水溶性海参皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

从冻干仿刺参加工废弃液中分离纯化出水溶性海参皂苷,筛选并纯化出其强抗真菌活性组分,为利用水溶性海参皂苷研制高效抗真菌药物创造条件.先后利用大孔树脂柱层析和硅胶柱层析对水溶性海参皂苷进行了纯化,并对各种纯化组分的抗真菌活性进行了测定.在30%,50%,70%,80%,95%乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中,70%乙醇溶液洗脱组分对裂殖酵母菌和白色念珠菌的抗真菌活性最强.70%乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后,得到了SC-1、SC-2、SC-3和SC-4四种纯化样品,除SC-1无抗真菌活性外,其它3种纯化样品对裂殖酵母菌和白色念珠菌均具有显著的抗真菌活性,且组分SC-2和SC-3的抗真菌活性高于SC-4.SC-2纯化样品在高压液相柱层析(HPLC)图谱中仅显示为单一洗脱峰,且在旋转蒸发后可形成结晶,表明其纯度极高,可用于高效抗真菌药物的研制.

水溶性海星皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

为了分离纯化出具有强抗真菌活性的水溶性海星皂苷,以罗氏海盘车(Asterias rollestoni)腕为实验材料,利用水抽提方法获得水溶性海星皂苷粗品,依次利用大孔树脂和硅胶柱层析对水溶性海星皂苷进行了纯化,并对其抗真菌活性进行了测定。研究结果发现,在30%、50%、70%、80%、95%乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中,70%乙醇溶液洗脱组分对白色念珠菌和裂殖酵母菌的抗真菌活性最强。70%乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后,得到了SF-1、SF-2、SF-3和SF-4四种纯化样品,其中SF-1纯化样品没有抗真菌活性,SF-2纯化样品具有极弱的抗真菌活性,SF-3和SF-4纯化样品均具有很强的抗真菌活性。SF-3纯化样品在高压液相柱层析(HPLC)图谱中仅显示单一洗脱峰,表明其纯度很高,可应用于高效抗真菌药物的研制。研究结果为利用水溶性海星皂苷研制高效抗真菌药物奠定了基础。

海洋无脊椎动物酚氧化酶的研究进展

海洋无脊椎动物缺乏真正意义上的抗体,没有免疫记忆,只能靠非特异性免疫系统防御和抵抗病原体的感染。酚氧化酶原激活系统是海洋无脊椎动物非特异性免疫系统中至关重要的一员,而酚氧化酶作为该系统末端的一种含铜金属酶,则通过催化黑化反应在海洋无脊椎动物非特异性免疫防御中发挥了关键的作用。本文结合作者已有的研究成果并综合本领域的大量参考文献对酚氧化酶原激活系统和酚氧化酶的免疫学功能、激活机制、生化性质与酶性质以及基因与分子结构等方面的研究进展进行综述。

植物组织培养中细胞凋亡的初步研究

细胞凋亡是指由基因控制的、细胞遵循自身程序,主动结束生命的过程。现在,许多检测细胞凋亡的方法已经建立,还发现了许多凋亡相关基因和蛋白,并基本阐明了凋亡信号的转导途径。但这些成果多来自对动物的研究。本实验旨在培养愈伤组织,利用紫外线(UV)和过氧化氢(H2O2)诱导愈伤组织的细胞凋亡,通过苯酚品红染色观察,对植物愈伤组织细胞在凋亡过程中的形态变化(主要是细胞核的形态变化)进行初步的研究。结果显示:植物愈伤组织细胞凋亡的初期,染色质断裂、聚缩,并趋向贴附于核膜;中期,细胞核膨大、破裂;晚期,出现凋亡小体。另外,UV对植物愈伤组织诱导的效果比H2O2更好。

染料木黄酮通过下调磷酸化蛋白激酶B减轻小鼠动脉粥样硬化

目的:检测染料木黄酮对小鼠颈总动脉组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平的影响,并探究染料木黄酮对于小鼠颈总动脉粥样硬化的预防及治疗作用。方法:实验选用50只6周龄的SPF级纯种雄性C57BL6小鼠,随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、阿托伐他汀钙组、低浓度染料木黄酮组和高浓度染料木黄酮组。颈总动脉套管后喂养14周处死小鼠,血清检测血脂4项,H-E染色观察形态学变化,油红O染色观察脂滴含量,蛋白质印迹和免疫荧光检测p-Akt蛋白含量。结果:空白对照组,高、低浓度染料木黄酮组和阿托伐他汀钙组的血脂水平明显低于模型组。组织病理学观察表明,除模型组外,其余各组颈动脉结构均无斑块形成,且脂滴含量较少。蛋白质印迹和免疫荧光检测分析显示,模型组p-Akt表达水平显著高于染料木黄酮组、阿托伐他汀钙组和空白对照组。结论:染料木黄酮可通过下调p-Akt进而减轻小鼠颈总动脉粥样硬化的形成。

NF-κB和P38MAPK在BMSCs肝向分化中的作用

目的探讨信号转导分子核因子κB(NF-κB)和P38MAPK在肝细胞生长因子(HGF)、肝组织液(LTF)介导下骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞定向分化过程的作用。方法采用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,利用HGF、LTF两种诱导剂以及NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082对第3代BMSCs进行分组培养。采用吲哚靛青绿(ICG)摄取实验检测肝向分化的细胞,免疫组化染色检测NF-κB蛋白表达,Western Blot法检测NF-κB、p-P38和AAT表达。结果经HGF、LTF诱导20d后的细胞可摄取ICG。免疫组化检测显示,BMSCs经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞核内有NF-κB蛋白表达,添加抑制剂BAY 11-7082后细胞核内NF-κB蛋白表达减弱(F=572.2、280.9,P<0.01)。Western Blot检测显示,经HGF、LTF两种诱导剂诱导后,细胞内NF-κB和p-P38蛋白表达量显著增加,且细胞能够表达AAT蛋白,加入抑制剂BAY 11-7082后随着培养时间的延长,NF-κB、p-P38和AAT蛋白表达量均出现不同程度的降低(F=280.8~3 028.2,P<0.01)。结论 HGF、LTF均可诱导BMSCs向肝细胞分化,P38MAPK和NF-κB信号通路均参与了BMSCs的肝向分化,P38MAPK信号通路的调控主要出现在肝向分化的前期,NF-κB的抑制在前期对其无明显影响。

低浓度过氧化氢预处理骨髓间充质干细胞对创面愈合的促进作用

目的：观察低浓度过氧化氢（H2O2）预处理骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植到大鼠组织缺损创面后BMSCs在创面的存活情况及其对创面的促愈合作用。方法：75只SD大鼠，于背部中线靠颈侧制备直径1cm的圆形全层皮肤缺损。按随机数字表法分为3组（每组25只）：生理盐水组、单纯BMSCs组和H2O2预处理BMSCs组。在伤后即刻，分别经尾静脉注射等体积（0．5ml）的生理盐水、CM-Dil标记的BMSOs悬液或50umol／LH2O2预处理12h并经CM—Dil标记的BMSCs。伤后0～15d创面拍照，用ImageProplus5．0图像分析软件分析图像，计算刨面愈合率；伤后1、2、5d荧光显微镜下观察两BMSCs组创面BMSCs的数量；CD31免疫组化染色观察创面微血管密度的变化。结果：①创面干细胞数量：移植H2O2预处理的BMSCs后，创面干细胞数量明显多于单纯BMSCS移植组（P〈0．05和P〈0．01）。与伤后第1天比较，单纯BMSCs组伤后第2天和第5天创面干细胞数量显著减少（P〈0．05）；而预处理组创面干细胞数量虽然也呈进行性减少，但3个时相点创面的干细胞数量差异没有显著性（P〉0．05）。②创面愈合率：创伤后5～15d，单纯BMSCs组和H2O2预处理BMSOs组创面愈合率均明显高于生理盐水组（P〈0．05或P〈0．01）；创伤后5～10d，H2O2预处理组创面愈合率明显高于单纯BMSOs组（P〈0．05）。③创面微血管数量：CD31免疫组化结果显示，伤后3d，两BMSOs治疗组之间血管数量差异无显著性；伤后5、7、10d，H2O2预处理组创面微血管数量显著多于单纯BMSCs组（P〈0．05）。结论：BMSCs经低浓度H2O2预处理再移植到创面，可以延长移植干细胞在创面的存活时间，并具有更好的促进创面愈合和血管生成的修复潜能。

LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响

目的观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。方法应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs。采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择最佳刺激浓度。应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。结果不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显。免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1~481.8,P<0.01)。Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1~1 531.0,P<0.01)。结论炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖。长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达。

论河道综合治理与滨水景观营造

本文以富平县景观项目为例,就休闲公园、林带、河道进行综合设计,从而达到河道综合治理与滨水景观营造的叠加效果的目的。

仿刺参水溶性海参皂苷的分离纯化及其抑瘤活性研究

为了获得具有显著抑瘤活性的水溶性海参皂苷样品,利用大孔树脂柱、硅胶柱和葡聚糖凝胶柱对水溶性海参皂苷进行了分离纯化,并对其体内外抑瘤活性和诱导肿瘤细胞凋亡进行了检测。研究结果显示,大孔树脂柱的70%乙醇洗脱组分以及硅胶柱色谱的部分纯化组分(pSC-2和pSC-3)对HeLa细胞、A-549肺癌细胞、SGC-7901胃癌细胞和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抑瘤活性;经过葡聚糖凝胶柱色谱,获得了纯度均在99.6%以上、具有三萜类皂苷性质的SC-2和SC-3纯化样品,发现SC-2纯化样品不仅能浓度和时间依赖性地抑制HeLa细胞的体外增殖,还能剂量依赖性地抑制S180实体瘤的体内生长,提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数。细胞凋亡检测结果显示,SC-2纯化样品可剂量依赖性地诱导HeLa细胞凋亡,SC-2纯化样品(10和50mg.L-1)处理12h的HeLa细胞均出现了DNA片段化。可见,水溶性海参皂苷SC-2纯化样品具有显著的抑瘤活性,其机制可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来实现的。

动物血红蛋白结构与功能的研究进展

动物Hb除运输和储存氧气外还具有调节pH值、控制一氧化氮水平、参与免疫反应、结合并运输硫化物等多种生物学功能,是研究呼吸蛋白多重生物学功能的理想分子,已经引起了学者们的浓厚兴趣。结合研究成果并综合本领域的大量学术文献,对动物Hb的分子结构、生物学功能及其研究进展进行综述。

CUGBP1基因对EGCG诱导人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡作用研究

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡影响及与CUGBP1表达的关系。方法:MTT法检测不同剂量EGCG对A549细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化和蛋白质印迹法检测各处理组CUGBP1蛋白的表达;Real-Time PCR对CUGBP1mRNA表达进行定量分析。结果:EGCG显著抑制A549细胞增殖活性,F=1 096.65,P<0.001;EGCG孵育4和24hA549细胞的凋亡率分别为(34.10±1.10)%和(51.62±1.50)%,较4和24h正常对照组的(3.90±0.97)%和(1.53±1.11)%明显增加,差异有统计学意义,F=1 254.28,P<0.001。A549细胞细胞核和细胞质内CUGBP1蛋白表达呈阳性,EGCG孵育4h可见A549细胞核CUGBP1蛋白表达呈阴性;孵育24h,部分A549细胞变圆、核固缩,CUGBP1蛋白表达又呈阳性。CUGBP1mRNA定量分析可见,EGCG明显抑制CUGBP1表达,EGCG孵育24h,A549细胞中CUGBP1mRNA相对表达量为(0.71±0.076),较4h的(0.40±0.017)高,差异有统计学意义,t=-6.782,P=0.020。结论:EGCG干扰CUGBP1基因表达抑制人肺癌细胞株A549的增殖,可能是EGCG促进A549细胞凋亡的途径之一。

动物呼吸蛋白的研究进展

动物呼吸蛋白除参与呼吸作用外还具有稳压、抗菌和抗病毒等多种生物学功能,是研究蛋白质多重生物学功能的理想分子,已引起了学者们浓厚的研究兴趣。结合研究成果并综合本领域的大量学术文献,对血红蛋白、血蓝蛋白和蚯蚓血红蛋白等动物呼吸蛋白的分子结构、生物学功能及其研究进展进行综述。

HDAC2 sumo-E3连接酶活性在DLD1细胞迁移和增殖中的作用

目的:探讨HDAC2 sumo-E3连接酶对DLD1细胞迁移与增殖的影响和可能机制。方法:全基因合成HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488),并构建其重组慢病毒表达载体;感染DLD1hdac2-/-细胞(无内源性HDAC2表达),筛选稳定表HDAC2(325-488)的细胞克隆DLD1h325-488;RTCA实时细胞分析仪、Trans-well等检测DLD1h325-488稳定细胞的增殖和迁移能力;免疫印迹、q RT-PCR检测DLD1h325-488稳定细胞增殖和迁移相关基因的表达。结果:构建了稳定表达HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488)的细胞株DLD1h325-488,并获得稳定表达HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488)的DLD1h325-488细胞。与对照组细胞相比,DLD1h325-488细胞增殖活性无显著变化,但是细胞的迁移能力和迁移相关蛋白MMP14的表达显著上升。结论:HDAC2 sumo-E3连接酶可能通过上调mmp14的表达而促进DLD1细胞的迁移。