多成分含量测定结合抗氧化活性的化学计量学分析筛选五味子标准汤剂质量标志物的研究

目的探究五味子标准汤剂抗氧化活性的质量标志物。方法采用基于一测多评法(QAMS)的超高效液相色谱法(UPLC)结合化学计量学评价15批五味子标准汤剂的质量;采用DPPH法和ABTS法测定15批样品的抗氧化活性,并借助灰色关联度(GRA)和偏最小二乘回归法(PLSR)分析8种成分含量与抗氧化活性的关联。采用分子对接技术探讨候选质量标志物与抗氧化核心靶点的结合性,同时对单体的体外抗氧化活性进行实验验证。结果QAMS法与外标法(ESM)的含量结果差异不显著(P>0.05),并推测原儿茶酸、五味子醇乙、五味子酯乙、五味子乙素为五味子标准汤剂的质量差异成分。根据GRA和PLSR结果,上述4个质量差异成分可作为抗氧化能力的备选标志物。分子对接结果显示4个候选质量标志物与抗氧化相关靶点具有良好的亲和力。研究认为五味子标准汤剂的抗氧化作用可能是多种成分综合作用的结果,其中,单体成分验证结果显示原儿茶酸具有明显的抗氧化活性并呈现剂量依赖关系,最符合作为质量标志物的特征,因而可能作为五味子标准汤剂抗氧化的质量标志物。结论基于UPLC含量测定法和体外抗氧化实验,预测了五味子标准汤剂中的潜在抗氧化活性物质,也为五味子其它相关制剂的质量评价提供合理依据。

小承气汤饮片(水煎液、颗粒)的UPLC指纹图谱相关性研究

目的研究小承气汤饮片(水煎液、颗粒)的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱相关性。方法采用UPLC法建立15批小承气汤饮片(水煎液、颗粒)的指纹图谱,结合相似度评价、皮尔逊相关性分析、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对三者UPLC指纹图谱的相关性进行评价。结果15批小承气汤饮片(水煎液、颗粒)UPLC指纹图谱均确定了16个共有峰,并指认了14个峰;15批小承气汤饮片(水煎液、颗粒)的指纹图谱与相应对照指纹图谱的相似度均大于0.90,三者对照指纹图谱的相似度均大于0.88。皮尔逊相关性分析结果显示,有8个共有峰在小承气汤饮片(水煎液、颗粒)之间具有极显著正相关关系。CA表明小承气汤水煎液和颗粒性质更接近,PCA发现4个特征值均大于1的主成分,包含了原始数据88%的信息,OPLS-DA筛选出7个变量投影重要性值大于1的差异性标志物。结论小承气汤饮片(水煎液、颗粒)的主要化学成分组成具有一致性,可为小承气汤复方制剂的质量控制和临床使用提供数据支持。

菟丝子提取物UPLC指纹图谱建立及抗氧化谱效关系研究

目的 建立菟丝子提取物的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,分析其与抗氧化活性的谱效关系。方法 采用UPLC法测定11批菟丝子提取物的指纹图谱,以1,1-二苯基-2-苦基肼自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐法测定菟丝子体外抗氧化活性,结合正交偏最小二乘法(OPLS)以及灰色关联度法分析指纹图谱与抗氧化活性的关联度,筛选出对抗氧化活性贡献较大的关键物质。结果 菟丝子提取物相似度均在0.97以上,共有21个共有峰,通过与对照品对比,指认了10个峰,其中峰5为新绿原酸,峰8为绿原酸,峰9为隐绿原酸,峰10为咖啡酸,峰12为对香豆酸,峰15为金丝桃苷,峰16为异槲皮苷,峰17为紫云英苷,峰20为槲皮素,峰21为山奈素。灰色关联度以及OPLS结果表明,峰8、15、16、18与抗氧化活性呈现正相关,为主要药效成分。结论 菟丝子抗氧化活性是多组分联合效应的结果,通过指纹图谱与抗氧化谱效分析,可为后面菟丝子的进一步研究提供数据参考。

一测多评法同时测定蔓荆子配方颗粒中5种化学成分的含量

目的建立一测多评(QAMS)法同时测定蔓荆子配方颗粒中5种成分的含量。方法采用UPLC法,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为258 nm;进样量为1μL。以蔓荆子黄素为内参物,建立其与原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸和异荭草素的相对校正因子,并在不同色谱仪和色谱柱上考察各成分相对校正因子的稳定性和耐用性。结果原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、异荭草素、蔓荆子黄素浓度分别在0.4221~42.2064μg·mL^(-1),0.7958~79.5760μg·mL^(-1),0.5038~50.3840μg·mL^(-1),0.5464~54.6370μg·mL^(-1),0.5918~59.1766μg·mL^(-1)范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为101.41%,96.65%,101.12%,97.90%,99.64%,RSD均小于3.0%(n=9);相对校正因子分别为1.42,1.75,1.15,0.64。QAMS计算10批蔓荆子配方颗粒5种成分的含量与外标法(ESM)测定值间均无明显差异。结论建立的QAMS法简单可行、结果准确,可为提升蔓荆子配方颗粒质量控制方法提供参考。

响应面法结合熵权法优选麦门冬汤颗粒的干法制粒工艺

目的优选麦门冬汤颗粒的干法制粒工艺。方法以颗粒的一次成型率、吸湿率、溶化率和脆碎度为质量指标,通过熵权法确定各质量指标的权重系数,并计算综合评分。先用单因素试验筛选出最佳辅料种类及配比,再用Box-Behnken试验对干法制粒的压轮压力、送料频率和压轮频率进行优化,并对优选的工艺参数进行验证。结果优选的最佳辅料及配比为浸膏粉∶乳糖=1∶1,最佳干法制粒参数为压轮压力15.6 MPa,送料频率20 r·min^(-1),压轮频率3 r·min^(-1)。验证试验的综合评分分别为0.931、0.906、0.912,RSD为1.4%。结论优选的麦门冬汤颗粒干法制粒工艺稳定可行,颗粒质量属性较好,可为麦门冬汤颗粒的工业化生产提供参考。

基于质量源于设计理念的麦门冬汤提取液喷雾干燥工艺研究

目的应用质量源于设计(QbD)理念,建立麦门冬汤提取液喷雾干燥工艺的设计空间并进行验证。方法将浸膏粉的得粉率和含水量作为关键质量属性(CQA),采用Plackeet-Burmann实验设计对进风温度、雾化压力、药液温度、进料速度和药液相对密度进行筛选,运用中心点复合设计(CCD)实验对筛出的关键工艺参数(CPP)进行优化,建立工艺设计空间,并选取5个实验点检验建立模型的预测能力。结果 Plackeet-Burmann实验设计确定了药液相对密度和进料速度为CPP;CCD实验方差分析结果显示构建的模型可较好描述CQA和CPP之间的关系(P<0.01),构建的CPP优化设计空间为药液相对密度1.04~1.05,进料速度28%~32%。结论基于QbD理念建立的麦门冬汤提取液喷雾干燥工艺设计空间,其可控性、稳定性较好,可为麦门冬汤固体制剂的工业化生产提供参考。

HPLC指纹图谱结合化学计量学评价不同规格野菊花药材质量

目的基于HPLC指纹图谱评价不同规格野菊花药材质量。方法按照野菊花药材直径大小,将野菊花分为a(直径0.1~0.3 cm)、b(直径0.3~0.5 cm)、c(直径0.5~1.0 cm)3种规格。建立基于HPLC的野菊花药材主要指标成分指纹图谱测定方法,结合相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和方差分析等化学计量学方法对不同规格野菊花药材的指纹图谱信息进行分析。结果不同规格野菊花药材的指纹图谱之间存在明显差异,各主要特征峰的"峰面积/取样量"随着药材直径的增大呈下降趋势;聚类分析(CA)可将不同规格的野菊花药材分为2类;主成分分析(PCA)发现2个特征值大于1的主成分包含了原始数据96%的信息;方差分析结果表明不同规格野菊花药材的各主要特征峰之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论野菊花药材的直径大小与化学成分间具有一定的相关性,本研究可为野菊花药材规格等级的划分及其质量控制提供参考。

N末端脑钠肽前体、降钙素原表达水平对心力衰竭合并肺炎患者近期预后的临床意义

目的:分析N末端脑钠肽前体(NT-pro-BNP)、降钙素原(PCT)表达水平对心力衰竭合并肺炎患者近期预后的临床意义。方法:回顾性收集心血管内科收治的64例心力衰竭合并肺炎患者的临床资料,分别根据患者心功能(Ⅱ级组17例,Ⅲ级组35例,Ⅳ级组12例)、预后(存活组41例,死亡组23例)和是否进行机械通气(非机械通气组40例,机械通气组24例)进行分组。比较不同心功能分级患者、不同预后患者血清NT-pro-BNP、PCT水平,采用多因素Logistic回归分析患者死亡的危险因素。结果:随着心功能分级的升高,心力衰竭合并肺炎患者血清NT-pro-BNP、PCT水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与入院当天比较,存活组入院第3天、第5天和出院/死亡当天血清NT-pro-BNP、PCT水平呈逐渐降低趋势,死亡组血清NT-pro-BNP、PCT水平呈逐渐升高趋势,且存活组血清NT-pro-BNP、PCT水平低于死亡组,差异有统计学意义(P<0.05)。机械通气组血清NT-pro-BNP、PCT水平高于非机械通气组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:心力衰竭合并肺炎患者中,NT-pro-BNP、PCT水平随着患者心功能分级的升高而升高,死亡、进行机械通气患者心功能分级和血清NT-pro-BNP、PCT水平高于存活患者,同时心功能分级高和血清NT-pro-BNP、PCT水平升高是导致老年心力衰竭患者死亡的危险因素,说明血清NT-pro-BNP、PCT水平与患者病情严重程度和预后明显相关。

变异系数法-AHP综合加权结合响应面法优选板蓝根配方颗粒提取工艺

目的:优选板蓝根配方颗粒的最佳提取工艺。方法:以煎煮时间、加水量、煎煮次数为考察因素,利用Box⁃Behnken响应面模型,设计三因素三水平的响应面试验,通过变异系数法结合层次分析法(AHP)对板蓝根出膏率、尿苷、腺苷、鸟苷和(R,S)⁃告依春的含量分别赋予权重,并以综合加权评分值为评价指标,考察3个因素对板蓝根提取效果的影响,优选最佳提取工艺,并进行工艺验证。结果:板蓝根配方颗粒的最佳提取工艺为加12倍量水,煎煮3次,每次40 min,验证试验的综合评分分别为0.984、0.971、0.963,各质量指标的RSD均小于5.0%。结论:优选的提取工艺稳定、简单、可行,可为板蓝根配方颗粒的制剂工艺研究提供参考。

基于外观特征量化结合内在质量指标的玄参药材综合质量评价

目的:结合玄参量化的外观特征和高效液相色谱(UPLC)特征图谱,建立玄参药材综合质量评价方法。方法:收集11批玄参药材,采用MatLab图像处理技术量化玄参的大小和颜色,采用UPLC法采集玄参的特征图谱,以玄参各外观特征量化值及特征图谱中各共有峰峰面积为指标,采用灰色关联度法和熵权TOPSIS法对各批次玄参进行综合质量评价。结果:建立玄参UPLC特征指图谱共标定11个特征峰,并对峰5(桃叶珊瑚苷)、峰6(哈巴苷)、峰7(毛蕊花糖苷)、峰10(哈巴俄苷)、峰11(肉桂酸)进行指认,各批次玄参与对照指纹图谱的相似度均大于0.90;灰色关联度法与熵权TOPSIS法分析结果表明,各批次玄参的综合质量评价排序结果基本一致,二者可以相互印证。结论:建立的综合质量评价方法能全面、客观地评价玄参药材质量,可为玄参质量评价与控制提供参考。

超高效液相色谱指纹图谱结合化学计量学优选掌叶大黄饮片炮制工艺

优选掌叶大黄饮片的炮制工艺。建立基于UPLC(超高效液相色谱)的掌叶大黄饮片主要指标成分指纹图谱测定方法,结合相似度评价、聚类分析、主成分分析和方差分析等化学计量学方法,对不同润制时间、不同干燥方式、不同烘干温度及时间掌叶大黄饮片的指纹图谱信息进行分析。不同润制时间掌叶大黄饮片的指纹图谱之间存在明显差异;聚类分析可将不同润制时间的掌叶大黄饮片分为2类;主成分分析发现两个特征值均大于1的主成分包含了原始数据94.9%的信息;方差分析结果表明干燥方式、烘干温度和时间对掌叶大黄饮片的主要成分含量无明显影响。优选的掌叶大黄饮片炮制工艺:润制36 h,切厚片,50~70 ℃下干燥8~12 h。本研究可为掌叶大黄饮片的规范化炮制生产提供依据。

一测多评法同时测定小承气汤颗粒中9种成分的含量

目的建立一测多评(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)法同时测定小承气汤颗粒中柚皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚的含量。方法采用HPLC,Waters Xbridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,检测波长为280 nm(柚皮苷、新橙皮苷)、254 nm(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、和厚朴酚、厚朴酚、大黄酚、大黄素甲醚);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;进样量为10μL。以新橙皮苷为内参物,计算该成分与其他8种成分的相对校正因子,并计算各成分含量。将QAMS计算结果与外标法实测结果进行对比,验证所建立方法的可行性。结果9种成分在各自规定的浓度范围内线性关系良好(r>0.999),平均加样回收率为87.06%~98.08%,RSD为1.21%~2.83%,QAMS法与外标法测定结果无显著差异。结论建立的方法准确可靠,QAMS法可用于小承气汤颗粒中9种成分含量的同时测定及质量控制。

不同部位平车前、车前及市售混用药材鉴别与质量评价

目的建立车前草药材的指纹图谱。方法采用超高效液相色谱法测定指纹图谱,对不同药用部位、不同来源药材的指纹图谱峰面积进行方差分析及独立样本t检验,采用SIMCA14.1进行主成分分析、聚类分析、偏最小二乘回归分析(PLS-DA)等化学模式识别分析,采用CRITIC法计算指标权重并结合灰色关联度综合评价车前草药材的质量。结果平车前全草、茎、叶、穗的指纹图谱各标定了24、16、23、22个共有峰,车前全草、根茎、叶、穗的指纹图谱各标定了22、10、16、22个共有峰,市售混用车前草药材指纹图谱共标定了23个共有峰。共指认10个色谱峰。方差分析结果显示,平车前与车前不同部位色谱峰峰面积存在差异。结合PLS-DA可知,平车前、车前与市售混用车前草样品分类中有16个重要的特征性指标,重要程度排名依次为峰3、峰8、峰28、峰12、峰14、峰7、峰5、峰17、峰6、峰19、峰23、峰11、峰22、峰27、峰9、峰16。CRITIC法结合灰色关联度的综合质量评价结果显示,21批平车前、车前及市售混用车前草药材中,车前药材的整体质量最优。结论市面上的车前草药材存在基原混用的情况,本研究建立的指纹图谱可用于不同来源车前草的鉴别及质量评价。

盐补骨脂炮制工艺优选与化学模式识别研究

目的优选盐补骨脂不同盐制工艺,比较不同盐制品的差异。方法建立补骨脂超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,采用综合评分法,以补骨脂素和异补骨脂素总含量、特征图谱峰面积为评价指标,优选"盐炙""盐蒸""盐喷""盐微波"4种不同炮制工艺;采用熵权TOPSIS法及聚类分析、主成分分析等化学模式识别方法比较不同补骨脂盐制品的质量差异。结果优选的盐补骨脂"盐炙"工艺为170℃炒制13 min,"盐蒸"工艺为蒸制1 h,"盐喷"工艺为110℃炒制13 min,"盐微波"工艺为微波加热105 s。熵权TOPSIS综合评价结果表明,不同补骨脂盐制品质量排序为盐炙品>青盐炙品>盐喷品>盐微波品>盐蒸品;聚类分析结果表明,不同补骨脂盐制品可聚为2类,其中盐炙品与青盐炙品聚为一类;盐喷品、盐蒸品和盐微波品聚为另一类;主成分分析结果表明,不同补骨脂盐制品可聚为4类,其中盐炙品、青盐炙品、盐喷品分别单独聚为一类,盐微波品与盐蒸品聚为同一类。结论不同盐制方法炮制的盐补骨脂化学成分存在差异,研究结果可为盐补骨脂的炮制工艺优化和不同盐制品识别提供参考。

一测多评法同时测定小蓟配方颗粒中5种成分

建立一测多评(QAMS)法同时测定小蓟配方颗粒中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁5种成分的含量。采用高效液相色谱法测定小蓟配方颗粒中5种成分,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,流量为0.8 mL/min,柱温为25℃,检测波长为340 nm,进样体积为10μL。5种成分的质量浓度与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均为0.999 9,加标平均回收率分别为94.22%、98.58%、100.98%、99.96%、95.23%,测定结果的相对标准偏差均小于1.00%(n=6)。以绿原酸为内参物,建立其与新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和芦丁的相对校正因子,相对校正因子分别为1.153、1.014、0.783、1.516。将一测多评法计算结果与外标法测定结果进行对比,两种方法对10批小蓟配方颗粒的测定结果均无明显差异,新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和芦丁测定结果的相对偏差均小于2%。建立的一测多评法测定结果准确可靠,可用于小蓟配方颗粒5种成分的同时测定及质量控制。