CDC25C表达下调的黑色素瘤细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡情况观察

目的探讨细胞分裂周期蛋白25C(CDC25C)对黑色素瘤B16细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡的影响。方法取黑色素瘤B16细胞进行培养,将细胞随机分为转染组、转染对照组、空白对照组。转染组转染CDC25C低表达慢病毒质粒,转染对照组转染慢病毒空质粒,空白对照组正常培养。利用Rhod-2/AM与MitoSOX荧光探针检测细胞线粒体内Ca^(2+)浓度及线粒体活性氧(ROS),RT-qPCR法和Western blotting法分别检测细胞线粒体应激反应相关分子ClpP、LONP1及线粒体途径凋亡相关分子Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果与转染对照组和空白对照组相比,转染组细胞线粒体Ca^(2+)及ROS含量增加,ClpP、LONP1、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或<0.01)。结论CDC25C表达下调激活黑色素瘤B16细胞发生线粒体应激反应,并诱导线粒体途径的细胞凋亡。

衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系

目的通过检测人正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织和肝癌(HCC)组织及相应癌旁组织中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨SMP-30与肝疾病的关系。方法将本课题组构建的含SMP-30羧基端165个氨基酸的cDNA序列表达质粒,经表达和纯化获得MBP-SMP-30,免疫家兔制备出抗MBP-SMP-30多克隆抗体。采用免疫组织化学SABC法,检测30例人正常肝组织、10例病毒性肝炎组织、49例肝硬化组织和48例人HCC及相应癌旁组织中SMP-30的表达。结果SMP-30定位于肝细胞的细胞质和细胞核,其在HCC癌旁组织中的表达高于另外4种组织,具有显著性差异(P<0.05),且HCC中SMP-30的表达与肿瘤大小和病理分级无关。结论用MBP-SMP-30融合蛋白制备的多克隆抗体可成功检测出人肝细胞中的SMP-30。SMP-30与肝疾病的发生发展有关,其高表达可能是HCC的早期性、保护性事件。

反复自然流产患者绒毛膜组织中促血管生成素的表达变化及意义

目的观察反复自然流产(RSA)患者绒毛膜组织中促血管生成素(Ang)的表达变化,并探讨其意义。方法收取33例RSA患者(RSA组)和37例健康早孕人工流产妇女(人工流产组)的绒毛膜组织,采用免疫组化法检测其中的Ang-1、Ang-2蛋白。结果 RSA组绒毛膜组织中Ang-1、Ang-2蛋白的表达高于人工流产组(P均<0.05);RSA组Ang-1、Ang-2蛋白的表达与胚胎孕周呈正相关(r分别为0.497、0.430,P均<0.05),而人工流产组Ang-1、Ang-2蛋白的表达与胚胎孕周无关(r分别为0.204、0.227,P均>0.05)。结论 RSA患者绒毛膜组织中Ang的表达升高,这可能是造成RSA的原因之一。

人肝癌相关抗原SMP-30在肝癌中的表达及意义

目的:通过免疫组化方法检测人肝癌(HCC)中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。方法:制备48例人HCC及相应的癌旁组织、6例正常人肝组织和1例正常人肾组织的石蜡切片。采用免疫组化SABC法,检测SMP-30在HCC和癌旁组织中的表达,结合临床资料进行统计分析。结果:初步发现HCC癌旁组织的SMP-30表达高于HCC组织(P<0.05)。SMP-30的表达与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、肝硬化背景、HBsAg和AFP检测情况未见相关性(P>0.05)。结论:SMP-30与HCC的发生、发展有关,其过度表达可能是HCC的早期性、保护性事件。

将科研实践引入组织学与胚胎学教学的初步探索

组织学与胚胎学是一门形态学科，是引导医学生进入医学领域的重要基础课程。如何通过有效的教学方式，改革传统的教学方法，充分调动学生的学习积极性，达到最佳的教学效果，是我们一直不断探讨的问题。经过多年的探索与实践，解放了思想，更新了理念，达成了2点共识：一是教会学生如何理解、掌握和运用知识比单位时间内定向传授书本知识重要；二是设计优化学生的知识结构比单纯增加知识量重要。

人肝癌肿瘤相关抗原HCC-22-5抗体的制备及其在肝硬化组织中表达的临床意义

目的制备抗HCC-22-5的多克隆抗体,探讨其与肝硬化发生、发展的关系。方法将本课题组重组构建的含HCC-22-5cDNA序列表达质粒,经表达和纯化获得HCC-22-5的融合蛋白(MBP-HCC-22-5),免疫家兔制备出抗MBP-HCC-22-5多克隆抗体。经ELISA和Western blot鉴定抗体的免疫活性后,用免疫组化SABC法检测49例人肝硬化组织和30例正常人肝组织中HCC-22-5的表达。结果经ELISA和Western blot鉴定所制备的多克隆抗体可以与MBP-HCC-22-5特异性结合。HCC-22-5主要表达于肝细胞质中。HCC-22-5在肝硬化组织中的表达与性别有关,且与年龄呈正相关。结论成功制备了抗HCC-22-5的多克隆抗体;HCC-22-5的表达与肝硬化的发生、发展有关。

抗体制备的新技术

抗体的研究已有100多年的历史,其制备技术经历了血清多克隆抗体、鼠源单克隆抗体和基因工程抗体三个时期。本文就基因工程抗体制备的新技术简要综述。

完善整合式教学模式 探索分段式考试质量评价体系

完善组织学与胚胎学"整合式"分段教学模式,探索与之相适应的"分段式"考试质量评价体系。结果显示分段考试的成绩明显优于不分段考试的成绩。"分段式"考试可以减轻期末考试的压力,有利于本课程及其他课程的学习。

海带多糖通过上调衰老标记蛋白30表现出抗肝癌作用

本研究旨在研究海带多糖在肝癌中的特定作用,及其与衰老标记蛋白30(SMP30)相关的作用机制。实验用不同浓度的海带多糖(0、5、15、25、35、45mg/ml)治疗Bel-7404和HepG2肝癌细胞,通过CCK-8法和流式细胞术检测肝癌细胞活性和凋亡率,通过qPCR和Western blot检测经海带多糖治疗的Bel-7404、HepG2肝癌细胞和LO2正常肝细胞中SMP30表达变化。

肿瘤抑制基因PTEN/MMACl与Cowden病

PTEN/MMAC1基因于1997年3月被美国两个独立科研小组同时发现.该基因定位在第10号染色体上,其编码的蛋白质与磷酸酶和细胞质张力蛋白同源,并在许多肿瘤中伴有第10号染色体的同源性丢失,故命名为第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homologydeleted on chromosome ten,Pten)PTEN基因又名MMAC1基因,是因为Steck等发现在许多进展晚期的肿瘤中有该基因的突变,因而命名为多发性进展期癌基因(mutated in multiple advance cancer 1,MMAC1).

三种MAGE基因在广西肝细胞癌中的表达

目的检测癌-睾丸抗原(CTA)基因MAGE-1、-3和-4在广西地区肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨CTA作为疫苗对HCC治疗的可行性。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对25例广西HCC患者癌组织中MAGE-1、-3和-4基因mRNA的表达进行检测；随机选择MAGE-1、-3和-4阳性的RT-PCR产物各2例进行DNA序列测定。结果 MAGE-1和-3表达率均为40％(10／25),MAGE-4表达率为16％(4／25)。DNA测序结果表明RT-PCR产物为MAGE-1、-3和-4基因。统计学分析显示MAGE-1、-3和-4基因的表达与HCC组织分化程度及临床分期无相关性(P＞0．05),与HBV感染有相关性(P＜0．05)；此外,MAGE-1和-3的表达与肿瘤大小及MAGE-3和-4与AFP水平均存在相关性(P＜0．05)。在所检测的标本中,56％的标本至少表达上述1种MAGE,24％的标本至少表达2种MAGE；16％的标本表达3种MAGE。结论MAGE-1和-3在广西HCC中有一定频率的表达,能否用于HCC的免疫治疗值得深入探讨。

肝癌相关抗原kinectin基因片断的重组表达

目的:研究肝癌相关抗原kinectin基因片断的体外重组表达方法,为该抗原的生产奠定基础。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原kinectin的基因片断,将目的基因插入表达载体pMAL-C2上麦芽糖结合蛋白(MBP)基因下游的多克隆位点,转化DH5α菌。通过蓝白斑筛选、PCR鉴定、内切酶鉴定及DNA测序筛出正确的重组子,并用其转化TB1菌。用IPTG对重组的TB1工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定。结果:kinectin基因片断正确插入pMAL-C2载体的多克隆位点,用IPTG对工程菌进行诱导,可见目的蛋白条带出现。结论:pMAL-C2载体可用于对肝癌相关抗原kinectin的体外基因重组表达。

siRNA沉默GC结合因子2表达对BEL-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的 GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,能抑制富含GC序列启动子的基因转录。GCF2在BEL-7404等肝癌细胞株的高表达可能与肝癌的发生及发展有关。文中通过靶向GCF2的GCF2-siRNA序列沉默GCF2表达,观察GCF2对人肝癌细胞株BEL-7404增殖及凋亡的影响。方法将实验细胞分为GCF2 siRNA转染组(转染GCF2-siRNA)、阴性对照组(转染无关序列)、脂质体对照组(只加Lipofectamine 2000)、常规培养对照组(不加转染试剂和siRNA序列)共4组。使用Lipofectamine 2000将GCF2-siRNA转染BEL-7404细胞,Western blot检测转染后48 h GCF2蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8和AnnexinV/PI-FITC双染流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 GCF2-siRNA可有效下调GCF2表达、抑制BEL-7404细胞的增殖,细胞凋亡率增加。与各对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GCF2可促进肝癌细胞株BEL-7404的增殖,抑制该细胞凋亡,提示GCF2通过对肝癌细胞增殖和凋亡的影响参与肝癌的发生、发展。

教育信息化背景下组织学胚胎学全英文课程“三三三制”混合教学模式初探

近年来,随着我国的对外教育交流不断深化,医学专业留学生的规模目前在来华留学生中位居第二[1-2].2001年本校设立了留学生全英文班,组织学胚胎学也成为我校最早进行全英文授课的课程之一.在教学过程中,我们发现传统的教学多是老师"满堂灌、全堂点",难以调动学生的学习热情,因此改革势在必行.2016年以来,我们尝试推行"线上线下"混合式教学,课程的79学时被分解为"三三三制"教学模式:即理论授课、实践教学和学生自学的时间各占约三分之一,该模式在我校2015、2016和2017三个年级的临床医学专业开展应用,参与留学生达350多名,取得一定成效.

应用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关抗原

目的:应用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关抗原,为鼻咽癌的早期诊断、免疫治疗和预后监测提供候选的生物学指标和理论基础。方法:从鼻咽癌新鲜活检组织中提取mRNA,构建cDNA表达文库。用鼻咽癌患者的血清筛选所构建的cDNA表达文库,获得的阳性克隆经扩增后提取噬菌粒DNA进行测序。所得序列与GenBank数据库中已知基因进行同源比较,分析其生物学特性。结果:所构建的cDNA原始文库含1×106个重组体,蓝白斑试验显示重组率为93%。用鼻咽癌血清对表达文库进行筛选,共获得21个阳性克隆,分别代表14个不同的cDNA插入片段。12个插入片段的DNA序列分别与基因库上的基因有不同程度的同源性,其中6个基因与鼻咽癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另6个基因的生理功能未见文献报道。2个插入片段未发现有同源基因,推测可能为新发现的基因。结论:SEREX技术是目前筛选肿瘤抗原最简便、有效的手段之一。本文研究发现的抗原将为鼻咽癌的研究提供进一步的理论基础。