转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征

【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之外,GUS蛋白质几乎在所有的水稻组织部位中呈组成型表达,只是不同组织中的表达量略有差异,如在孕穗期和开花期的茎及颖壳中的表达量较低。【结论】建立了具有应用价值的对转基因水稻中GUS蛋白质丰度检测的免疫印记方法。该方法特异性高、样品用量少、不依赖于GUS蛋白质的酶活性、测定结果易于在不同实验室间比较。证明了35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中基本呈组成型表达。

NPTⅡ蛋白质在转基因水稻中的表达特征研究

nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等.结果表明,该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质,NPTⅡ的表达符合显性遗传规律,根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定,对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息.定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰.在Ca MV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高,而在分蘖期、孕穗期较低,NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达,只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低.此外,NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中.综上所述,本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征.

转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究

为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术检测转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的方法,该方法可以从单粒稻米的0.63%材料中检测到CP4-EPSPS信号。对水稻不同发育时期代表性组织的检测结果表明,CP4-EPSPS蛋白质呈组成型表达,在花药、穗轴、颖壳及不同时期的叶片中的表达量较高,但在分蘖期基部茎节、叶鞘及成熟期种子胚中的表达量稍低。本研究建立的免疫学方法在转基因水稻检测中具有潜在的应用价值。

肾功能血清学检验对糖尿病肾病早期诊断的效果及临床价值研究

对早期糖尿病肾病患者进行诊断时,采用肾功能血清学检验,分析该措施的临床意义。方法 对照组为同一时间的健康体检者,研究组为2021年12月至2022年10月内我院收治的患者,且所有患者均患有糖尿病肾病,两组分别为40例、40例,对两组人员均采用肾功能血清学检验,分析两组诊断结果的差异性。结果 研究组患者的相关指标水平(BUN、Scr、mALB)与对照组受检者相比更高(p<0.05);且不同严重程度的糖尿病肾病患者的各项检查指标差异明显,(p<0.05)。结论 对糖尿肾病患者进行早期诊断时应用肾功能血清学检验,具有较高的临床意义。

糖尿病肾病早期诊断应用生化检验的临床价值

分析在早期糖尿病肾病诊断中,使用生化检验的有效性。方法 本次研究主要是选择早期糖尿病肾病患者以及健康人员参与实验,每组30名,实验时间为2021年1月-2022年5月,分别为试验组、健康组,检验方法均为生化检验,将两组实验人员的C反应蛋白、血清胱抑素C、糖化血红蛋白、游离脂肪酸、血同型半胱氨酸、血尿酸、尿蛋白进行对比检验。结果 结果显示,生化指标各项指标对比结果显示,健康人群和糖尿病肾病对比有明显的差异性(P<0.05)。结论 生化指标在糖尿病肾病早期的诊断工作中,能够给出明确的诊断,为治疗提供帮助。

尿蛋白和尿微量白蛋白在糖尿病肾病检验中的准确性分析

目的是应用在糖尿病肾病的临床检查尿蛋白和尿微量白蛋白的价值。以在2020年7月至2022年7月期间在我院接受治疗的30名糖尿病肾病患者为对象进行研究,并命名了实验组。同时,以同一时期在我院完成体检的30人为对象,命名对照组。组间比较数据显示,尿蛋白及尿微量白蛋白指标与对照组相比有明显差异,P < 0.05。结论糖尿病肾病的诊断,参考尿蛋白和尿微量白蛋白,可以提高诊断的精度。

转基因水稻中HPT蛋白质的检测及表达特征研究

hpt是转基因植物中最常用的筛选标记基因之一,建立了HPT蛋白质免疫印迹检测技术、了解其在转基因植物中的表达特征具有重要的理论意义和应用价值。在大肠杆菌中进行了HPT蛋白质的重组表达,利用纯化的HPT蛋白质制备了其特异性的单克隆抗体,采用免疫印迹学方法对转基因水稻4021中HPT蛋白质的表达情况进行了检测,该方法可检测出单粒稻米的10%(约1.5mg)所含的HPT蛋白质。定量分析发现水稻苗期HPT蛋白质含量约占鲜重的0.01‰。对Ca MV35S启动子驱动下的转基因水稻中HPT蛋白质的表达谱进行分析,发现其在苗期和成株期的叶片中表达量较高,在灌浆期的种子中呈现不断增加的趋势,而在茎、分蘖节、茎节、叶鞘、叶枕和根等组织中表达量较低。建立了完整的利用免疫印迹方法检测HPT蛋白质的技术,同时系统分析了HPT蛋白质在转基因水稻中的表达谱。

基于抗体的水稻蛋白质组学理论与实践

水稻是最重要的粮食作物之一,不仅是世界上一半以上的人口以水稻作为主粮,也是基础研究的模式植物。项目团队在前人研究的基础上,结合蛋白质研究的需求和发展趋势,凝练提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念,十多年来,不断优化技术路线,积极拓展和丰富相关理论并开展实践。1主要创新点1.1首次提出了“基于抗体的水稻蛋白质组学”概念。

2129例流感样住院患者呼吸道13项病原体检测结果分析

目的探讨流感样住院患者13项呼吸道病毒和非经典微生物的流行特征及致病情况,以指导临床精准防治。方法收集2019年12月至2020年12月该院2129例流感样住院患者的鼻咽拭子样本,提取病毒核酸,采用GeXP遗传分析平台联合多重反转录-PCR(mRT-PCR)技术同时检测13种呼吸道病毒和非经典微生物。采用SPSS21.0软件对数据进行统计分析。结果2129例流感样住院患者进行13项呼吸道病毒和非经典微生物检测的阳性检出率为47.35%(1008/2129)。其中甲型流感病毒(InfA)阳性率最高[16.39%(349/2129)];其次为季节性流感病毒H3N2(H3)阳性率8.13%(173/2129)和人鼻病毒(HRV)阳性率7.42%(158/2129)。两种及两种以上病原体混合感染患者264例,阳性检出率为12.40%(264/2129)。960例女性患者阳性检出率为53.85%(517/960),1169例男性患者阳性检出率为42.00%(491/1169)。其中女性InfA、H3阳性检出率及病原体总阳性检出率均明显高于男性(P<0.01)。各个年龄组均有病毒检出阳性患者,但3岁以下儿童、60岁及以上老人是病毒的易感人群,且多种病毒易感。检测结果显示,呼吸道病原体阳性检出率存在季节分布差异。结论住院患者急性呼吸道感染的主要病原体是InfA、H3和HRV,且感染存在性别、年龄和季节差异。