抗人小细胞肺癌独特型单克隆抗体的制备

抗人小细胞肺癌独特型单克隆抗体的制备杨瑶琴胡晶莹莫忠根张中华李斯德作者单位：上海市肿瘤研究所免疫及细胞生物学研究室（上海２０００３２）关键词抗体，单克隆肺肿瘤癌，小细胞抗独特型抗体的应用是近年来肿瘤免疫治疗的一种新方法［１］，抗肿瘤特异性抗体（Ａｂ１...

天花粉-5A(10)2免疫毒素的形成及其对人肺腺癌细胞SPC体外导向杀伤作用的研究

目的通过化学交联形成天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素，对人肺腺癌细胞ＳＰＣ进行导向杀伤作用的研究。方法天花粉毒蛋白与２┐ＩＴ（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ，２┐亚氨基四氢噻吩）作用、抗人肺腺癌单抗５Ａ（１０）２与ＳＰＤＰ（Ｎ┐ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ┐３┐［２┐ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ］ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，Ｎ┐琥铂酰亚胺┐３┐［２┐吡啶二硫］┐丙酸酯）作用，分别导入巯基（┐ＳＨ）和２┐吡啶二硫丙酰（ＰＤＰ，２┐［ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ］ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）基，通过天花粉分子中引入的┐ＳＨ与５Ａ（１０）２分子中引入的ＰＤＰ作用将天花粉与５Ａ（１０）２单抗连接在一起，形成免疫毒素分子。结果体外细胞毒实验表明，天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素对ＳＰＣ的杀伤作用比游离天花粉至少高６～７倍，而对肝癌细胞７７２１的杀伤作用与游离天花粉相近。结论证明天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素在体外对靶细胞ＳＰＣ具有导向杀伤作用。

蓖麻毒素A链蛋白的表达、活性及其对人肺腺癌细胞SPC的毒性作用

目的 :研究构建重组单链免疫毒素 ,对人体肿瘤进行导向治疗。方法 :采用PCR方法从克隆化载体中拉出蓖麻毒素A链 (ricinA)基因 ,装入经过改建的pTSA 18F表达载体 ,进行目的基因DNA序列分析后导入E .coliBL2 1(DE3)中进行表达 ,表达产物进行SDS PAGE和Westernblot检查 ,表达产物的生物活性通过RNAN 糖苷酶活性检查、无细胞体系中对蛋白质生物合成的抑制以及对肿瘤细胞的毒性作用来分析。结果 :SDS PAGE检查表明 ,转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中出现 1条Mr约 30× 10 3 大小、较空载体对照E .coliBL2 1(DE3) (pTS)明显浓黑的条带 ;Westernblot检查表明 ,转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中有杂交条带出现 ,而E .coliBL2 1(DE3) (pTS)中没有 ;表达蓖麻毒素A链蛋白能够特异地作用于大鼠肝 2 8S核糖体RNA ,使其产生约 45 0nt大小的核酸片段 ;对无细胞体系中蛋白质生物合成的IC50 为 3 7× 10 -9mol/L ,略高于天然蓖麻毒蛋白 ;具有与天然蓖麻毒蛋白相近的肿瘤细胞毒性。结论 :蓖麻毒素A链基因在转化子E .coliBL2 1(DE3) (pTSRA)中获得表达 ,表达产物具有与天然蓖麻毒蛋白相近的RNAN 糖苷酶活性 ,在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有抑制作用 。

抗人小细胞肺癌单克隆抗体导向治疗的实验研究

用移植人小细胞肺癌的裸鼠作为肿瘤模型,研究了碘标记单克隆抗体2F7在体内的肿瘤显fi,抗体、药物偶合物的连接,导向药物2F7-HSA-MTX的体外细胞毒及体内肿瘤抑制作用。结果显示,碘标记抗体在荷瘤小鼠体内有确切的肿瘤定位作用,清晰的肿瘤显像持续到168h以后。间接连接的导向药物可携带更多的MTX分子,细胞毒作用比直接连接提高2倍。导向药物可使荷瘤小鼠的长瘤潜伏期延长,长瘤率降低,抑瘤率为84％和自然生存期延长。

单克隆抗体及F(ab′)_2片段在小鼠体内的药物动力学研究

用^(125)I标记单克隆抗体(IgG2a)和相应片段F(ab′)_2,比较它们经静脉或腹腔不同途径注射后在小鼠体内的药物动力学变化。结果显示,同一种抗体形式(完整抗体或F(ab′)_2经iv或ip不同途径给药时,整体排泄率、血液清除率和生物半衰期等无明显差异(P>0.05);而相同途径给药时,完整抗体与F(ab′)_2比较,二者的Ke、T1/2、TBCL显著差异(P<0.05-0.01),完整抗体腹腔注射的生物利用度94％。提示:F(ab′)_2片段有利于改善肿瘤体内定位显象,腹腔注射是有效的给药途径。

用单克隆抗体筛选小细胞肺癌相关抗原基因

用分子生物学技术克隆肿瘤相关抗原基因对认识肿瘤抗原本质、深入研究肿瘤抗原的结构和功能、研究肿瘤多肽疫苗有重要意义。我们已获得一组抗人小细胞肺癌单克隆抗体，并在体外证实该抗体所识别的抗原在靶细胞有较好的特异性和较高分布密度，是多肽性抗原决定簇。在此基础上，以抗体为探针，筛选小细胞肺癌基因库，目的在于寻找编码抗体所识别抗原的肿瘤相关基因。

某焦化厂炉顶工血浆ras p21蛋白与淋巴细胞微核检测

某焦化厂炉顶工血浆ｒａｓｐ２１蛋白与淋巴细胞微核检测朱莉芳１姚根富１李吉慧２钟礼杰１莫忠根１瞿永华１作者单位：１．上海市肿瘤研究所（２０００３２）２．上海焦炉总厂卫生科分子流行病学研究表明，原癌基因受到各种因素激活后（尤其是化学致癌物）可转化为癌基因...

裸鼠自发性淋巴道转移肿瘤模型的建立

在裸鼠发现一例自发性皮下肿瘤,伴广泛淋巴结转移,经10代以上体内传代,在裸鼠体内长瘤及转移的特性稳定,原位长瘤率大于95％,潜伏期5—12天,转移率100％,平均荷瘤生存时间22天。大体解剖见腹股沟、腋下、颌下、腹腔等处有不同程度淋巴结转移。光镜和电镜的形态学检查见肿瘤细胞形态圆、较小、核大胞浆少,染色质呈块状、围裙状,分裂相多见,符合小细胞分化程度较差的恶性肿瘤,转移灶和原位灶形态学上相似。该可稳定传代、广泛淋巴道转移的小鼠肿瘤定名为LMLM瘤系。

小细胞肺癌单克隆抗体2F7F_((ab′)2)片段的^(99)Tc^m标记试剂盒的制备

采用2-亚氨噻酚盐酸盐修饰2F7F(ab′)2,通过葡庚糖酸转换,将Tcm标记在小细胞肺癌单克隆抗体2F799F(ab′)2上,并测定抗体的修饰率、标记率、胶体含量、免疫活性、稳定性及安全性,探讨一种高效便捷的Tcm-2F799F(ab′)2放免显像药盒的研制方法。结果显示:已修饰2F7F(ab′)2的修饰效率(巯基/分子)为6.3,99Tcm的标记率为93.5%,99Tcm胶体含量为2.5%,修饰抗体有良好的稳定性和免疫活性;;进行无菌、无热原、急慢性毒性实验,结果表明各项指标符合中国药典规定,所以建立的高效、便捷的单抗片断放免显像方法可以适应药盒化发展方向,该修饰、标记技术将对单抗F(ab′)2的放免显像的应用起到良好的作用。

CD_3免疫磁性珠的研制和鉴定

ＣＤ３免疫磁性珠的研制和鉴定张中华沈卫平莫忠根杨瑶琴沈翠英作者单位：上海市肿瘤研究所免疫及细胞生物研究室（上海２０００２３）关键词免疫磁性珠抗体，单克隆，ＣＤ３淋巴细胞，ＣＤ３＋自从１９７１年Ｗｅｓｔｏｎ和Ａｖｒａｍｅａｓ首次用琼脂糖－聚丙烯酰胺制备...

抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制

将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。

抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体（mAb），对其进行特性鉴定，为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，并用Ni—NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白I作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化，制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体，用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ImAb的杂交瘤细胞，分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3，所产抗体，均为IgGl亚型，轻链均为K链，亲和力为（2．3～3．03）×10^8L／mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs，为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。

适于杂交瘤细胞长期大量繁殖的SCI－8910培基的研制

单抗的免疫导向治疗已成为国内外肿瘤研究的热点之一。目前杂交瘤分泌单抗的来源一部分是小鼠腹水，另一部分培养于含血清的培养基内，这对单抗纯化带来困难，对免疫导向治疗也带来许多不利条件，如牛的ＩｇＧ、鼠的病毒等的污染。因此，我们着手研制一种能适应于杂交瘤长期培养的无血清培基，定名为ＳＣＩ－８９１０。现已进行了９株杂交瘤细胞的长期培养，同时用该培基在１．５Ｌ的Ｃｅｌｌｉｇｅｒ（ＮＢＳＵＳＡ）搅拌生物反应器中长期培养鼠－鼠杂交瘤细胞２Ｆ７（分泌抗人小细胞肺癌单抗）获得成功，经检测单抗纯度达到一定要求，产品在８ｍｇ／Ｌ以上。结果提示，该无血清培基制备的ＭＣＡｂ用于免疫导向治疗的可行性及大规模生产的可能性。

STUDY OF RADIOIMMUNOIMAGING WITH MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST THE PATIENTS WITH SCLC

It is an Innovative way to diagnose with cancer with monoclonal antibody (MAb) in vivo. 1-3 After proving MAb 2F7 (IgG2a) had a higher affinity and better specificity to human small cell lung cancer cells in vitro, 4.5 and gave a very clear cut γ- camera pictures for the xenografts of human small cell lung cancer (SCLC) born by nude mice, 6 the possibility of clinical radioimmunoimaging was studied with the MAb 2F7 and its fragment F (ab') 2.