利用电子差异展示方法克隆人类睾丸高表达新基因SPATA11

利用NCBI中的电子差异展示(digitaldifferentialdisplay,DDD)软件,比较来自睾丸(包括睾丸癌)与来自其它组织的EST文库,从筛查人类睾丸中高表达而在其他组织中不表达或低表达的差异ESTs入手,成功克隆了一个在人类睾丸中高表达的新基因SPATA11.RT-PCR实验证实其在成人睾丸高表达.序列分析表明该基因含4个外显子,基因组跨越2.6kb,定位于19p13.3.cDNA编码一个含221个氨基酸,相对分子质量为24.5kD的新蛋白.Northern杂交结果显示该基因含有1.1kb大小的唯一转录本,主要在睾丸中强表达,肝脏、肺、卵巢和肾脏中有微弱表达,而其他组织中该基因无表达.

亨廷顿病的基因诊断

为了简单高效检测HD基因开放阅读框5'端(CAG)n三核苷酸重复序列,建立快速准确的亨廷顿病(Hun-tington disease,HD)基因诊断方法,应用TaKaRa LATaqDNA聚合酶配合GC buffer扩增HD基因包含(CAG)n重复序列的目的片段,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测后回收(CAG)n拷贝数异常增多的目的片段,再次PCR扩增后将产物连接至T载体,进行DNA测序确定CAG的拷贝数。应用该方法对一个HD家系的3名成员以及20名正常人进行基因诊断,结果显示该HD家系3名成员的一条染色体上的(CAG)n拷贝数在正常范围内,而另一条染色体上的(CAG)n拷贝数异常增多,分别为39、40、41,而20例正常人(CAG)n拷贝数均在正常范围内,正常和HD等位基因之间的(CAG)n拷贝数不相重叠。因此,应用该方法可以对HD进行准确的基因诊断,结果同时也证明HD基因的动态突变是导致中国人亨廷顿病的遗传基础。

环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达

目的探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制。方法将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组。大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达。RT-PCR法检测对侧卵巢GnRHR mRNA的表达。结果环磷酰胺可引起卵巢皮质区原始卵泡发生大量丢失,卵巢间质严重损害,血管发生特征性病理改变;局部发生纤维化。GnRHR mRNA和蛋白质可表达于大鼠卵巢。与对照组相比,环磷酰胺组颗粒细胞GnRHR蛋白表达减少;化疗组GnRHR mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。结论GnRHR在化疗卵巢较低水平的表达,提示化疗晚期卵巢局部微环境的紊乱。

1-磷酸-神经鞘氨醇预防化疗大鼠卵巢功能损害的实验研究

【目的】探讨1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)导致的大鼠卵巢功能损害的保护作用及可能机制。【方法】40只雌性SD大鼠随机分为4组,即实验对照组(生理盐水组)、CTX组、S1P+NS组及S1P+CTX组,每组10只,于结束用药的第1～2周内的动情间期处死,观察卵泡数量的变化,并采用半定量RT-PCR检测卵巢组织Bcl-2及Bax的mRNA变化。【结果】S1P+CTX组的原始卵泡、初级卵泡和生长卵泡数与S1P+NS组、对照组的差别不显著(P>0.05),而CTX组的所有卵泡数均少于其余3组,其差异均有显著性意义(P<0.01)。卵巢组织中,S1P两组Bcl-2 mRNA的表达明显高于对照组及CTX组(P<0.01),Bax mRNA表达明显低于对照组及CTX组(P<0.01);而CTX组的Bcl-2 mRNA表达明显低于对照组及S1P两组(P<0.01),BaxmRNA表达明显高于对照组及及S1P两组(P<0.01)。【结论】S1P能预防CTX导致的大鼠卵巢功能损害,其抗凋亡作用可能是通过调节Bcl-2家族成员表达而实现。

卵泡刺激素受体在成年化疗大鼠卵巢中的表达

目的:探讨化疗药物所致的卵巢病理损伤以及FSHR在化疗卵巢中的表达.方法:将成年大鼠随机分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠单次腹腔注射环磷酰胺,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目.荧光定量PCR方法检测大鼠卵巢FSHR mRNA的表达.结果:环磷酰胺可引起原始卵泡大量丢失,卵巢间质严重损害,且卵巢局部发生纤维化.化疗组卵巢窦卵泡比例显著低于对照组(P<0.05);化疗组大鼠动情周期日数[(6.83±1.12)d]显著高于对照组[(4.50±0.82)d,P<0.05].荧光定量PCR显示,环磷酰胺组FSHR mRNA水平显著低于对照组(P<0.05).结论:化疗大鼠卵巢FSHR表达减少,可能是导致化疗卵巢局部窦卵泡比例减少和动情周期延长的原因之一.

小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因SRG2的分子克隆及其在隐睾中的表达特征

从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段 (BE6 4 4 5 4 2 )入手 ,利用网上生物信息学克隆了SRG2基因全长 ,GenBank登录号为AF395 0 83。从小鼠睾丸cDNA文库中分离出该基因完整阅读框cDNA ,SRG2基因的cDNA全长为 10 88bp ,为编码 2 95个氨基酸、分子量为 335 79kD、等电点为 9 6 4的蛋白质 ,与人类同源基因TSARG2相似性为 78% ,而与其他已知蛋白质无明显同源性。RT PCR结果表明 :该基因只在睾丸中有高表达。应用新型的分子信标检测该基因在不同时期隐睾中的mRNA表达水平 ,发现该基因呈明显上调 。

GnRH类似物对化疗大鼠卵泡凋亡的影响

目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)、拮抗剂(GnRH-ant)对环磷酰胺(CTX)诱导的大鼠卵泡凋亡的干预作用。方法36只雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组,即实验对照组、CTX组、GnRH-a+生理盐水(NS)组、GnRH-a+CTX组、GnRH-ant+NS组及GnRH-ant+CTX组,每组6只,于结束用药的第1～2周内的动情间期处死,采用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)结合透射电镜检测卵泡的凋亡情况。结果(1)TUNEL检测晚期生长卵泡的颗粒细胞凋亡率高于早期卵泡,使用CTX组别的卵母细胞、颗粒细胞的凋亡率高于相应对照组,其差异均有显著性意义(P<0.05)。其中GnRH-a两组[(33.40±4.59)～(73.25±5.35)]的颗粒细胞凋亡率较GnRH-ant两组[(27.46±4.52)～(49.38±5.02)]明显升高,其差异有显著性意义(P<0.05);但早期卵泡卵母细胞的凋亡率在GnRH-a两组[(23.48±4.25)～(36.15±4.23)]与GnRH-ant两组[(21.47±3.81)～(34.04±5.54)]的相应组间差异无显著性意义(P>0.05)。(2)电镜下在早期卵泡的卵母细胞、颗粒细胞、晚期生长卵泡的颗粒细胞可见凋亡的特征性改变。其中颗粒细胞核表现典型,可见典型的半月形凋亡小体形成,而卵母细胞核仅见染色质浓缩、边集、凝聚。结论GnRH-a、GnRH-ant对化疗大鼠的卵泡凋亡产生不同的调控作用,前者促进卵泡凋亡,而后者抑制卵泡凋亡。GnRH类似物主要调控卵泡颗粒细胞的凋亡,而对卵母细胞的凋亡调控作用不明显。

环磷酰胺作用下成年大鼠卵巢干细胞因子和mRNA的表达

目的探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制。方法将成年SD大鼠分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组。大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后处死,固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目。免疫组化方法检测干细胞因子(SCF)蛋白在卵巢的表达,RT-PCR半定量法检测对侧卵巢SCF mRNA的表达。结果环磷酰胺可引起卵巢间质的严重损害和局部纤维化的发生。SCF可表达于大鼠卵巢原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞,次级卵泡和早期窦卵泡的颗粒细胞也可见SCF的表达。环磷酰胺组注射后8周卵泡颗粒细胞SCF蛋白显著升高,卵母细胞SCF蛋白显著减少(P<0.05);卵巢SCF mRNA显著升高(P<0.05)。结论SCF在化疗卵巢表达的变化有助于进一步阐释化疗药物损伤卵巢的机制。

多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及与代谢综合征的相关性

目的分析中国南方多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者中胰岛素抵抗的发生情况及其与代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)发生的相关性。方法回顾性分析中山大学孙逸仙纪念医院2004年1月至2008年10月初诊的578例PCOS患者各表征胰岛素抵抗指标的发生率,及其与代谢综合征发生的关系。结果 PCOS患者中,332例(57.4%)稳态模型测定(HOMA-IR)>75th,133例(23.0%)空腹胰岛素(FIN)>95th,73例(12.6%)胰岛素释放实验2h胰岛素(2h-INS)>150mU/L,49例(8.5%)FIN和2h-INS同时超标,157例(27.2%)发生高胰岛素血症(HIN),FIN和/或2h-INS超标。FIN升高、2h-INS升高、HIN和HOMA-IR超标者,代谢综合征发生率分别为40.6%、41.1%、39.5%和26.8%。与指标正常者比较,其发生代谢综合征的风险明显增加(P<0.001)。结论应用不同表征胰岛素抵抗的指标得到的PCOS患者胰岛素抵抗的发生率存在差异,但是存在任一胰岛素抵抗指标异常的患者合并代谢综合征的风险显著高于无高胰岛素血症及HOMA-IR正常者。因此,判断和纠正PCOS患者的胰岛素抵抗对于预防代谢综合征的发生有临床意义。

抗苗勒氏管激素对人黄素化颗粒细胞激素分泌的影响

目的:探讨抗苗勒氏管激素(AMH)对人颗粒细胞激素产生分时段的影响。方法:采用人黄素化颗粒细胞原代培养,分组加入不同浓度的AMH,分时段测定细胞培养液中的雌二醇(E2)和孕酮(P)浓度。结果:细胞培养液中E2、P浓度均随培养时间延长而升高,升高幅度渐下降。随着AMH浓度的增加,颗粒细胞的E2和P分泌明显降低,AMH5μg/L组到20μg/L组间有剂量依赖性,AMH 50μg/L组与20μg/L组比较无显著差别。结论:AMH可以降低体外培养人黄素化颗粒细胞的雌、孕激素分泌,并有一定的剂量依赖性,提示AMH可以影响颗粒细胞的激素合成过程。

原癌基因c-kit mRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义

【目的】探讨原癌基因c-kitmRNA在自身免疫性睾丸炎中的表达及意义。【方法】建立并分析自身免疫性睾丸炎动物模型:42只BALB/c小鼠随机分为6个实验组和1个对照组。6个实验组小鼠分别给予KM小鼠睾丸混悬液皮下注射,每周1次最多者4次,在第1次给予抗原注射后1,2,3,4,6,8周各取一组小鼠的睾丸组织,用RT-PCR检测其c-kitmRNA的变化。【结果】在第1次给予抗原注射后第1周开始c-kitmRNA转录水平开始降低,第2周起明显低于对照组(P<0.05),至第3,4周降至最低,第6周逐渐开始恢复,至第8周其水平与对照组相比差异已经没有统计学意义(P>0.05)。【结论】c-kit基因与生精功能密切相关,c-kit基因mRNA的低表达可能参与自身免疫性睾丸炎导致不育的发病机制。

一个新的人类睾丸特异基因的cDNA克隆和表达分析

运用“数据库消减杂交”(DigitalDifferentialDisplay)方法筛选人类睾丸特异表达新基因 ,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群 ,挑选其中一个克隆重叠群HS .12 9794进行多组织RT PCR ,初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发 ,采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列 ,其全长 2 4 30bp ,开放阅读框为 6 76～ 12 4 8bp ,定位于 3p2 1 1,编码由 190个氨基酸组成 ,分子量为 2 0 4 17 8Da ,等电点为 5 2 3的一个偏酸性蛋白质 ,该蛋白与已知蛋白质无明显同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确 ,半定量RT PCR进一步显示该基因在人不同发育时期的睾丸及精子细胞中有表达 ,推测其可能与精子生成相关 ,暂命名为SRG5 (TestisSpermatogenesisRelatedGene 5 ,SRG5 ) (GenBank登录号 :AY2 2 1117)。SRG5基因的成功克隆表明 ,“数据库消减杂交”与实验验证相结合的技术路线是一种快捷高效的发现更多人类功能新基因的新策略。

46,XY女性性反转患者SRY基因的一个新突变类型

目的 研究 46,XY女性性反转患者发病的分子机理。方法 应用聚合酶链反应 (polymerasechain reaction,PCR)扩增 1例性反转患者和其父亲的 SRY基因片段 ;PCR产物连接到 p UCm-T载体上 ,在 ABI 3 77-3自动测序仪上完成测序以查明突变 ;应用 PCR-限制性酶切对 DNA测序的结果进行检测。结果 发现该患者的 SRY基因存在点突变 (T3 87A) ,导致 SRY蛋白发生氨基酸翻译终止 (酪氨酸 12 9终止密码 ) ,患者父亲的序列正常。由于患者 SRY序列中增加一个 Mae 酶切位点 ,PCR-限制性内切酶酶切电泳检测 ,结果显示患者出现 3条带 (13 1bp、2 3 1bp和 2 47bp) ,而正常人出现 2条带 (13 1bp和 478bp) ,进一步验证了序列分析的结果。经查证数据库 ,该突变是一个未见报道的新型 SRY基因突变。结论 这一新型突变的发现 ,有助于进一步阐明 46。

促性腺激素释放激素类似物对化疗大鼠卵巢功能损害的干预作用

目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)和拮抗剂(GnRH-ant)对环磷酰胺(CTX)诱导的大鼠卵巢功能损害的干预作用。方法将72只雌性 SD 大鼠随机分为6组,即对照组[腹腔注射生理盐水(NS)0.1 ml/d×11 d]、CTX 组(第1天腹腔注射 CTX 50 mg/kg,第2天起腹腔注射 CTX 5 mg/d×10 d)、GnRH-a+NS 组[GnRH-a 0.375 mg 1次深部肌内注射(估计释放量为12.5μg/d,持续28～30 d),于用药第14天左右(连续5 d 观察阴道涂片均处于动情间期)开始注射NS,用药方法同对照组]、GnRH-a+CTX 组(同 GnRH-a+NS 组注射 GnRH-a 后,于用药第14天左右的动情间期开始注射 CTX,用药方法同 CTX 组)、GnRH-ant+NS 组[GnRH-ant 0.3 mg 皮下注射,以后每隔2天注射1次,共4次(估计释放量为100μg/d,共12 d),于第1次 GnRH-ant 皮下注射后第2天开始注射 NS,用药方法同对照组]及 GnRH-ant+CTX 组(同 GnRH-ant+NS 组注射 GnRH-ant 后,于第1次 GnRH-ant 皮下注射后第2天开始注射 CTX,用药方法同 CTX 组];每组12只。用药前后采用酶联免疫吸附法动态检测各组大鼠卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇水平的变化,并于结束用药后的第1周内和第4～5周内(动情间期),各组分别处死6只大鼠,观察卵泡数量、卵巢重量的变化。结果 (1)血清内分泌激素水平:用药前后,对照组的血清 LH、FSH、雌二醇水平无明显变化,CTX 组的血清内分泌激素水平呈上升趋势。用药中,血清 LH、FSH 水平 GnRH-a+CTX 组为(42±8)、(124±45)μg/L,GnRH-a+NS 组为(47±7)、(136±32)μg/L;GnRH-ant+CTX 组为(31±5)、(178±54)μg/L,GnRH-ant+NS 组为(36±7)、(198±27)μg/L;对照组为(118±16)、(350±35)μg/L;CTX 组为(113±15)、(289±42)μg/L;分别比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。血清雌二醇水平 GnRH-ant+CTX 组为(3.98±0.74)ng/L,GnRH-ant+NS 组为(3.58±0.43)ng/L,GnRH-a+CTX 组为(1.46±0.22)ng/L,GnRH-a+NS 组为(0.98±0.18)ng/L 分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。停药后,GnRH-a+CTX 组、GnRH-a+NS 组及 GnRH-ant+NS 组的血清 LH、FSH、雌二醇水平逐渐接近对照组水平。但停药第4～5周时,GnRH-ant+CTX 组 LH、FSH 水平[(156±12)、(520±44)μg/L]与 CTX 组[(178±18)、(546±36)μg/L]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)卵巢重量:停药第1周,GnRH-a+CTX 组大鼠双侧卵巢重量为(18±8)mg/100 g,GnRH-a+NS 组为(12±5)mg/100 g,均明显低于其他各组[(30±9)～(37±8)mg/100 g],差异均有统计学意义(P<0.05);停药第4～5周,GnRH-ant+CTX 组大鼠双侧卵巢重量为(22±6)mg/100 g,CTX 组为(20±4)mg/100 g,均明显低于其他各组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)卵泡数量:停药第1周,GnRH-a+CTX 组大鼠卵巢原始卵泡数为(689±39)个,GnRH-a+NS 组为(824±45)个,明显高于 GnRH-ant+CTX 组[(255±24)个]和 CTX 组[(343±29)个];生长卵泡数 GnRH-a+CTX组为(21±3)个,GnRH-a+NS 组为(15±1)个,明显低于 GnRH-ant+CTX 组[(110±21)个]和 CTX组[(87±17)个];分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。停药第4～5周,GnRH-a+CTX 组和GnRH-a+NS 组的生长卵泡数[(56±16)、(58±11)个]接近对照组水平[(57±9)个];GnRH-ant+CTX 组及 CTX 组的原始卵泡数和生长卵泡数均少于其他4组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GnRH-a 对 CTX 诱导的大鼠卵巢功能损害具有保护作用,GnRH-ant 对 CTX 诱导的大鼠卵巢功能损害没有明显的保护作用。

化疗对绝经前乳腺癌患者卵巢储备功能的影响

目的:了解乳腺癌化疗对患者卵巢功能的损伤程度及相关因素并初步评估AMH在卵巢储备功能测定方面的作用。方法:纳入女性绝经前乳腺癌患者120例作为病例组,其中自愿留取血清者30例,年龄匹配的30例健康人为对照组。调查化疗后的更年期症状、月经改变等,同时检测其血清AMH、FSH。结果:患者闭经率随着化疗年龄增长而升高;化疗后不同时期闭经率无明显变化;闭经组化疗开始年龄比有月经者高。常用化疗方案CEF/EC、CMF、ET导致的闭经率无明显差异。病例组的血清FSH水平明显升高、AMH明显降低,FSH<20 IU/L的病例血清AMH明显降低,病例组中血清FSH及AMH负相关。结论:乳腺癌常用的化疗方案均可不同程度的损害患者的卵巢功能。化疗损伤卵巢功能的程度与化疗年龄有关。化疗后月经正常者,其卵巢储备功能可能已经下降。血清AMH水平与FSH呈负相关,其水平下降提示卵巢储备功能降低,可以作为化疗患者卵巢储备功能的监测指标。

青少年多囊卵巢综合征患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性

目的探讨青少年多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清转移抑制素水平与其发病的相关性。方法收集2006年1-6月于中山大学附属第二医院妇科内分泌门诊就诊的PCOS患者42例，按年龄分为青少年组（17～19岁）19例、成年组（20～38岁）23例；同期选择16～19岁、月经正常的青春期女性20例为对照组。于月经周期第1～5天或孕激素治疗撤退性出血第1～5天（闭经者日期不限）测定3组妇女血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮、游离睾酮（FT）、硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）、性激素结合球蛋白（SHBG）和转移抑制素水平，并计算游离雄激素指数（FAI）。次日对3组妇女行75g口服葡萄糖耐量试验和胰岛素释放试验，分别测定空腹、服糖后1h、服糖后2h的血糖及胰岛素水平，并分别计算曲线下面积（AUC）、空腹血糖与空腹胰岛素比值（GIR）和稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果（1）内分泌激素水平比较：各组妇女的LH水平，青少年组[（12±8）U／L]和成年组[（12±7）U／L]均高于对照组[（6±4）U／L]，差异均有统计学意义（P〈0．05）；成年组的丌水平[（2．3±1．2）pmol／L]高于青少年组[（1．3±0．8）pmol／L]和对照组[（1．1±0．5）pmol／L]，青少年组的盯水平也高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；青少年组的DHEAS水平[（3．1±2．7）μmo]／L]低于对照组[（6．3±2．7）μmol／L]，差异有统计学意义（P〈0．05）；成年组的FAI（5．6±4．1）高于对照组（3．0±1．3），差异也有统计学意义（P〈0．05）。FSH、睾酮和SHBG水平在3组间两两比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）代谢水平及转移抑制素水平比较：青少年组的空腹、服糖后2h胰岛素水平及胰岛素AUC分别为（13±7）mU／L、（88±59）mU／L和（133±80）mU·L^-1·min^-1，均高于对照组[分别为（7±3）mU／L、（57±29）mU／L和（82±34）mU·L^-1·min^-1]，且空腹胰岛素水平高于成年组[（9±5）mU／L]，差异均有统计学意义（P〈0．05）。成年组空腹、服糖后2h血糖水平分别为（5．01±0．44）mmol／L和（6．48±1．16）mmol／L，均分别高于对照组[分别为（4．68±0．29）mmol／L和（5．44±0．83）mmol／L]和青少年组[分别为（4．67±0．30）mmol／L和（5．93±1．44）mmol／L]，成年组血糖AUC[（9．99±1．85）mmol·L^-1·min^-1]高于对照组[（8．42±1．53）mmol·L^-1·min^-1]，差异均有统计学意义（P〈0．05）。青少年组HOMA—IR为2．6±2．0，高于对照组（1．4±0．7）；GIR为10±8，低于对照组（16±10），差异均有统计学意义（P〈0．05）。青少年组和成年组的转移抑制素水平分别为（0．25±0．19）、（0．29±0．29）pmol／L，均高于对照组[（0．18±0．23）pmol／L]，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）转移抑制素水平与各项指标的相关性：血清转移抑制素水平与LH、睾酮及服糖后2h血糖水平呈正相关关系（r分别为0．256、0．286、0．267，P分别为0．044、0．025、0．043）。结论青少年PCOS患者血清转移抑制素水平显著高于正常青春期女性，转移抑制素高表达所致的青春期发育亢进与青少年PCOS患者的发病可能存在一定关系。

化疗对恶性肿瘤患者卵巢功能的影响

目的研究化疗对恶性肿瘤患者卵巢功能的影响。方法收集34例女性恶性肿瘤存活者（病例组）与34例月经正常的女性健康者（对照组）临床资料，调查病例组恶性肿瘤类型与治疗后月经情况，比较两组血清卯泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、抗苗勒氏管激素（AMH）水平。结果34例病例组中23例（67．6％）闭经，7例（20．6％）月经不规则，4例（11．8％）月经规则。病例组血清FSH、LH水平分别为（50．88±27．12）U／L、（36．87±27．86）U／L，对照组血清FSH、LH分别为（5．94±1．46）U／L、（4．13±1．78）U／L，两组血清FSH、LH水平差异有统计学意义（P均=0．000）。病例组血清AMH显著低于对照组[（0．412±0．183）μg／L比（1．770±0．941）μg/L，P=0．000]。病例组中月经规则的患者血清AMH水平显著低于对照组[（0．811±0．155）μg／L比（1．770±0．941）μg/L，P=0．000）。病例组中血清FSH〈10U／L的患者，其AMH水平亦显著低于对照组[（0．581±0．225）μg/L比（1．770±0．941）μg／L，P=0．000]。结论化疗对恶性肿瘤患者的卵巢功能有损害。血清AMH水平对恶性肿瘤患者卵巢储备功能下降的评估可能比FSH更敏感。

抗苗勒管激素对卵巢黄素化颗粒细胞中芳香酶表达的影响

目的探讨抗苗勒管激素（AMH）对卵巢黄素化颗粒细胞激素分泌和芳香酶P450mRNA表达的影响。方法采集2006年6—12月在中山大学附属第二医院进行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的10例不孕患者的卵巢黄素化颗粒细胞进行原代培养，按照加入AMH浓度的不同，将颗粒细胞分为A、B、C、D、E组及睾酮对照组、空白对照组，A～E组分别加入1、5、10、20、50μg／L的AMH及1×10^4mol／L睾酮，睾酮对照组加入1×10^-7mol／L睾酮，空白对照组仅加入培养基。于培养24、48、72h时分别检测各组细胞中的雌二醇水平；培养72h后各组均进行细胞计数，并采用RT—PCR技术检测B、C、D、E组及睾酮对照组细胞中芳香酶P450mRNA的表达水平。结果（1）培养24、48、72h后颗粒细胞中的雌二醇水平，A组分别为（8．529±0．381）×10^4、（10．977±0．436）×10^4、（13．309±0．506）×10^4pmol／L，B组分别为（7．027±0．276）×10^4、（9．167±0．300）×10^4、（10．794±0．555）×10^4pmo]／L，C组分别为（6．039±0．226）×10^4、（7．585±0．548）×10^4、（8．797±0．518）×10^4pmol／L，D组分别为（5．118±0．460）×10^4、（5．716±0．496）×10^4、（6．205±0．667）×10^4pmo]／L，E组分别为（4．932±0．148）×10^4、（5．323±0．184）×10^4、（5．629±0．212）×10^4pmol／L，各组分别与空白对照组[分别为（0．001±0．001）×10^4、（0．006±0．003）×10^4、（0．029±0．011）×10^4pmol／L]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；B、C、D、E组分别与睾酮对照组[分别为（8．418±0．569）×10^4、（10．841±0．689）×10^4、（13．301±0．637）×10^4pmol／L]比较，差异也均有统计学意义（P〈0．01）；B组分别与C、D、E组比较，C组分别与D、E组比较，差异也均有统计学意义（P〈0．01）；D组与E组之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。A、B、C、D、E组及睾酮对照组培养24h后颗粒细胞中的雌二醇水平，分别与培养48、72h比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；培养48h后的雌二醇水平与培养72h比较，差异也均有统计学意义（P〈0．01）。空白对照组培养24、48、72h后的雌二醇水平比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。（2）培养72h后，B、C、D、E组颗粒细胞中芳香酶P450mRNA的表达水平分别为0．6148±0．0046、0．5156±0．0012、0．4698±0．0027、0．4282±0．0017，分别与睾酮对照组（0．8224±0．0021）比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；B组分别与C、D、E组比较，C组分别与D、E组比较，差异也有统计学意义（P〈0．01）；D组与E组之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论AMH可能通过在卵巢局部抑制芳香酶活性而影响颗粒细胞的雌激素合成过程，促使卵泡内局部高雄激素环境的形成。