基于RPA恒温扩增技术对大豆尖孢镰刀菌的快速检测

尖孢镰刀菌侵染大豆引起枯萎病,导致大豆严重减产。为实现对大豆上尖孢镰刀菌的快速检测,基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术开展了试验研究,根据大豆尖孢镰刀菌的特异基因设计了正反引物各3个,并通过两两组合筛选出最佳引物对,实现了在恒温(39℃)条件下,反应15~20 min,即可检测90 fg/μL以上浓度的尖孢镰刀菌,且与大豆疫霉菌、大豆灰斑菌等均无交叉反应。本研究建立的大豆尖孢镰刀菌检测法,相较于传统PCR法和实时定量PCR法具有快速、便捷、即时观察的特点,为该病原的快速检测提供了新的技术手段。

酶促恒温扩增技术快速鉴定食品中牡蛎成分

目的:针对牡蛎建立基于酶促恒温扩增(Enzymatic recombinase amplification,ERA)技术的快速检测方法。方法:基于NCBI上牡蛎线粒体的基因保守序列,通过Primer Premier 5.0软件设计5对ERA特异检测引物,并筛选出最佳引物。优化ERA反应的模板浓度、引物浓度、扩增温度和时间,最终获得最佳的反应体系,并进行灵敏度和特异性的验证,同时分别选取市场上几种牡蛎及其相关产品进行样本验证。结果:最终得出最佳ERA反应温度为39℃,最佳反应时间为20 min,优化后反应体系检测出牡蛎相关食品中的牡蛎成分灵敏度可达800 fg/μL,且特异性良好。结论:建立的检测方法具有操作简单、快速、不依赖于高端设备的优势,较高的特异性和灵敏度,为食品中牡蛎成分的快速、恒温、现场鉴定提供了一种新手段。