星形胶质细胞调控下红花黄色素对Aβ1-42介导的海马神经元突触损伤的保护作用研究

目的探讨星形胶质细胞存在下红花黄色素对Aβ1-42诱导的神经元突触损伤的保护作用。方法采用Aβ1-42损伤海马神经元模拟体外AD,不同浓度(0.01、0.1、1g/L)红花黄色素进行干预,MTT法测定细胞存活率选择最佳浓度。建立纯化海马神经元培养体系(NE-S)和星形胶质细胞和神经元共混合培养体系(MIX-S),两种培养体系分别设立正常对照组、Aβ1-42(15μmol/L)模型组、红花黄色素给药组。倒置显微镜下观察细胞形态;WesternBlot检测神经元内SAP102蛋白表达水平。结果(1)红花黄色素(0.01、0.1、1g/L)能够显著提高神经元的存活率,且具有剂量依赖性;(2)神经元形态结果显示在MIX-S的模型组中神经元突触萎缩状态较NE-S的模型组稍微有所改善。红花黄色素(1g/L)能明显改善NE-S和MIX-S中的神经元突触萎缩状态,但NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组神经元形态没有差异性;(3)WesternBlot结果显示在MIX-S的模型组中SAP102蛋白表达较NE-S的模型组有所增加。在NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组SAP102蛋白表达都明显上调,但NE-S和MIX-S中的红花黄色素1g/L给药组SAP102蛋白含量没有差异性。结论星形胶质细胞的存在可增加Aβ1-42损伤的神经元突触蛋白的表达,但并不提高SY对神经元突触损伤的保护作用。

红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞模拟体外AD,不同浓度(0. 01、0. 1、1g/l)红花黄色素进行干预。倒置显微镜下观察细胞形态; MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内Aβ_(1-42)水平; Western Blot检测SH-SY5Y细胞内APP、BACE-1、SAPPα、NEP、IDE、ERK和P-ERK蛋白表达水平。结果:红花黄色素各剂量均能够减少Aβ_(1-42)引起的SH-SY5Y细胞的损伤,使细胞的存活率显著提高,且具有剂量依赖性;ELISA结果显示,红花黄色素0. 1、1g/L可降低SH-SY5Y细胞内的Aβ_(1-42)水平; Western Blot结果显示红花黄色素各剂量均可以上调SAPPα、NEP、IDE和P-ERK蛋白的表达,下调APP和BACE-1蛋白的表达。结论:红花黄色素可以通过调节Aβ_(1-42)相关代谢酶而减少Aβ_(1-42)的含量,发挥抗AD作用,该作用可能与MAPK/ERK通路的激活有关。

红花黄色素对APP/PS 1双转基因小鼠脑组织中胶质细胞活化及炎症因子释放的影响

目的:探讨红花黄色素(SY)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease AD)转基因小鼠学习记忆能力的影响及其对脑组织中胶质细胞活化和炎症因子释放的影响。方法:选用6月龄APP/PS 1双转基因小鼠60只,随机分成5组:转基因组、多奈哌齐组(0.75 mg/kg)、红花黄色素10、30、100 mg/kg剂量组,同月龄野生型C57BL/6小鼠12只作为对照组,其中转基因组与对照组灌胃相应体积的生理盐水。连续3个月灌胃给予相应药物治疗后,进行Morris水迷宫实验。采用免疫组织化学法检测GFAP及CD45的表达,ELISA试剂盒测定各组小鼠皮层中IL-6、IL-8及TNF-α的表达。结果:与野生型小鼠相比,转基因组小鼠空间学习记忆能力明显下降,皮层及海马CA1、CA3、DG区的CD45、GFAP表达水平均增高,皮层组织中TNF-α、IL-6、IL-8水平显著增加。经红花黄色素治疗后,红花黄色素10、30、100 mg/kg剂量组学习记忆能力显著改善,其对GFAP、CD45、IL-6、IL-8及TNF-α的表达具有显著降低的作用;红花黄色素100 mg/kg剂量组对转基因小鼠海马各区CD45、皮层及海马部位GFAP以及皮层IL-6、IL-8的表达均有显著降低的作用;红花黄色素10 mg/kg剂量组对小鼠大脑海马CA1、CA3及皮层部位的CD45、海马及皮层部位的GFAP、皮层IL-8的表达有显著降低的作用。结论:红花黄色素可以提高痴呆小鼠的学习记忆能力,同时可抑制脑组织胶质细胞活化,减轻皮层组织炎症损伤。