降低蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2Ac)去甲基化促进巨噬细胞M1型分化

目的研究蛋白磷酸酶2A催化亚基C(PP2Ac)去甲基化在巨噬细胞M1型分化中的作用。方法 THP-1细胞经佛波酯(PMA)诱导分化为M0型巨噬细胞,再用脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激48 h分化为M1型巨噬细胞;处理组和溶剂对照组在M1型巨噬细胞模型上,分别加入0. 5μmol/L ABL127和二甲基亚砜(DMSO)培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态学变化,实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞分化标志物环加氧酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和C-X-C趋化因子配体10(CXCL10)的mRNA水平,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能,Western blot法检测PP2Ac去甲基化水平。结果 M0型巨噬细胞分化为M1型巨噬细胞,细胞伸出伪足逐渐呈梭形,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL10的mRNA水平明显升高,吞噬功能增强,PP2Ac去甲基化表达下降;处理组加入0. 5μmol/L ABL127,与溶剂对照组相比,PP2Ac去甲基化水平明显降低,梭形细胞增多,分化标志物COX-2、TNF-α、IL-6和CXCL10明显增高,吞噬功能增强。结论降低PP2Ac去甲基化能促进M1型巨噬细胞分化,并增强巨噬细胞促炎性细胞因子表达和吞噬功能。

肝癌细胞蛋白磷酸酶2A催化亚基在过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导急慢性肝癌细胞损伤模型中的表达及其对肝癌细胞的影响

目的探讨过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2A)的表达情况。方法采用不同浓度的过氧化氢(0、50、100、200、400、800μmol/L)或黄曲霉毒素B1(0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)诱导肝癌细胞(HepG2/Huh-7细胞)2、4、6、8和24、48 h后,倒置显微镜观察细胞形态,刃天青实验检测肝癌细胞活性,Western Blot检测去甲基化PP2A催化亚基C(PP2Ac)和总PP2Ac蛋白的表达情况。两组间比较用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析和析因设计资料两因素方差分析。结果HepG2/Huh-7细胞对过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导敏感,随着过氧化氢和AFB1浓度升高或孵育时间延长,细胞形态发生变化,数量减少。在2、4、6和8 h时间段,100μmol/L及以上浓度的过氧化氢诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着过氧化氢浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同浓度过氧化氢与对照组(0μmol/L)比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在4个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。在24、48 h时间段,2.5μmol/L及以上浓度黄曲霉毒素B1诱导HepG2/Huh-7细胞后,随着浓度的升高,HepG2/Huh-7细胞活性逐渐下降,不同黄曲霉毒素B1浓度与对照组(0μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。在两个不同时间段,两株细胞IC50用两因素方差分析比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。用200μmol/L过氧化氢诱导HepG22 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.553、-2.990,P值分别为0.005、0.040);400μmol/L过氧化氢诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为0.073、-5.149,P值分别为0.002、0.007)。用10μmol/L黄曲霉毒素B1诱导HepG2细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-4.561、-5.788,P值分别为0.010、0.004);20μmol/L黄曲霉毒素B1诱导Huh-7细胞2 h后,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达水平与对照组相比升高,差异均有统计学意义(t值分别为-5.120、-6.144,P值分别为0.007、0.004)。结论过氧化氢和黄曲霉毒素B1诱导肝癌细胞急慢性损伤后细胞形态发生变化,细胞活性降低,总PP2Ac和去甲基化PP2Ac蛋白表达升高。