诃子水提物体内外抗菌作用及止痒效果研究

以诃子水提物(TRW)为研究对象,探究其对限制性马拉色菌(Malassezia restricta,M.restricta)体内外抗菌作用及对豚鼠皮肤瘙痒模型的止痒作用。采用试管药基法测定TRW的体外最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,对M.restricta的MIC为7.20 mg/mL。采用连续7日涂菌法构建豚鼠皮肤感染M.restricta模型,探讨TRW的体内抗菌活性。结果表明,给药7天后与模型组比较,TRW高、中剂量组可显著降低豚鼠感染皮损评分(P<0.05);TRW低、中、高剂量转阴率分别为37.5%、50%和62.5%;减轻豚鼠病理组织的损伤程度,采用磷酸组胺构建皮肤瘙痒模型探讨TRW的止痒效果。结果显示,TRW明显抑制磷酸组胺所致的瘙痒(P<0.05)。

黄绵马酸BB对革兰阳性致病菌的抗菌活性和生物被膜清除作用研究

目的探究黄绵马酸BB对3种革兰阳性致病菌的抗菌活性及生物被膜的清除作用。方法采用微量稀释法测定黄绵马酸BB对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis,EFA)及屎肠球菌(Enterococcus faecium,EFM) 15株临床分离株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);考察黄绵马酸BB对MRSA2、EFA13和EFM15生长周期的影响;采用CCK-8法、扫描电子显微镜(SEM)考察黄绵马酸BB对MRSA2、EFA13和EFM15生物被膜的清除作用。结果黄绵马酸BB对MRSA的MIC为11.49~63.50μg/mL、MBC为22.98~160.00μg/mL,对EFA的MIC为7.07~160.00μg/mL、MBC为28.28~160.00μg/mL,对EFM的MIC为16.82μg/mL、MBC为56.57μg/mL,其中黄绵马酸BB对MRSA1、2和EFA14、15的MIC均小于莫匹罗星;黄绵马酸BB对MRSA2、EFA13和EFM15的生长具有抑制作用,能延迟受试菌进入对数生长期;MIC黄绵马酸BB对MRSA2、EFA13和EFM15生物被膜的清除率分别达到85.15%、76.48%、82.31%,均优于莫匹罗星、万古霉素、达托霉素;黄绵马酸BB对MRSA2生物被膜聚集及成熟阶段的清除效果优于达托霉素,对EFA13生物被膜聚集及成熟阶段的清除效果优于莫匹罗星、万古霉素、达托霉素,对EFM15生物被膜成熟阶段的清除效果优于莫匹罗星、万古霉素、达托霉素。结论黄绵马酸BB具有良好的体外抑菌活性以及对生物被膜的清除作用。

黄绵马酸BB对皮肤软组织感染致病菌的抗菌活性及机制研究

目的研究黄绵马酸BB对皮肤软组织感染致病菌的抗菌活性,并探讨其对金黄色葡萄球菌的抗菌机制。方法采用微量稀释法测定黄绵马酸BB对皮肤软组织感染相关致病菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimumbactericidalconcentration,MBC);以对黄绵马酸BB敏感的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)临床分离株和金黄色葡萄球菌标准株ATCC29213为受试菌,考察黄绵马酸BB对其生长活力和菌体形态结构的影响,采用酶标仪考察黄绵马酸BB对其细胞壁通透性的影响,采用荧光分光光度计考察黄绵马酸BB对细胞膜电位的影响,采用qRT-PCR法考察黄绵马酸BB对青霉素结合蛋白1(penicillin-binding protein1,PBP1)m RNA表达的影响。结果黄绵马酸BB对ATCC29213的MIC为10.0~20.0μg/mL,MBC为10.0~40.0μg/mL,且对MRSA临床分离株的MIC小于头孢唑啉;与对照组比较,黄绵马酸BB组ATCC29213和MRSA生长受到抑制,菌体细胞形态结构改变,细胞膜电位显著降低(P<0.05),1/2MIC黄绵马酸BB可显著下调PBP1 mRNA表达水平(P<0.01),2MIC黄绵马酸BB可显著上调PBP1 mRNA表达水平(P<0.01)。结论黄绵马酸BB对MRSA临床分离株表现出良好的抗菌活性,且其抗菌作用与破坏菌体细胞结构、降低细胞膜电位、影响PBP1 mRNA表达有关。

黄绵马酸BB联合红霉素抑制表皮葡萄球菌及其生物被膜的形成研究

目的探讨黄绵马酸BB与红霉素联用对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)抑菌活性和生物被膜形成的作用,为黄绵马酸BB开发成为一种新型的生物被膜抑制剂提供理论基础。方法采用微量稀释法分别测定黄绵马酸BB与红霉素联用对11株SE的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),并采用微量棋盘稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)与最低抑膜浓度(minimum biofilm inhibitory concentration,MBIC);采用时间-杀菌曲线法,评价联合用药对SE的动态杀菌作用;通过二甲氧唑黄[2.3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[carbonyl(phenylamino)]-2H-tetrazolium hydroxide,XTT]比色法、半定量黏附实验和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察,评价联合用药对生物被膜形成各阶段的清除作用;采用qRT-PCR技术检测生物被膜形成相关基因表达的变化,探索联合用药可能的分子机制。结果黄绵马酸BB与红霉素联用的FICI为(0.51±0.00)~(0.75±0.05),表现为相加作用;联合用药对受试菌呈动态抑制和杀灭作用,整体呈相加作用;生物被膜形成的各阶段,联合用药组均可显著抑制受试菌的代谢活性及生物被膜总量的形成,并减少细菌量及胞外聚合物的形成。联合用药组在耐药菌株SE04的生物被膜形成的各阶段均下调基因aap及sarA的表达,并上调基因agrA的表达;对于敏感菌株SE08,在生物被膜形成的各阶段均下调aap、sarA的表达,在黏附及聚集期上调agrA的表达。结论黄绵马酸BB与红霉素联用可以有效抑制SE及其生物被膜的形成,并呈相加作用。抗生物被膜效应与抑制细菌代谢活性、生物被膜总量以及生物被膜形成相关基因的表达有关。

柠檬醛对马拉色菌所致豚鼠皮肤感染的止痒作用

目的 探究柠檬醛(citral)抗限制性马拉色菌活性及其在豚鼠皮肤感染模型中的止痒作用。方法 采取微量倍比稀释法测定柠檬醛对限制性马拉色菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC);建立限制性马拉色菌致豚鼠皮肤感染模型,分别从皮损评分、真菌转阴率、组织病理学、免疫组织化学Ki67四方面综合评价柠檬醛对限制性马拉色菌所致豚鼠皮肤感染的作用;建立组胺致豚鼠皮肤瘙痒模型,探讨柠檬醛的止痒作用。结果 柠檬醛对限制性马拉色菌的MIC值为(0.14±0.076)μg/mL。与正常组比较,模型组和空白基质组豚鼠皮肤均可见角质层破损严重、表皮角质化过度、颗粒层和棘层增厚等症状。给药7 d后,与模型组和空白基质组比较,各给药组豚鼠上述症状均有不同程度的减轻,其中柠檬醛中、高剂量组可显著降低豚鼠感染模型皮损评分(P<0.05);柠檬醛低、中、高剂量组的真菌转阴率分别为37.50%、50.00%、62.50%,免疫组织化学染色结果表明柠檬醛中、高剂量组可抑制表皮增殖因子Ki67的阳性表达;同时柠檬醛中、高剂量组可提高豚鼠的致痒阈值(P<0.05)。结论 柠檬醛具有较好的抗限制性马拉色菌活性,在马拉色菌所致豚鼠皮肤感染模型中有较好的止痒作用。