烟草脉扭病毒基因组部分序列的克隆和分析

烟草脉扭病毒(Tobacco vein distorting virus, TVDV)是引起烟草丛顶病的两种病毒之一。TVDV被归为黄症病毒科的暂定成员。应用黄症病毒科的通用引物和根据马铃薯卷叶病毒属成员核酸序列设计的简并引物,通过RT—PCR从烟草丛顶病烟株总RNA中扩增到了TVDV基因组的部分序列。序列分析获得了长度为1654 bp的序列,编码推测的TVDV复制酶基因的部分序列、外壳蛋白基因及运动蛋白基因的全部序列。根据这三个基因编码的氨基酸序列构建的分子进化树分析表明,TVDV为黄症病毒科的确定成员。根据其基因间隔区的长度特征和各ORF编码的氨基酸的分子进化分析,我们推测TVDV应当是马铃薯卷叶病毒属的一个新成员。这是TVDV的分子生物学特征的首次报道。

云南、福建、湖南烟区烟草花叶病主要病毒种类检测及黄瓜花叶病毒亚组鉴定

采用抗原直接包被和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)对采自云南、福建、湖南烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测,利用三抗体夹心ELISA对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亚组类型进行了鉴定。在云南采集的520个花叶病样品中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、CMV和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)总检出率分别为71.74%、55.01%和6.35%;在福建采集的150个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为94%、24.66%和8.00%;在湖南采集的74个花叶病样品中,TMV、CMV和PVY的总检出率分别为58.11%、51.35%和2.70%。部分样品为2种以上病毒复合侵染。云南、福建和湖南采集的64个CMV阳性样品中,属亚组Ⅰ的样品为57个,占89.1%;属亚组Ⅱ的样品为10个,占15.6%;其中3个样品为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的复合侵染。

氨基寡糖素在烟草上的应用

用氨基寡糖素 (OS 施特灵 )对烟草病毒病进行防治试验 ,结果表明 ,氨基寡糖素能有效促进烟株生长发育 ,对烟草病毒病有明显的防治作用 ,特别对黄瓜花叶病毒防效更佳 ,室内接种试验防效达到 34 92 % ;生化指标测定表明 ,喷施氨基寡糖素并接种病毒 ,能有效促进烟株体内脯氨酸的积累 ,降低烟株体内丙二醛的含量 ,调节烟株自身对外部胁迫的抗逆性。示范结果表明 ,氨基寡糖素对烟草病毒病有较理想的防治效果 ,其最终防效达 6 4 9% ,比植病灵提高了 1 7

生物炭对连作烤烟根际土壤酚酸类物质及微生物群落结构的影响

【目的】以连作植烟根际土壤为研究对象,探明生物炭对不同生育期烤烟根际土壤中与化感自毒密切相关的7种酚酸(阔马酸、对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、4-香豆酸、阿魏酸、肉桂酸)及土壤微生物群落结构的影响,为缓解化感自毒引起的烟草连作障碍提供理论依据。【方法】采用HPLC检测和高通量测序技术分析了不同施肥处理烤烟各生育时期根际土壤中酚酸物质含量和土壤微生物的变化情况。【结果】不同施肥处理后烤烟各生育时期根际土壤中均检测出6种酚酸类物质,除肉桂酸变化不明显外,对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、4-香豆酸、阿魏酸的含量在各生育期均表现为生物炭处理低于常规施肥处理;且施用生物炭后酚酸物质的总量在团棵期、旺长期和采烤期较常规施肥处理分别降低了1.86%、11.36%和40.44%。生物炭能在一定程度上提升烤烟根际土壤微生物群落的多样性与丰富度,旺长期生物炭处理细菌、真菌OTU丰度分别是常规施肥处理的1.23倍和1.07倍;与常规施肥处理相比,生物炭处理的细菌Shannon、ACE和Chao1指数旺长期分别提升了12.43%、23.0%和23.0%,采烤期分别提升了0.32%、2.40%和1.25%;真菌Shannon、ACE和Chao1指数旺长期分别提升了6.54%、6.67%和7.43%,采烤期分别提升了57.93%、8.60%和26.37%。【结论】生物炭对植烟土壤有一定的改良与提质效应,有利于创造健康的根际微生态环境,缓解化感自毒引起的连作障碍。

烟草疫霉的快速分子检测

根据烟草疫霉与其他疫霉菌ITS序列的差异设计了1对寡聚核苷酸引物,用于烟草疫霉的PCR检测。结果表明,在优化的反应体系与扩增条件下,该对引物表现出强特异性,只在烟草疫霉为模板的扩增体系中具有1条660 bp的条带。利用此特异性引物可稳定地从含有烟草疫霉的土壤及其发病组织中检测出病原菌。本实验提供并完善了一套快速检测烟草疫霉的方法和技术,特别对土传病害的准确诊断与快速检测在实践和理论上具有重要意义。

漂浮育苗剪叶传播烟草丛顶病风险研究

为了评估漂浮育苗剪叶传播烟草从顶病的风险,以剪刀剪病叶后再剪苗和剪刀蘸取病烟汁液后再剪苗2种剪叶方法研究了漂浮育苗剪叶对烟草丛顶病和烟草普通花叶病的传播效果。调查数据显示,2种剪叶方法均不能传播烟草丛顶病,但能传播烟草普通花叶病,其平均发病率分别为36.67%和63.33%。实验结果表明,漂浮育苗剪叶不易传播烟草丛顶病,但易于传播烟草普通花叶病。

烟草病虫药害智能识别基准数据集构建及三维注意力模型设计

为了实现烟草病虫药害图像智能识别,本文构建了可供机器学习研究的烟草病虫药害图像数据集,并提出了三维注意力加权模型。在结合烟草专家诊断知识的基础上,本文使用多种数据增强方法提高数据多样性,对烟草病虫药害图像数据集构建进行合理化、规范化设计。在使用深度迁移学习技术进行自动提取浅层特征的基础上,设计了三维注意力权重学习模块,进行高层特征计算,实现田间拍摄图像的精准识别,平均识别准确率达到了85.56%,明显优于其他现有方法。该模型不仅在烟草病虫药害识别方面表现出了较高精度,在复杂农业生产环境下也具有较好的鲁棒性,能够实现烟草病虫药害图像实时智能识别。

PCR方法检测转基因烟草的研究

研究通过利用生物信息学手段,对烟草转基因的启动子、终止子和不同的目的基因序列进行了研究,设计了多种检测转基因烟草的PCR引物,建立了比较完整的转基因烟草PCR检测方法。

TSNAs降解菌05-5402的筛选及其降解特性研究

为分离筛选能够降解TSNAs的微生物,探讨其降解特性,本研究采用替代底物平板稀释法分离和靶标底物点接法筛选相结合的分离筛选策略,筛选到能够利用NNK为唯一碳源和氮源而生长的细菌05-5402菌株,鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。白肋烟浸提液经05-5402菌株处理后,TSNAs含量降低了22.2%,其中NNK和NAT的含量分别降低了47.4%和55.7%。晾制的烟叶经05-5402菌株处理后,TSNAs降低17.3%,其中,NAB的含量降低了52.2%。发酵过程中的烟丝经05-5402菌株处理,TSNAs含量下降12.2%。05-5402菌株能实现烟草特有亚硝胺的高效定向降解,具有较大的应用潜力。

斯氏钝绥螨对马铃薯上腐食酪螨的捕食效应研究

采用捕食功能反应研究法,在室内人工气候箱内于16,20,24,28和32℃,RH(85±5)%条件下,研究了斯氏钝绥螨对马铃薯腐食酪螨的捕食效应。结果表明:斯氏钝绥螨对马铃薯腐食酪螨具有良好的捕食作用,其雌成螨对马铃薯腐食螨若螨具有较强的嗜食性,对马铃薯腐食螨雌成螨却未表现出明显的嗜食性;捕食功能模拟结果显示:斯氏钝绥螨对马铃薯腐食酪螨的捕食功能反应符合Holling II型;16~28℃条件下,斯氏钝绥螨对马铃薯腐食酪螨的捕食作用随温度的升高而增强,但当温度高于32℃时,其对腐食酪螨的捕食量逐渐降低;在相同温、湿度条件下,斯氏钝绥螨对马铃薯腐食螨若螨的捕食作用强于对雌成螨;斯氏钝绥螨在捕食腐食酪螨的过程中存在明显的竞争和密度干扰效应,表现为当腐食螨密度一定时,其日均捕食量随其自身密度的增加而降低。该研究结果将为利用斯氏钝绥螨防治马铃薯腐食酪螨提供理论依据。

一种烟草漂浮苗病害的鉴定

[目的]对一种在烟草漂浮苗上发现的病害的病原进行分离和鉴定,为该病的防治提供依据。[方法]将分离得到的菌株按照柯赫氏法则进行致病性测定,通过B iolog测定、16SrDNA序列分析和其他生理生化方法对病原菌进行鉴定。[结果]经柯赫氏法则试验证明分离得到的3-3菌株是引起该漂浮苗病害的病原菌,经B iolog鉴定、生理生化分析符合胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种的特征,16SrDNA序列分析表明3-3与胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种的菌株Kun28213相似程度最高,达99.9%。[结论]综合几种方法的鉴定结果,引起烟草漂浮苗病害的病原为胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种,该病害是在国内首次报道。根据英文的名称,将该病害命名为烟草黑脚病。

水体中烟草花叶病毒的浓缩与检测方法

为了检验水体中TMV的浓缩和检测方法的效果,在含和不含土壤颗粒的水中加入感染烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)病叶汁液,然后用低速离心法和带正电荷微孔滤膜吸附法浓缩,再用接种心叶烟、普通烟K326和间接酶联法检测浓缩物中TMV存在与否.含土壤颗粒的样品的离心法浓缩物用接种心叶烟检测,同一个稀释度离心浓缩比不处理对照的枯斑数明显要多.说明离心法有一定的浓缩效果.接种K326检测法、离心浓缩法、上清液和不处理(对照)的最低检出稀释度接近,说明离心浓缩方法的回收效果较差.用酶标板间接ELISA检测,离心处理的最低检出稀释度低于离心上清液和不处理对照.推测可能原因是土壤滤出液降低酶标板吸附TMV的效率.含和不含土壤颗粒的样品吸附法浓缩物用接种心叶烟检测,同一个稀释度吸附浓缩比不处理对照的枯斑数明显要多,吸附浓缩的最低检出稀释度比不处理对照高3个稀释度,说明吸附法有一定的浓缩效果.用接种K326检测,吸附浓缩的最低检出稀释度为1:2500倍(土壤滤出液+病叶汁液)和1:5000倍(自来水+病叶汁液).吸附滤出液检不出TMV.用酶标板间接ELISA检测,吸附处理比吸附滤出液的最低检出稀释度高5～6个梯度、比不处理对照高4个稀释度,同样说明吸附法有较好的浓缩效果和回收效果.吸附法可用于水体病毒浓缩.

几种新型烟草花叶病毒抑制剂的田间药效试验

为对室内研究筛选出的具有抗烟草花叶病毒活性的几种抑制剂进行田间药效验证,采用高压喷枪接种烟草花叶病毒后每隔一周喷施制剂的方法对几种制剂进行了田间试验.试验结果显示,含1%3-丙酮基-3-羟基羟吲哚二甲基亚砜溶液1 000倍液、含0.4%苦木素的2%3-丙酮基-3-羟基羟吲哚微乳液500倍液两种制剂在接种烟草花叶病毒4周后仍然保持44.04%和47.71%的相对防效,防治效果明显优于对照药剂.

烟草根结线虫化学药剂施用技术研究

[目的]探究化学杀线剂的使用技术。[方法]通过盆栽试验和田间试验比较了杀线剂的不同施用方法对烟草根结线虫病的防治效果。[结果]目前常用的化学杀线剂多以触杀型为主,充分与土壤混合是保证化学杀线剂防效的前提。塘施化学杀线剂虽然简单,但防效较差。[结论]研究结果为合理应用化学杀线剂提供了理论依据。

深翻晒垡防治根结线虫研究

[目的]探明深翻晒垡对防治根结线虫的影响。[方法]对烤烟移栽前2个月至移栽前7 d进行不同时间、不同深度的深翻晒垡7个处理,对其农艺性状、经济效益、根结线虫数量、根结线虫发病率、防效进行统计。[结果]移栽前2个月进行的20、40 cm的土壤深翻晒垡处理,从根结线虫发生程度、上等烟、均价、产量、产值综合考虑,表现较好;在防效方面,各处理间差异不大。[结论]深翻晒垡对防治根结线虫、增加经济效益有一定的促进作用。

性诱剂在楚雄烟区应用效果及效益分析

[目的]验证性诱剂防治斜纹夜蛾、小地老虎效果及对烟叶经济效益的影响。[方法]调查和分析了2013年楚雄州性诱剂和化学药剂防治后斜纹夜蛾、小地老虎的诱蛾量、百株虫量、为害株率、防治效果及成本投入和经济效益。[结果]烟株大田生育中后期斜纹夜蛾诱蛾量最多,小地老虎诱蛾量在苗期和大田生育前期较多。性诱区提前诱杀成虫,有效减少了斜纹夜蛾、小地老虎幼虫数量,幼虫危害时间分别减少了70和5 d,降低了为害株率,与对照相比防治效果分别为97.27%和61.93%,而化防区斜纹夜蛾防效仅为6.02%,小地老虎则为负防效（-42.58%）。性诱区与化防区相比,节约材料成本181.35元/hm2,减少0.5个工作日,减少杀虫剂使用2次,有效保护了天敌种群数量,性诱区百株蚜茧蜂、食蚜蝇、瓢虫数量分别是化防区的2.50、18.86、1.17倍,同时,性诱区降低了害虫为害机率,提高了烟叶外观质量,经济效益提高了7 752.75~8 156.25元/hm2。[结论]性诱剂防治烟草夜蛾能有效提高害虫防治效果,降低生产成本,减少烟农劳动量和劳动强度,减少化学农药的使用次数和使用量,降低烟叶农药残留,保护害虫天敌,具有良好的经济、社会、环境和生态效益。

烟草丛顶病伴随RNA临沧分离物基因组全长序列测定和结构分析

[目的]对烟草丛顶病伴随RNA(TBTDaRNA)临沧分离物基因组全长序列进行测定,并对其进行结构分析。[方法]应用RT-PCR方法扩增烟草丛顶病伴随RNA临沧分离物的基因组,并进行全长序列的测定,同时对烟草丛顶病伴随RNA临沧分离物和龙陵分离物的基因组进行比较分析。[结果]烟草丛顶病伴随RNA临沧分离物和龙陵分离物的基因组全长序列一致性为95.4%;ORF1a编码产物的氨基酸序列一致性为93.1%;ORF1b编码产物的氨基酸序列一致性为98.3%;3'端非编码区的核苷酸序列一致性为95.5%。[结论]该研究为研究TBTDaRNA的分子变异奠定了基础。

烟草丛顶病野生毒株的致病力分化

为了确定不同地理区域和不同烟草寄主来源烟草丛顶病病原的致病力分化,采集了12个烟草丛顶病野生毒株样品,经纯化后在温室分别用蚜虫传毒和摩擦接种方法测定了它们的致病性。2种方法接种后第28天调查结果发现来自西双版纳州勐海县的TBTV-7野生病毒株发病率分别为17%和16%,其余11个野生病毒株的发病率均在70%以上,表明不同地区烟草丛顶病野生毒株存在致病力分化的现象。

津巴布韦烟草丛顶病病原物的分子鉴定

【目的】鉴定津巴布韦烟草丛顶病病原复合体组成。【方法】采集津巴布韦烟草丛顶病样品,对其病原复合体进行分子鉴定。【结果】烟草丛顶病毒津巴布韦分离物(tobacco bushy top virus-Zimbabwe,TBTV-Zimbabwe)在基因组RNA核苷酸序列水平上与幽影病毒属(Umbravirus)其他成员的一致性为47.8%~94.6%,其中与埃塞俄比亚烟草丛顶病毒(Ethiopian tobacco bushy top virus,ETBTV)序列的一致性最高,为94.6%;与中国烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)序列的一致性仅为56.9%。分子系统进化分析表明:该病毒分离物与ETBTV同源性最高,为ETBTV的分离物,与TBTV为不同的病毒种。TBTV-Zimbabwe卫星RNA与ETBTV卫星RNA在基因组全长核苷酸序列水平上的一致性为93.9%,与GenBank数据库中除ETBTV卫星RNA之外的其他序列无同源性。研究还获得了津巴布韦烟草丛顶病病原复合体中马铃薯卷叶病毒(potato leafroll virus,PLRV)外壳蛋白基因部分核苷酸序列。【结论】津巴布韦烟草丛顶病病原复合体包含3种病毒组分,它们分别与埃塞俄比亚烟草丛顶病病原复合体的3种组分在病毒种的分类水平上一致。津巴布韦与中国烟草丛顶病病原物差异较大。

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ，大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ；病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ，种子中未检测到此ＲＮＡ；此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ；能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化，不具有类病毒结构特征，推测可能是病毒的基因组分；支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测，即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．