1株猪源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构建进化树对可疑菌株进一步鉴定,利用药敏试验和动物回归试验研究分离菌株的耐药性和致病性。【结果】分离菌株在TSN平板上呈黑色菌落,在血平板上呈α、β双溶血环,革兰染色呈紫色粗大杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、还原性硝酸盐试验、H_2S试验和明胶液化均呈阳性,甘露醇、吲哚试验和水杨酸结果呈阴性。16S rRNA序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。PCR扩增出plc及cpb2基因,表明该菌株为携带β2毒素的A型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素G、庆大霉素、林可霉素、磺胺异噁唑、环丙沙星、诺氟沙星耐药。动物回归试验结果显示,攻菌后仔猪粪便中可检出大量产气荚膜梭菌,该菌株可引起仔猪腹泻,死亡率达50%;死亡仔猪剖检可见小肠充血、出血、鼓气,从脾脏、小肠中可分离出产气荚膜梭菌,且在损伤严重的空肠肠段中分离出高载量A型产气荚膜梭菌。【结论】本试验成功分离出1株A型产气荚膜梭菌,可引起新生仔猪发病,致病性较强,该研究结果为A型产气荚膜梭菌感染仔猪的诊断、流行病学调查、治疗提供了参考依据。

一例规模化猪场流行性腹泻病的诊断与防控风险分析

2022年2月4日,广西壮族自治区某规模化猪场妊娠母猪陆续出现水样腹泻、不吃或少吃料的临床症状,2022年2月6日,产房仔猪出现呕吐、水样腹泻,怕冷扎堆,脱水严重,且传播速度快。通过试剂盒快速检测和实验室检测,诊断为猪流行性腹泻病。针对检测结果对猪群进行紧急疫苗接种和药物治疗,并对此次疫情的发生和发展过程进行防控风险点分析,发现养猪场在生物安全方面存在较大的风险点,通过整改并采取严格的生物安全管理措施后,母猪群发病情况得到缓解,仔猪腹泻窝数下降,猪群趋于稳定,生产成绩逐步恢复。通过对此次案例的分析探讨,为规模化猪场对猪流行性腹泻病的发现和防控提供临床经验,同时增强对流行性腹泻病的风险预警意识,健全规模化猪场对流行性腹泻病的风险预警机制。

2022年中国南方部分地区猪肺炎支原体感染状况的调查与分析

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是猪地方性肺炎(EP)的原发性病原,可导致猪咳嗽、气喘、消瘦,并因猪的饲料转化率升高、日增重减少、出栏时间延长,从而使养殖成本大大增加,给养猪业造成重大经济损失。本研究旨在对中国南方部分地区猪肺炎支原体的感染状况进行调查与分析。从中国南方部分地区21个规模化种猪场定点采样,首先通过病原检测比较鼻拭子和喉拭子的采样效果,随后以简单随机抽样结合分层抽样确定各猪场样本量。共收集母猪喉拭子样品1478份,并将调查的猪群按胎次分为“0~1胎母猪”和“≥2胎母猪”,通过实时荧光定量PCR进行病原检测,通过多位点序列分型(MLST)结合保守的p36基因及非保守的p97和p146基因进行分子流行病学分析。检测结果表明,鼻拭子样品的检出率为16.67%,喉拭子样品的检出率为56.67%,且Ct值更低。猪肺炎支原体感染的场检出率为66.67%,但各场感染压力较小,检出率为1.39%~18.57%。其中“0~1胎母猪”检出率为10.05%;“≥2胎母猪”检出率为2.17%。分子流行病学结果显示,7个猪场的流行菌株均为同一序列类型(ST128),不同猪场间的流行菌株高度同源。对于猪肺炎支原体的病原学检测,喉拭子是比鼻拭子更灵敏且有效的活体样品类型,母猪胎次和生猪调运引种是规模化种猪场感染猪肺炎支原体的重要因素。本研究为猪肺炎支原体的防控和净化工作提供理论基础。

1株沙门氏菌噬菌体的分离鉴定和特性分析

【目的】分离有效裂解沙门氏菌的噬菌体,为探索新的沙门氏菌防控方法提供理论依据和参考。【方法】以鸡白痢沙门氏菌X-1014为宿主菌,通过双层琼脂平板法从污水中分离并纯化出噬菌体。采用噬菌斑与电子显微镜观察、宿主谱测定、生物学特性测试、体外抑菌试验及噬菌体的全基因组测序分析方法评估该噬菌体。【结果】分离纯化出1株能裂解沙门氏菌和大肠杆菌的裂解性噬菌体,命名为ZH5(GenBank登录号:OM864357.1)。双层平板法结果显示,噬菌斑透亮且边缘清晰。电镜观察显示,噬菌体ZH5头部呈二十面体、头部直经约50 nm,尾部长度约20 nm。宿主谱分析结果显示,噬菌体ZH5能裂解3株沙门氏菌和1株大肠杆菌。生物学特性结果显示,最佳感染复数为10,潜伏期和爆发期分别为20和60 min,裂解量约为139 PFU/cell;酸碱耐受范围为pH 4.0~10.0,且在温度为4~50℃的环境中能存活30 min。体外抑菌结果显示,当感染复数为10时,噬菌体ZH5对沙门氏菌X-1014和CVCC 1806抑制效果最佳。全基因组分析结果显示,该噬菌体全长为42949 bp,GC含量为51.41%,其中已知功能编码序列(coding sequences,CDS)占比为52%。线性比对分析结果显示,噬菌体ZH5与大肠杆菌噬菌体Minorna相似性最高(相似性94.19%;覆盖率84%)。系统发育进化树分析表明,噬菌体ZH5属于Drulisvirus属。【结论】本研究分离出1株能跨宿主裂解沙门氏菌和大肠杆菌的噬菌体,为进一步研究沙门氏菌抗菌剂提供了良好的材料。

1株大肠杆菌噬菌体EP_H11的分离鉴定及生物学特性分析

【目的】拟分离1株对大肠杆菌具有良好抑菌效果且适应性广泛的噬菌体,为开发新的大肠杆菌防治方法提供基础。【方法】以大肠杆菌H11为宿主菌,采用双层琼脂平板法从污水样品中分离纯化1株大肠杆菌噬菌体,电镜下观察噬菌体的形态,测定噬菌体的效价、宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、pH稳定性与温度敏感性,对噬菌体的全基因组进行分析和序列比对,并探究该噬菌体在液体培养基中对H11的抑制效果。【结果】成功分离到1株裂解性大肠杆菌噬菌体,命名为EP_H11(登录号:OP688485)。双层琼脂平板法结果显示,该噬菌体能够形成大小一致、中间有透明亮点、周围有光晕的噬斑,噬菌体裂解效价可达109~1010 PFU/mL。电镜观察显示噬菌体EP_H11头部呈规则的多面体状,直径约85 nm,尾部直径约23 nm,长度约109 nm。以大肠杆菌H11为宿主菌测得EP_H11的最佳感染复数是0.1,一步生长曲线结果显示其潜伏期为40 min,爆发期为80 min,裂解量为200 PFU/cell。该噬菌体在pH 4.0~10.0的环境中至少可以存活2 h以上,并能够在10~60℃下保持稳定90 min。结合透射电镜观察及全基因组分析结果显示,噬菌体EP_H11属于有尾病毒目、长尾噬菌体科、肌尾噬菌体属。噬菌体基因组总片段长度为111373 bp,GC含量为44.49%。噬菌体线性对比结果显示,大肠杆菌噬菌体EP_H11的基因组与噬菌体Escherichia phage vB_EcoM_IME392同源性最高。系统发育进化树分析结果表明,噬菌体EP_H11与肌尾属噬菌体Escherichia phage vB_EcoM_IME392位于同一分支,均属于有尾噬菌体目、长尾噬菌体科。经BLAST比对分析显示,噬菌体EP_H11基因组中共有153个CDSs,其中28个CDSs编码功能蛋白。体外抑菌结果显示,8 h内,EP_H11在MOI为10时表现出良好的抑菌效果。【结论】本研究分离到1株裂解性极强,适应性范围较广,体外抑菌效果良好的噬菌体。该噬菌体具有进一步开发成为大肠杆菌抗菌剂的潜力。

中草药饲料添加剂在母猪生产中的应用进展

中草药具有来源广泛、取材方便、低残留、无耐药性等特点,在畜禽养殖生产中具有广泛的应用前景。中草药饲料添加剂可以缩短母猪产程,改善母猪产仔、泌乳、再繁殖性能,防治母猪产后炎症及调节肠道健康等。文章综述了中草药饲料添加剂的营养作用、生物活性成分、生物学功能及其在母猪生产中的应用进展,为中草药饲料添加剂提高母猪繁殖性能提供参考。

塔式起重机塔身损伤判断方法分析——基于图谱特征分析

塔式起重机塔身损伤会直接影响起重机运行状态。因此,需针对塔式起重机损伤状态、损伤程度进行精准研判。本文结合图谱特征对塔式起重机的塔身损伤进行判断。借助专业的软件系统构建塔身损伤状态动态模型,并完成拟和参数对比分析工作。在对比中寻找能够集中体现产生损伤状态的关键指标。总结塔身损伤判断方法,为塔身损伤状态检测工作提供依据。提高起重机塔身损伤检测工作质量,为起重机的日常运用维修保养工作提供依据。

养殖场苍蝇防控方法探讨

苍蝇喜在粪便和腐烂物中产卵,雌蝇常爬入人畜粪便等孳生缝隙中,伸出产卵管在孳生物深处产卵,以利卵粒得到充分保护。苍蝇属于杂食性蝇类,主要采食人和畜禽的分泌物、排泄物等。由于它吐泄、排粪频繁,“边吃边吐”的习性,在畜禽场里,饲料、饮水器等常被它污染。1生活史成蝇→蝇卵→一龄幼虫→二龄幼虫→三龄幼虫→蝇蛹→成蝇1.1卵期的发育时间一般为8~24 h,与环境温度、湿度有关(见表1、表2)。

广西猪源产肠毒素大肠杆菌毒力因子及多重耐药性分析

本研究旨在探究广西某猪场可能存在的病原菌及其致病的主要原因。试验采用细菌分离纯化、形态学鉴定、生长曲线测定、生化分析及药敏试验等进行细菌的分离鉴定,应用PCR技术对菌株16S rRNA、毒力基因及耐药基因进行检测。结果表明,该由病料分离的菌株为无芽孢、有菌毛、两端钝圆的粗短杆状的革兰氏阴性菌,其繁殖能力强、生长迅速,疑似为大肠杆菌。16S rRNA扩增结果显示,出现大小为1 474 bp的条带,测序结果表明其与大肠杆菌的同源性可达99%。该菌株对31种常见抗菌药物表现出极强的耐药性,对庆大霉素、替米考星、四环素、恩诺沙星、青霉素、林可霉素、磺胺甲噁唑等均呈现较高的耐药水平,耐药率高达87.10%(27/32),仅对阿米卡星、黏菌素2种药物敏感。毒力因子检测共鉴定致病岛FyuA、肠毒素STb和LT及黏附素F41和K88共5种毒力因子,检出率为35.70%(5/14)。扩增出β-内酰胺酶类bla_(TEM)和bla_(OXA)、四环素类tet(A)、磺胺类Sul2、氨基糖苷类aadA1和aac(3′)-Ⅱa、喹诺酮类GyrA、GyrB和ParC及氯霉素floR共10种耐药基因,检出率为66.70%(10/15),且耐药基因的检出与耐药表型呈正相关。综上,该菌株含多种毒力因子,耐药型复杂,多重耐药性情况严重,需采取相应的预防措施,防止蔓延和传播。

血清抗体季度监测在大型规模化猪场疫病防控中的应用

国内养猪业大型化、规模化、集约化的快速发展,使猪场疫病防控的难度与要求更高,存在的风险与隐患更大。所以各大规模养猪场在不断完善与构建自身生物安全生产体系的同时,也充分考虑了场内人员流动、车辆管理走向、物资进出等方面防疫要求,规定严格生物安全隔离与消毒措施,从源头上杜绝可能存在的传染源接近猪场,切断疫病传播途径.