活心丸对小鼠的急性毒性研究

目的观察活心丸对小鼠的急性毒性。方法因未能测得半数致死量(LD50),故采用最大耐受量(MTD)试验。取SPF级KM小鼠80只,雌雄各半,随机分为空白对照组和给药组,24 h内单次经口给药,给药组给予3.5 g/kg活心丸药液,对照组给予等体积生理盐水。给药后密切观察小鼠一般情况,连续观察14 d,于给药前和给药后1、3、5、8、14 d记录小鼠体质量、摄食量及饮水量。给药后1 d及14 d各组雌雄分别取10只,摘除眼球采血,检测血常规及血液生化指标,解剖观察各脏器,取心、肝、脾、肺、肾,称重并计算脏器指数,制作HE切片,进行病理学检查。结果给药后3 h内给药组小鼠出现中毒症状,表现为运动失调、精神萎靡、俯卧抽搐、呼吸急促,第2天给药组小鼠恢复正常。给药1 d后给药组雄鼠摄食量较对照组明显下降(P<0.05),给药后3 d各组摄食量无明显变化。与对照组比较,给药组体质量、饮水量、脏器指数、血常规及血液生化指标均无显著性差异(P>0.05)。组织病理学显示给药组心脏心外膜及肝脏中央静脉出现炎性细胞浸润,且肝细胞轻度空泡化。结论小鼠口服给药活心丸的最大耐受量为3.5 g/kg,为60 kg成人每日用药剂量的1 750倍,证明口服活心丸毒性较小,安全性良好。

小叶榕干浸膏小鼠单次给药毒性的安全性研究

目的通过考察经小叶榕干浸膏给药后,小鼠单次给药毒性的病理学、血液学及生化指标的变化,确定小叶榕干浸膏的半数致死量(LD_(50))或最大耐受量(MTD),以评价小叶榕干浸膏的安全性。方法LD_(50)实验将小鼠随机分为6组,分别以不同剂量进行灌胃给药,观察7 d后小鼠的一般情况和肉眼观察脏器形态学变化;MTD实验将小鼠按体重随机分为3组,分别以不同药物、不同剂量进行3次灌胃给药。观察统计14 d内小鼠的毒性反应、病理学变化、血液学及生化指标的变化。结果LD_(50)实验无小鼠死亡情况,无法确定小叶榕干浸膏的LD_(50)值;MTD实验结果按生药量计算为70.40 g·kg^(-1);经观察,各组小鼠头颈部及体表等处均正常,各个脏器未见颜色加深的病变或明显损伤,器官的组织细胞未见炎症细胞浸润、结构异常扩张或收缩改变等病理反应,且未见与药物相关的异常变化,血液学指标及生化指标与空白组相比均未见统计学差异(P>0.05),未见小叶榕干浸膏引起明显的单次给药毒性反应和死亡情况。结论小叶榕干浸膏具有良好的安全性。

小叶榕干浸膏对大鼠慢性支气管炎的防治作用及其机制研究

目的探究小叶榕对大鼠慢性支气管炎的防治作用及其机制。方法以小叶榕干浸膏给药,采用二氧化硫熏致慢性支气管炎的方法,构建大鼠慢性支气管炎模型;进行大鼠行为学考察,肺组织切片病变程度观察,肿瘤坏死因子(TNF-α)、肺组织匀浆中炎性细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平检测。结果各给药组有不同程度支气管周围炎症与间质炎及气肿情况减轻,能够降低慢性支气管炎大鼠肺组织匀浆内TNF-α水平,并升高IL-4、IL-10水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P <0.05)。结论初步证明小叶榕对慢性支气管炎的治疗有一定疗效,其对慢性支气管炎的治疗作用可能与其对炎性细胞因子的调控有关。

利用分子量印迹快速筛选活心丸中蟾蜍二烯酸内酯和二萜生物碱类化合物

目的:建立分子量印迹(MWI)质谱数据后处理策略,快速筛选超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)采集的活心丸中蟾蜍二烯酸内酯和二萜生物碱类化学成分。方法:基于文献和PubMed等数据库,分别构建源于蟾酥和附子的蟾蜍二烯酸内酯和二萜生物碱类化合物内部数据库,将m/z[M+H]+按整数部分和小数部分拆分,以±0.005为误差范围,建立已知化合物二维散点图。采用UPLC-Q-TOF-MS获取m/z 50~1000的MS1和MS2数据,将采集到的MS1质荷比分成整数部分和小数部分,绘制样品二维散点图,与已知化合物二维散点图匹配,筛选已知化合物。并结合预测分子式及MS2信息,推导筛选化合物的质谱裂解途径,鉴定筛选出的化合物的化学结构。结果:从活心丸中初步筛选并鉴定了蟾酥来源的47个蟾蜍二烯酸内酯类化合物及附子来源的33个二萜生物碱类化合物。结论:利用MWI的数据后处理策略实现了对活心丸中蟾蜍二烯酸内酯和二萜生物碱类化合物的快速鉴定,为活心丸的质量控制及临床用药安全提供参考,也为解析中药化学成分的质谱数据提供了方法。

小叶榕对过敏性哮喘豚鼠模型的药效作用及其机制研究

目的:探究小叶榕对过敏性哮喘豚鼠模型的药效作用及其机制,为后续的药理机制和药效物质基础研究提供实验依据。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(孟鲁司特钠)、小叶榕干浸膏低剂量组、小叶榕干浸膏中剂量组、小叶榕干浸膏高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余5组均通过腹腔注射卵蛋白致敏和吸入卵蛋白诱导哮喘发生,建立豚鼠过敏性哮喘模型。观察各组豚鼠引喘潜伏期、咳嗽次数、肺组织病理学、肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和嗜酸粒细胞(EOS)百分率、血清中白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素4(IL-4)、血清免疫球蛋白E(Ig E)含量的改变。结果:与空白对照组相比,模型组豚鼠肺组织有明显病理改变,BALF中白细胞总数和EOS百分率、血清中细胞因子IL-5、IL-4、Ig E含量均增加(P<0.05)。各治疗组与模型组对比,引喘潜伏期均增加,咳嗽次数减少,BALF中白细胞总数和EOS百分率、血清中IL-5、IL-4、Ig E含量明显降低(P<0.05)。小叶榕低、中剂量组与阳性对照组对比,咳嗽次数增加,BALF中白细胞总数和EOS百分率、血清中IL-5、IL-4、Ig E含量明显增加(P<0.05)。结论:小叶榕能够改善过敏性哮喘豚鼠的哮喘症状、减轻肺组织病变情况。其作用机制可能与调节参与炎症反应的细胞因子IL-4、IL-5,血清中Ig E和减少EOS浸润有关。

基于Akt/mTOR及ERK/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影响

目的基于蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影响。方法SD大鼠ip盐酸异丙肾上腺素诱导心肌肥大,分别给予活心丸和盐酸普萘洛尔进行干预,检测大鼠超声心动图,采用ELISA法检测大鼠血清中心肌肥大指标心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;采用苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察大鼠心肌组织病理变化;采用免疫组化法检测大鼠心肌组织微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)蛋白表达情况;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织ERK、磷酸化ERK(phosphorylated ERK,p-ERK)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和LC3蛋白表达情况。结果与模型组相比,各给药组大鼠心肌肥大缓解,心肌组织病理损伤减轻,血清中ANP、BNP、TNF-α和IL-6水平显著降低(P<0.01、0.001);心肌组织中pERK/ERK、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平显著升高(P<0.05、0.01),LC3Ⅱ/LC3 I蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。结论活心丸通过抑制自噬减轻大鼠心肌肥大,其机制可能与激活Akt/mTOR及ERK/mTOR通路相关。