例,采用微滴数字PCR(ddPCR)法检测PTC中BRAF^V600E状况。利用倾向性评分匹配法(PSM),以性别、年龄、多灶性、腺外侵犯、肿瘤直径为控制变量按1∶1比例构成63对配对,比较匹配后两组BRAF^V600E阳性率和突变比值。结果倾向性评分匹配前,PTC合并HT组和PTC不合并HT组BRAF^V600E阳性率分别为87.3%和92.7%,两组间差异无统计学意义(P>0.05),而PTC合并HT组BRAF^V600E突变比值(3.20%)显著低于PTC不合并HT组(8.80%)(P<0.001)。经过倾向性评分匹配,两组基线水平保持一致,PTC合并HT组BRAF^V600E突变比值(3.20%)仍显著低于PTC不合并HT组(9.00%),两组间差异有统计学意义(P=0.001)。结论在合并HT的PTC中,BRAF^V600E突变的发生未受影响,但是BRAF^V600E突变比值明显降低,说明HT对PTC发展过程中BRAF^V600E突变存在一定影响,从而影响PTC发展及其预后。