北京欧文氏菌4个糖基转移酶活性测定及蛋白相互作用分析

北京欧文氏菌(Erwinia beijingensis)可引起刺芹侧耳细菌性软腐病,为明确该病原菌中糖基转移酶的功能,以糖基转移酶基因为研究对象,构建重组表达载体进行表达纯化;并测定蛋白活性,分析蛋白间相互作用。结果表明,成功构建了原核表达载体,获得4个可溶性蛋白。经亲和层析柱纯化获得MshA、WbnH2、EpsH及TuaG蛋白,活性测定显示4个蛋白均可以利用UDP-糖,并优先利用UDP-半乳糖。GST pull down证实WbnH2及TuaG蛋白分别与MshA及EpsH蛋白在体外具有相互作用。以上研究结果为进一步研究北京欧文氏菌糖基转移酶基因功能奠定了基础。

不同蜜环菌属真菌胞外多糖生物功能的研究

以11种蜜环菌为研究对象,应用深层液体发酵获得胞外多糖,采用硫酸-苯酚法确定多糖的得率,利用肿瘤细胞HepG2共培养的方法研究了胞外多糖抑制肿瘤增殖的活性,通过铁离子还原能力法(FRAP)评价蜜环菌胞外多糖的总抗氧化能力。研究结果表明,各品种间胞外多糖的得率存在着显著差异,从0. 34 g·L^(-1)到9. 31g·L^(-1)不等,体外抗肿瘤研究显示品种间差异较为显著。其中,黄盖蜜环菌胞外多糖的活性最高,其半抑制质量浓度IC50仅为253. 6 mg·L^(-1),抗氧化检测结果显示秦氏蜜环菌的胞外多糖活力最高,可以达到976. 4μmol·g^(-1)。结合发酵多糖产量发现,北方蜜环菌胞外多糖是各品种中抗肿瘤功效显著的优势品种,而芥黄蜜环菌则是抗氧化功效的优势品种。

毛木耳多糖对乙醇性肝损伤的保护作用

采用乙醇诱导正常人肝细胞L02形成乙醇性肝损伤的体外模型,通过检测细胞内甘油三酯(TG)、活性氧(ROS)含量、胞外谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性等指标,评价毛木耳多糖提取物对乙醇性肝损伤的的保护作用及机理。结果表明,毛木耳多糖提取物的最佳作用浓度为40μg/m L时,与模型组相比较,细胞的存活率提高了26.84百分点,细胞内甘油三酯的含量显著下降,胞外转氨酶ALT和AST的活性降低。这一结果说明毛木耳多糖提取物能够提高损伤细胞的存活率,降低乙醇引发的肝内脂肪堆积,减少细胞凋亡,同时游离活性氧的检测结果显示毛木耳多糖提取物能够显著降低细胞内活性氧的含量,从而可推断其可能是通过抗氧化途径发挥防护作用。

白灵侧耳子实体发育相关基因的挖掘

白灵侧耳色泽洁白,营养丰富,且具有抗肿瘤、增强免疫力等多种功效,是我国具有自主知识产权的珍稀食用菌品种。探索白灵侧耳子实体发育相关基因能够为分子辅助育种提供有效、快速标记。实验前期获得了两株白灵侧耳双核菌株,JZB2106010能够结实形成子实体,JZB2106010的单核菌株经自交获得了1株不能形成子实体的双核菌株JZB2106103。以JZB2106010和JZB2106103为实验材料,进行转录组测序,获得了两个菌株的差异表达基因并进行了功能富集分析,其中催化活性和代谢过程本体中差异基因数目最多,选取部分表达差异显著的基因通过荧光定量PCR进行验证,结果显示编码苯丙氨酸裂解酶的基因(CL4509)和编码乙醇氧化酶的基因(CL2173)在JZB2106010中表达量显著提高,推断与白灵侧耳的子实体发育相关;另外还发现一个编码DNA解旋酶的基因(Unigene7793)在JZB2106103中的表达量是JZB2106010的1 046倍,推测该基因与白灵侧耳子实体发育呈负相关。

鲜切香菇贮藏过程中质构变化与自溶自噬分析

旨在明确鲜切香菇经过机械损伤后发生的应激生理以及自溶进程中细胞质构的变化。以香菇0912子实体新鲜切片为材料,研究低温和室温贮藏条件下香菇切片生理生化指标的变化趋势,利用显微技术研究老化组织中细胞结构的变化。结果显示低温贮藏条件有利于减缓鲜切香菇褐变、软化、蒸腾失重及抗氧化活性的下降。微观结构研究显示鲜切香菇经过机械损伤后激发了自溶自噬机制,细胞内出现胞壁断裂、胞膜消融、自噬体吞噬细胞器、大量DNA断裂、细胞核消失及细胞解体等现象。鲜切香菇切片在损伤后发生自溶自噬现象,微观组织结构的破坏,是菇体劣变的重要原因之一,在外界贮藏环境的共同作用下加速腐败的进程。

3种食用菌分级多糖消脂护肝功能研究

通过热水提取、乙醇沉淀的方式获得榆黄菇、毛木耳和灰树花多糖,利用分子量截留的超滤方法获得15个分级多糖组分。采用酒精和脂肪酸(FFA)共同诱导Hep G2细胞建立脂肪肝模型,以细胞存活率和胞内甘油三酯含量为检测指标评价分级多糖消脂护肝作用。研究结果发现PS V、AP V和GF V 3个分子量高于100 k Da的组分是各自品种分级多糖中的优势组分,比例分别为71.06%、34%和68.89%;3种分级多糖可以提高肝损伤细胞的存活率分别为27.61%、37.68%和29.25%,同时减少甘油三酯在细胞内的堆积,具有明显的消脂护肝作用。

卵孢侧耳生物学性状及驯化

对采自西藏林芝地区的卵孢侧耳(Pleurotus placentodes)菌株进行生物学性状及栽培研究。结果表明:卵孢侧耳菌丝生长的最适温度为24℃,pH为7.0~7.5;卵孢侧耳可在培养料为50%棉籽壳、30%苹果树木屑、18%麸皮、2%石灰(pH自然、含水量为65%~70%)中栽培出菇;从接种至第三潮菇采收完成大约需要94~109d,生物学效率为31.4%±3.5%。

杏鲍菇与白灵菇红斑病病原菌拮抗菌的筛选与鉴定

筛选并鉴定杏鲍菇和白灵菇红斑病病原菌的拮抗菌,为该病的生物防治提供实验证据。通过牛津杯法筛选拮抗菌,并通过16s r DNA分析进行拮抗菌鉴定。结果表明,筛选到杏鲍菇红斑病病原菌的拮抗菌1株,为GL110,白灵菇红斑病病原菌的拮抗菌2株,分别为GL110和GL52。GL110鉴定为类芽孢杆菌属细菌,GL52鉴定为贪铜属细菌。

野生与人工栽培的金针菇营养成分比较

金针菇（Flammulina velutipes）在自然界广泛分布，是我国最早进行人工栽培的食用菌之一，其菌盖滑嫩，菌柄细长脆嫩，形美味鲜，具有较高营养和药用价值。

食用菌菌渣资源化利用进展

由于食用菌生产中对栽培料的降解利用不彻底,产生大量菌渣(菌糠),如不妥善处理将可能对环境造成严重污染。笔者分析主栽食用菌产量(干重)与其菌渣产量(干重)比例,综述菌渣主要营养成分含量和利用途径,指出菌渣利用中存在的问题,并结合食用菌产业现状对菌渣资源化利用进行展望。

榆黄菇遗传多样性的ISSR和SRAP综合分析

榆黄菇味道鲜美,营养丰富,且必需氨基酸含量高,近几年成为食用菌的重要栽培种类之一。通过ISSR和SRAP分子标记方法对全国收集到的19个榆黄菇品种进行遗传多样性综合分析,从而为其杂交育种的亲本选择提供理论指导。筛选出10个ISSR引物和10对SRAP引物,利用筛选的引物,以榆黄菇的基因组DNA为模版进行PCR扩增,共获得194条清晰条带,其中150条是多态性条带,占总条带的77.3%。对条带进行聚类分析,结果表明在相似系数为0.70水平上,可将19个供试榆黄菇菌株分为4大类,表明19个供试榆黄菇菌株间具有较大的遗传差异,聚类分析图为杂交育种的亲本选择提供分子水平的依据。

19个香菇菌株基于ISSR、SRAP和TRAP分子标记的遗传多样性分析

利用简单重复序列间扩增(inter-simple sequence repeat,简称ISSR)、相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,简称SRAP)和目标区域扩增多态性(target region amplified polymorphism,简称TRAP)分子标记对19个香菇栽培菌株进行遗传多样性分析。结果显示,共筛选出34对(条)多态性丰富的引物,获得303条数据条带,其中多态性条带254条,多态性比例为83.83%,在遗传相似系数为0.75的水平上,将19个菌株分为6类。3种标记的多态性比例排序如下:TRAP(91.14%)>ISSR(83.15%)>SRAP(80.00%)。由结果可知,综合不同分子标记进行香菇的遗传多样性分析,可更加准确地反映菌株间的亲缘关系。

我国食用菌病害发生与防控概况

近年来,随着食用菌产业的发展,病害的发生亦愈来愈普遍和严重,成为制约食用菌产业提档升级和健康发展的主要瓶颈。通过介绍食用菌病害发生与防控的特点,指出了病害防控工作尚存的问题,并针对后期病害防控工作提出了相关建议,以期为食用菌病害综合防控体系的建立提供技术支撑,促进产业持续健康发展。

亚侧耳遗传多样性的ISSR和SRAP综合分析

对全国范围内收集到的19个亚侧耳菌株的遗传多样性进行简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,简称ISSR)和序列相关扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,简称SRAP)分析。首先随机选取19个亚侧耳菌株中的3个样本对ISSR和SRAP引物进行基因组DNA的PCR扩增,最终成功筛选出13条ISSR引物和13对SRAP引物。利用这26个引物或引物对,以19个亚侧耳菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,共获得301条稳定且清晰的DNA条带,其中285条具有多态性。聚类分析结果表明,在相似系数为0.70时,可将19个供试菌株分为5大类。利用ISSR和SRAP分子标记技术揭示了19个亚侧耳菌株的遗传多样性,为亚侧耳优良菌株的选育奠定了理论基础。

基于ISSR和SRAP分子标记的22株鸡腿菇遗传多样性和亲缘关系分析

为进行鸡腿菇(Coprinus comatus)的种质资源鉴定和及其分子育种提供理论依据,以22株鸡腿菇菌株为试材,采用ISSR和SRAP分子标记技术,对样本进行遗传多样性分析。采用筛选出的24条ISSR引物和24对SRAP引物以22株鸡腿菇的基因组DNA为模板进行PCR扩增,共获得清晰的条带368条,其中多态性条带331条占比89.9%。对获取的条带进行UPGMA聚类分析表明,在遗传相似系数为0.8水平上,可将22株供试鸡腿菇菌株分为4大类,明确了菌株之间的亲缘关系;聚类分析与主坐标分析基本一致;22株供试鸡腿菇的遗传距离在0.0300~0.8503;上述结果表明22株供试鸡腿菇菌株间具有较大的遗传差异和多样性。

黄伞栽培菌棒的真菌类杂菌多样性研究

真菌类杂菌是影响食用菌安全生产的重要因素之一。以25株黄伞(Pholiota adiposa)为供试材料,研究其抗杂性、栽培菌棒上真菌类杂菌的种类及多样性。结果显示,不同黄伞菌株的抗杂性存在差异,菌株JZB216061和菌株JZB216016的抗杂性较强,具有开发潜力;从25株黄伞的污染栽培菌棒上共分离得到65株真菌类杂菌,其中青霉(Penicillum spp.)、曲霉(Aspergillus spp.)和木霉(Trichoderma spp.)是污染黄伞栽培菌棒中的主要真菌类杂菌,且青霉污染最为普遍;不同真菌类杂菌对黄伞栽培菌棒的污染能力存在较大差异,桔青霉(Penicillum citrinum),在黄伞栽培菌棒中的污染最为普遍,可污染10个不同黄伞菌株的栽培菌棒,在栽培过程中应重点防护。研究结果将为黄伞栽培菌棒上真菌类杂菌的防治、黄伞的安全生产及种质资源的评价提供数据支撑。

我国小奥德蘑属食用菌研究现状与展望

小奥德蘑属(Oudemansiella)真菌是一类极具开发潜力的真菌。通过阅览文献评介卵孢小奥德蘑、丝球小奥德蘑、拟粘小奥德蘑、厚褶小奥德蘑、褐褶边小奥德蘑和毛柄长奥德蘑的人工驯化栽培现状,以及在育种、多糖和功能活性等方面的研究进展。

丝球小奥德蘑白色菌株特异性标记开发

丝球小奥德蘑(Oudemansiella apalosarca)菌株JZB2115081是一株颜色洁白但菇柄短、易开伞、产量低的菌株;而丝球小奥德蘑菌株JZB2115055是一株产量高,菇型好但子实体整齐度不高的菌株。目前生产上除出菇试验外,缺乏快速区分鉴定2种菌株的方法,在一定程度上阻碍了杂交育种工作进程,因此试验采用27个ISSR引物同时对2个菌株的DNA模板进行PCR扩增,回收菌株JZB2115081的特异性扩增条带,通过克隆、测序获得7条特异性条带的DNA序列,并设计特异性引物对。最终筛选得出2对特异性扩增丝球小奥德蘑菌株JZB2115081的扩增标记(引物对8071F/R、8122F/R),从而可快速区分菌株JZB2115081与菌株JZB2115055,为后期选育具有JZB2115081菌株特性且兼有菌株JZB2115055优良性状的杂交新菌株奠定基础。

北京欧文氏菌黏附及侵袭毒力因子分析

[目的]对侧耳细菌性软腐病病原菌北京欧文氏菌(Erwinia beijingensis)侵入刺芹侧耳的方式及相关黏附因子、侵袭因子进行分析,为刺芹侧耳细菌性软腐病防治提供依据。[方法]观察病原菌侵染刺芹侧耳的超微结构,利用在线软件对毒力因子进行分析比对。[结果]透射电镜观察表明北京欧文氏菌侵染宿主具有黏附和侵入两种状态。通过同源比对发现该病原菌基因组上存在17个编码黏附素的基因和1个编码侵袭素的基因,对黏附素蛋白结构域分析表明大多数为菌毛蛋白,菌毛和病原菌运动密切相关,在病原菌侵入宿主过程中发挥重要作用。[结论]阐明了北京欧文氏菌通过黏附、侵入两种方式侵染刺芹侧耳,明确了黏附素、侵袭素在侵染宿主中的作用,揭示了其致病过程,为该病害防治提供了理论基础。

不同香菇栽培种质耐热性评价

高温胁迫可对香菇正常生长发育造成严重影响,是造成香菇减产的重要原因之一。以20个我国常见的香菇栽培种质为研究对象,测定了其高温胁迫后的生理生化响应,利用主成分分析和聚类分析对各种质耐热性强弱进行排序,并根据田间试验产量指标综合鉴定评价了20个香菇栽培种质的耐热特性。结果表明:高温胁迫后,不同种质对某一具体生理指标的反应有所差异,生理指标综合得分和产量呈显著性负相关,综合评价后将供试香菇种质分类为耐热性较弱种质(2个)、耐热性适中种质(2个)和耐热性较强种质(16个),为今后进一步研究和利用香菇耐热种质提供参考依据。