Mpl基因RNA干扰载体的构建及荧光显微镜筛选

目的:建立荧光显微镜快速筛选对血小板生成素受体(Mpl)基因RNA干扰片段的方法。方法:通过体外重组技术将Mpl与绿色荧光蛋白(GFP)构建成融合基因,克隆进pDs载体中产生pDs-Mpl-GFP载体,将人U6启动子及5个Mpl shRNA发夹结构(shMpl-A,shMpl-B,shMpl-C,shMpl-D,shMpl-E)分别克隆至pDs-Mpl-GFP真核载体中,构建出针对Mpl 5个不同位点的RNA干扰载体,然后将获得的上述干扰载体通过脂质体方法转染至293T细胞中,用荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数,判定构建的RNA干扰载体对靶基因RNA的干扰效果。结果:构建的5个干扰载体都能对转染的293T细胞中的Mpl-GFP融合基因进行有效的基因敲减作用,在pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A、pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-B与pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-E的干扰作用下,293T细胞中的荧光强度及发荧光细胞数目变得更少和更弱,干扰效果较好,而其它两个效果较差;在这三个较好的干扰载体中,pDs-Mpl-GFP-TK-U6-shMpl-A的干扰效果最好。结论:成功构建Mpl基因的真核RNA干扰载体,并筛选出有效的RNA干扰片段。

也谈初中班主任的班级管理工作

班主任全面负责班级中学生的思想、学习、生活等工作，是班级的组织者、领导者和教育者，班主任工作是辛苦、繁杂的，特别是乡镇初中的班主任工作，更需要花心思和技巧。针对乡镇中学班级的管理，本人总结了一些有效的工作方法。

初中英语词汇教学的一些方法与技巧

英国语言学家威尔金斯说：“没有语法，人们表达的事物寥寥无几，而没有词汇，人们则将无法表达任何事物。”词汇是英语学习的基础，词汇教学是英语教学的重要组成部分。随着新课程改革的不断深入，要求学生掌握的词汇也不断增多，难度也有所增大，所以词汇教学就显得更加重要了。本文针对英语词汇教学这一问题，结合教学中的实际做法及经验来探讨词汇教学的方法与技巧。