RNA干扰分子的制作

小干扰RNA是一种能够在各种生物体和细胞(包括蠕虫、果蝇、植物、哺乳动物)中减弱基因表达的有效工具。在哺乳动物中转染的siRNA能够抑制特殊基因的表达,这已经证明是探索基因功能、基因敲除、抗病毒研究、基因治疗的有效方法。简单、有效、特异性地抑制基因的表达具有巨大的科学、商业和医学治疗价值。如何设计和制作siRNA是影响RNA干扰效率的一个很重要的方面。本文就siRNA的设计和制作等方面作扼要的介绍。

HBV/HEV融合基因大肠杆菌表达载体的构建与初步表达

[目的]为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效表达载体。[方法]从乙型肝炎患者血清中提取adr型基因组,采用PCR方法扩增出S基因;从戊型肝炎患者的粪便中提取RNA,采用RT-PCR的方法扩增出ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接;菌落PCR;双酶切;测序鉴定后,将这两部分重组入含有Ω增强子的pTΩ-T7高效的E.coli表达载体中。[结果]构建了pTΩ-T7SE表达载体并且表达出相应的目的蛋白。[结论]该方法为同时预防乙型和戊型肝炎提供了一个较好的途径。

HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果：获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论：成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。

HBV/HEV二价抗原的载体构建与表达

为构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价疫苗抗原的大肠杆菌高效重组原核表达载体,采用PCR方法扩增出HBV的S基因,及HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,经过T载体连接、菌落PCR、双酶切、测序鉴定后,将这两部分重组入含有增强子的pT-T7高效的E.coli表达载体中。构建了pT-T7SE表达载体并且表达出相应的目的蛋白。该实验结果为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。

对一道简答题的商榷

在辅导学生复习时,遇到这样的一道题目'下图曲线表示A,B,C,三种物质通过细胞膜的情况,请按图回答下列问题。' (1)三种物质通过细胞膜的方式别为A____,B____,C____。 (2)在M点后,B,C不随浓度增大而增高的原因是____。 (3)C曲线的变化表示其运输方式与____