长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖表型的影响

【目的】探讨长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖表型的影响。【方法】收集2022年1月至2022年12月于海南医学院附属海南医院行滑膜清理术或膝关节置换术的4例RA患者及3例创伤性关节炎废弃滑膜组织,分离培养并鉴定FLS细胞。通过qPCR法检测RA组和创伤组滑膜细胞内Ln⁃cRNA GAPLINC表达水平。利用siRNA干扰技术靶向敲低GAPLINC表达,通过EdU法检测各组细胞增殖水平、流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布情况。通过qPCR法与WB法检测细胞周期调控蛋白cyclin D1、PCNA及周期抑制蛋白P21的表达水平。【结果】本研究通过qRCR验证发现,RA组LncRNA GAPLINC表达水平明显高于创伤组(P<0.05);特异性siRNA对GAPLINC的干扰效率为(85.96±1.76)%(P<0.05)。敲低GAPLINC后,EdU细胞增殖实验显示,与空白对照组(6.02±0.48)%、溶剂对照组(6.32±1.48)%和阴性对照组(6.12±1.51)%相比,GAPLINC干扰组S期细胞占(2.89±1.53)%,较各对照组明显降低(P<0.05)。利用流式细胞术检测各组细胞周期分布,结果显示GAPLINC干扰组PI值,即S+G2/M期细胞所占的百分比为(14.92±5.34)%,明显低于空白对照组(29.68±8.48)%、溶剂对照组(28.97±6.82)%、阴性对照组(31.13±5.13)%(P<0.05)。敲低GAPLINC后,与增殖表型正相关的基因Cyclin D1和PCNA的mRNA和蛋白水平均下降(P<0.05),而与增殖表型负相关的基因p21表达上调(P<0.05)。【结论】Ln⁃cRNA GAPLINC在RA-FLS细胞中高表达,敲低GAPLINC表达后,能显著降低RA-FLS细胞增殖活性,抑制细胞周期转化,提示LncRNA GAPLINC可能影响RA-FLS细胞增殖表型,导致滑膜异常增生,参与RA疾病的进展。

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

【目的】探讨IL-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。【方法】收集行关节置换术或关节镜下滑膜切除术患者的滑膜组织,组织块法培养FLS。利用荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测Bcl-2 m RNA和Bcl-XL m RNA、Western Blotting检测Bcl-2蛋白在RA、骨关节炎(OA)和创伤(Trauma)患者中FLS的表达水平。将RA-FLS以一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和/或重组人源性IL-22(rh IL-22)等处理24 h,流式细胞术分析检测凋亡。rh IL-22以不同的浓度(0、1、10、100 ng/m L)作用于RA-FLS和OA-FLS 24 h,Western Blotting检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。【结果】RA-FLS中Bcl-2 m RNA(P<0.05)、Bcl-XL m RNA(P<0.01)和Bcl-2蛋白(P<0.01)的表达水平明显高于与OA-FLS组和Trauma-FLS组。流式细胞术结果显示:与对照组相比,rh IL-22组细胞凋亡率未见明显变化(P>0.05),SNP组RA-FLS细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与SNP组相比,SNP+rh IL-22组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。rh IL-22可明显上调RA-FLS和OA-FLS中Bcl-2的蛋白表达水平(P<0.05),但RA-FLS对rh IL-22的作用更敏感。【结论】IL-22可抑制由SNP诱导的RA-FLS细胞凋亡,其机制可能部分与上调RA-FLS中Bcl-2的表达有关。

SPD-1、CYTL1在类风湿关节炎患者中的水平及其与免疫指标的相关性

目的 探讨可溶性PD-1(SPD-1)、细胞因子样蛋白1(CYTL1)在类风湿关节炎(RA)患者中的水平及其与免疫指标的相关性。方法 选取2019年10月至2020年10月该院收治的RA患者128例作为研究组,同期在该院体检的健康志愿者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测两组SPD-1、CYTL1水平,采用多功能液相芯片分析平台检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、类风湿因子(RF)和C-反应蛋白(CRP)水平,采用流式细胞仪检测血清CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例和B细胞比例。采用多元线性回归分析RA患者中SPD-1、CYTL1水平与部分免疫指标之间的相关性。结果 研究组SPD-1水平高于对照组(P<0.05),研究组CYTL1水平低于对照组(P<0.05);研究组TNF-α、RF、CRP水平及B细胞比例均高于对照组(P<0.05),研究组IFN-γ、IL-4、IL-17水平及CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例均低于对照组(P<0.05);多元线性回归分析结果显示,IL-4水平对RA患者的SPD-1、CYTL1水平产生影响(P<0.05)。结论 RA患者的SPD-1、CYTL1水平高于健康人,同时RA患者机体的部分免疫指标发生了一系列的生理化学变化,SPD-1、CYTL1水平与免疫指标IL-4水平存在相关性。

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用

目的:探究白细胞介素(IL)-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)功能的影响及机制。方法:组织块法培养RA-FLSs。将不同浓度(0、1、10、100μg/L)的重组人源性IL-22(rhIL-22)与RA-FLSs共培养24 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;利用10μg/L的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h,流式细胞术检测细胞周期改变。rhIL-22和/或信号转导和转录因子3(STAT3)特异性抑制剂STA-21以不同浓度作用RA-FLSs 24h,Western blot法检测Bcl-2和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:不同浓度的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h、48 h、72h后,RA-FLSs细胞活力明显增高,均显著高于对照组(P<0.05)。rhIL-22刺激RA-FLSs后,S期和G_2/M期细胞明显增多,G_0/G_1期细胞减少。Western blot法检测结果提示rhIL-22可上调RA-FLSs中Bcl-2、p-STAT3的蛋白水平,而STA-21单用或联用rhIL-22均可抑制RA-FLSs中Bcl-2及p-STAT3的表达(P<0.05)。结论:IL-22在RA-FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用,且STAT3在IL-22促RA-FLSs细胞Bcl-2表达的过程中起关键作用,提示IL-22可能对RA-FLSs凋亡有一定的影响。

可溶性程序性死亡受体-1和干扰素调节因子4在类风湿关节炎患者血清中的表达与疾病活动性、免疫炎症的关系

目的检测可溶性程序性死亡受体-1(sPD-1)、干扰素调节因子4(IRF4)在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达并探讨其临床意义。方法选取RA患者100例为研究对象(RA组),其中缓解期患者50例(RA缓解组),活动期患者50例(RA活动组)。另外,选取同期接受治疗的骨关节炎(OA)患者50例(OA组)和进行体检的健康者50例(对照组)。采集静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测受试者血清sPD-1、IRF4、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素γ(IFN-γ)表达水平,采用Pearson法分析RA患者血清sPD-1、IRF4水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,OA组和RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与OA组比较,RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与RA缓解组比较,RA活动组血清sPD-1、IRF4水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);RA患者血清sPD-1水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平均呈正相关(P<0.05);RA患者血清IRF4水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平均呈正相关(P<0.05)。结论RA患者血清中sPD-1、IRF4表达水平均升高,且与疾病活动性及患者体内炎症因子水平异常有关,有潜力成为新的治疗靶点。

PTEN在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的:探讨第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)在人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达水平及意义。方法:利用组织块法获得并体外培养人RA-FLS、骨关节炎(OA)-FLS及关节创伤-FLS;采用实时荧光定量PCR法检测各组FLS中PTEN mRNA表达水平的差异;采用Western blotting法检测各组FLS的PTEN蛋白表达水平以及Akt Thr308位点磷酸化水平的差异。结果:(1)RA-FLS中的PTEN mRNA表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.01),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN mRNA表达水平无统计学差异。(2)RA-FLS的PTEN蛋白表达水平显著低于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.05),而OA-FLS与关节创伤-FLS之间的PTEN蛋白表达水平无统计学差异。(3)RA-FLS中的Akt蛋白Thr308位点磷酸化水平显著高于OA-FLS及关节创伤-FLS(P<0.01),且OA-FLS中该位点的磷酸化水平显著低于关节创伤-FLS(P<0.01)。(4)RA-FLS中的PTEN蛋白水平与Akt Thr308位点磷酸化水平呈显著负相关(P<0.01)。结论:RAFLS中PTEN基因呈低水平表达,可能与Akt Thr308位点磷酸化水平异常增高相关。

强直性脊柱炎合并过敏性紫癜3例并文献复习

强直性脊柱炎（ankyloing spondylitis,AS）是一种慢性炎症性疾病,以中轴关节受累为主,可伴发关节外表现,严重者可发生脊柱畸形和强直。AS最典型和常见的表现为炎性腰背痛,关节外症状可表现为反复的葡萄膜炎或虹膜炎,升主动脉根和主动脉瓣病变以及心传导系统功能异常,少见的有肾功能异常、间质性肺炎、下肢麻木、感觉异常及肌肉萎缩和淀粉样变。Ig A肾病可引起血尿[1]。