PK-15细胞ANXA8膜联蛋白原核表达及多克隆抗体制备

为了制备ANXA8膜联蛋白的多克隆抗体,本研究以PK-15细胞ANXA8基因为模板,通过RT-PCR扩增得到猪源ANXA8基因,并克隆到pGEX6p1载体。加入His-tag标签,成功构建了重组质粒pGEX6p1-ANXA8,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫SPF级昆明鼠,获得针对ANXA8蛋白的多克隆抗体。经过ELISA检测,抗体效价达1∶25600,经过Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,抗体可以与ANXA8蛋白产生特异性结合反应。本试验成功地应用大肠杆菌表达ANXA8蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得鼠源阳性血清,为ANXA8蛋白结构及功能的研究奠定基础。

水牛匈爱病毒结构蛋白VP1的截短表达及多克隆抗体的制备

为了制备水牛匈爱病毒(BufHuV)结构蛋白VP1截短基因的多克隆抗体,将病毒的VP1截短基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-32a-BufHuV-VP1,重组质粒转化至BL21感受态细胞(DE3)后诱导表达,VP1截短蛋白的分子质量约为31.5 ku,主要以包涵体的形式表达。以纯化好的重组蛋白免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体,通过Western-blot与IFA鉴定其特异性。结果显示,制备的小鼠多克隆抗体能与纯化的VP1重组截短蛋白和感染BufHuV的细胞表达的VP1特异性结合,表明多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性。水牛匈爱病毒VP1截短重组蛋白及其多克隆抗体的成功制备为研究BufHuV致病机制、VP1蛋白功能以及血清学检测方法的建立提供了材料基础。