凝胶层析分离纯化乳酸菌菌体蛋白条件的优化

采用凝胶过滤层析分离纯化乳酸菌菌体蛋白,选择不同的凝胶过滤介质、过滤柱高度、洗脱流速、样品上样量对经过Sephadex G-25脱盐处理的乳酸菌菌体蛋白进行洗脱,观察洗脱峰。结果表明,凝胶过滤介质、过滤柱过度、洗脱流速和样品上样量均不同程度的影响菌体蛋白的纯化效果。在本试验中,分离纯化乳酸菌菌体蛋白的凝胶过滤层析参数为:Sephadex G-75的层析介质以45 cm的柱床高度,洗脱流速0.75 m L/min,样品上样量为5%CV时,对乳酸菌菌体蛋白可达到最佳的分离纯化效果。

酸菜发酵液多糖的分离纯化及结构分析

以醇沉法提取的酸菜发酵液粗多糖为原料,研究了酸菜发酵液多糖的分离纯化工艺,并对其结构及单糖组成进行了初步鉴定。比较了Sevag法、TCA﹣正丁醇法、TCA与木瓜蛋白酶结合法及Sevag与木瓜蛋白酶结合法4种脱蛋白方法,利用DEAE-52纤维素柱和Sephadex-50葡聚糖凝胶柱层析精制得到了SJPⅡ-1,通过红外光谱(infrared spectroscopy,IR)和高效液相色谱(high performance liguid chromatography,HPLC)分析SJPⅡ-1的结构及单糖组成。试验结果表明,TCA与木瓜蛋白酶结合法是较佳脱蛋白方法,蛋白质的清除率为94.86%,多糖的损失率为19.77%;IR检测结果显示,SJPⅡ-1具有多糖特征结构;HPLC分析结果表明,SJPⅡ-1主要由果糖、甘露糖、鼠李糖、葡萄糖4种单糖组成。

酸菜发酵液多糖提取及其抗氧化活性测定

试验以东北酸菜发酵液为材料,提取酸菜发酵液多糖。在单因素试验基础上,选择乙醇浓度、提取时间和p H值3个因素的3水平进行中心组合(Box-Behnken)试验。试验结果表明,酸菜发酵液多糖的最佳提取条件为:乙醇浓度85%,提取时间16 h,p H8.4。在该条件下的预测值为1.891g/L,验证值为1.87 g/L。通过体外清除超氧阴离子和DPPH自由基的测定,研究酸菜发酵液多糖的体外抗氧化活性。结果表明,当酸菜发酵液多糖的浓度达到1.0 mg/m L时,其对超氧阴离子和DPPH的清除率分别为72.08%和52.48%,酸菜发酵液多糖具有较强的体外抗氧化活性。