金银花的生物学功能及其在动物生产中的应用研究进展

金银花(Honeysuckle)最早记载于东晋《肘后备急方》,在我国已有1 000多年的使用历史,是传统的药食同源植物,被广泛应用于医药、食品、化妆品、保健品及畜牧等领域。金银花富含黄酮类、有机酸类、挥发油类和环烯醚萜苷类等多种活性成分,具有抑菌抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、降低糖脂、调节免疫及保护肝脏等药理功能。金银花作为一种良好的新型饲料添加剂,其功能与饲用抗生素相似,可预防疾病、促进生长和保证肉品质,但目前关于金银花及其提取物在动物生产领域的应用研究相对较少。本文综述了金银花及其提取物的生物学功能以及其在动物生产中的应用,以期为金银花的后续研究及资源的合理开发利用提供参考依据。

金银花对鸽新城疫病毒感染肉鸽器官组织、血清免疫指标及抗氧化能力的影响

目的评估金银花对鸽新城疫病毒(NDV)感染肉鸽器官组织、血清免疫指标及抗氧化能力的影响,以期为金银花作为鸽新城疫的潜在预防和治疗药物提供科学依据。方法将80只35日龄的健康鸽(未免疫NDV疫苗)随机分为2个试验组和2个对照组,即金银花预防组(P)、金银花治疗组(H)、攻毒对照组(V)和空白对照组(N)。P组和H组分别于35日龄、42日龄添加1.2%金银花提取物饮水7 d,P组、H组和V组同时于42日龄肌内注射鸽NDV4416毒株(0.5 mL/只)。于攻毒后第7天每组随机剖杀3只鸽子,观察并记录脑、肝、脾、肺的剖检病变和组织病变。于攻毒后第3、7天每组随机采集3只鸽子的血液,用ELISA和生化法测定血清免疫指标(IgA、IgG、C3、IFN-γ)和抗氧化能力指标(SOD、T-AOC)含量。结果相较于V组,P组和H组鸽子脑、肝、脾、肺的剖检病变和组织病明显减少,血清特异性免疫指标(IgA、IgG)分泌水平大体升高,非特异性免疫指标(C3、IFN-γ)和抗氧化能力指标(SOD、T-AOC)分泌水平均显著上升(p<0.05)。结论使用1.2%金银花提取物作为抗病毒药物可有效缓解鸽NDV对肉鸽器官组织造成的损伤,增强机体免疫力,提高机体抗氧化能力,其中金银花预防组的效果优于治疗组。

广西某猪场7种主要病毒性疫病的抗体检测与分析

为了解广西某猪场猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪伪狂犬病(PR)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)、猪细小病毒病(PPI)及猪乙型脑炎(JE)7种主要病毒性疫病的抗体水平及感染情况,本研究采集155份商品猪和种猪的血清,利用阻断ELISA和间接ELISA方法进行抗体水平检测。结果显示:猪群猪瘟病毒(CSFV)、O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、猪伪狂犬病病毒gB蛋白(PRV-gB)、猪伪狂犬病病毒gE蛋白(PRV-gE)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)的平均抗体阳性率分别为90.3%、81.3%、96.8%、0%、52.3%、76.1%、84.5%、69.7%,表明该猪场CSFV、FMDV-O、PRV、PCV2、PPV免疫效果较好,达到了农业农村部规定的标准(70%);PRV-gE抗体阳性个体总数为0,表明无伪狂犬野毒感染。从各阶段猪群的抗体阳性率分析,商品猪存在PRRSV、PPV、JEV野毒感染,其中PPV野毒感染较为严重,提示该猪场应加强商品猪PRRSV、PPV和JEV的疫苗免疫。

猪塞内卡谷病毒VP1蛋白原核表达及多克隆抗体制备

【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化,构建质粒pUCK/VP1-opt,双酶切后连接至pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-VP1。将重组质粒pET-28a-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)分子伴侣感受态细胞,经IPTG诱导表达获得重组VP1蛋白。采用Western blotting方法分析VP1蛋白的反应原性,并以包涵体变性和复性方式纯化。随后将VP1蛋白免疫新西兰白兔,分离血清获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体的效价水平,以Protein A+G Agarose抗体纯化试剂盒纯化多克隆抗体。通过Western blotting和间接免疫荧光抗体试验(IFA)法验证多克隆抗体与SVV-CH-HB2016毒株反应的特异性。【结果】成功构建原核表达质粒pET-28a-VP1,在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导4 h条件下,重组VP1蛋白成功表达并主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果显示,重组VP1蛋白可与His-Tag Mouse mAb发生特异性结合,具有良好的反应原性;经变性和复性纯化的重组包涵体蛋白纯度和浓度均较高;采用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1∶32000;纯化后的抗体无明显杂带,纯度大于90.0%;Western blotting和IFA鉴定结果表明,多克隆抗体可特异性识别SVV-CH-HB2016毒株,重组VP1蛋白具有较好的免疫原性。【结论】通过原核表达SVV VP1蛋白获得的重组VP1蛋白具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体特异性良好,可作为诊断试剂盒及亚单位疫苗研制的候选抗原。

广西某猪场猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

为获得猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)并初探其病原特性,利用PCR方法检测广西贵港某猪场送检的死亡仔猪病料,随后将组织悬液接种PK-15细胞分离病毒,传到F4代后进行病毒效价测定及小鼠感染试验。结果表明,病料经PCR检测发现呈PRV核酸阳性,组织悬液接种PK-15细胞后,细胞出现固缩、变圆、脱落,形成小合胞体等细胞病变,测定F4代PRV的半数组织细胞感染量(TCID 50)为1×10^(-7).66/100μL,感染的昆明小鼠出现了奇痒、啃咬注射处、皮肤出血甚至死亡等。成功分离得到1株猪伪狂犬病病毒并初探了其病原特性,为今后广西地区猪伪狂犬病病毒的相关研究积累了材料。

浅谈鸽子饲养管理与疫病防控要点

鸽子在我国有着2000多年的养殖历史,我国是世界最大的肉鸽生产和消费大国,年出栏商品肉鸽数量达6.26亿羽,广西种鸽养殖规模也稳居全国第二位。虽然目前鸽子养殖仍属于小众养殖,但由于鸽子养殖成本低、周期短、见效快和效益高,近些年得到了飞速的发展,已经成为特种养殖的核心产业。随着鸽子养殖集约化程度的提高,鸽子的饲养管理和疾病的防控就显得尤为重要。本文通过总结鸽子养殖过程中饲养管理与疫病防控的要点,旨在减少养鸽生产中的经济损失,为科学、高效益养鸽提供参考。

犬猫巨食道症的诊断与治疗策略

巨食道症是由先天性或后天性因素引起的食道肌肉运动能力减弱或消失,导致食物阻塞食道而使食道异常扩张,引发颈段或胸段食道发生明显膨大等一系列综合征。巨食道症是犬猫常见的一种食道扩张病症,常发生于颈段食道和胸段食道两个部位,胸段食道的发病率明显高于颈段食道。该病在成年动物中多见,犬发病相对较为常见,猫则较为罕见。临床上常见频繁呕吐、吞咽障碍、食物反流、渐进性消瘦和口臭等症状,严重时多继发营养不良和吸入性肺炎,从而导致恶病质死亡。

广西黑山羊球虫病诊治

1流行特点羊球虫病是呈世界性分布的寄生虫病,其由艾美耳科艾美耳属的球虫寄生于羊肠道所引起。发病羊常出现食欲下降、下痢、消瘦、贫血及营养不良等症状,导致饲料转化率和生长速度降低,严重时病羊可发生死亡。任一品种、年龄的山羊、绵羊均对球虫易感,尤其以1~3月龄的羔羊发病最严重,发病率可达100%,病死率超过80%。羔羊的感染率和发病率随日龄的增长而逐渐降低,成年羊一般为带虫者,自身通常不发病,但存在散播病原的风险。

鸡粪堆肥中的细菌群落组成及多样性分析

【目的】了解鸡粪堆肥过程中不同发酵阶段优势细菌群落的变化情况,为改善鸡粪堆肥工艺及提高堆肥效率提供参考依据。【方法】对不同发酵时间鸡粪堆肥样品进行细菌高通量测序,分析其Alpha多样性和相对丰度,并对获得的有效序列在门、纲、目、科、属、种水平进行聚类,使用LEfSe(LDA effect size)分析不同发酵时间样品间的物种相对丰度差异,从而进一步分析鸡粪堆肥过程中的优势菌群落特征和变化情况。【结果】鸡粪堆肥在各发酵阶段的细菌群落多样性一直处于动态变化中,其中,堆肥上层和中层的细菌群落多样性均呈先上升再下降最后又略微上升的变化趋势,下层的细菌群落多样性表现与上层和中层相反。在门水平,鸡粪堆肥的厚壁菌门(Firmicutes)在各发酵阶段均为主要类群,变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)的相对丰度在高温阶段降低,首次在鸡粪堆肥中发现厌氧的盐厌氧菌门(Halanaerobiaeota)且其相对丰度随着堆肥时间的延长逐渐上升。在属水平,鸡粪堆肥起始阶段的优势菌属为乳杆菌属(Lactobacillus)及一些潜在的致病菌属如肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏-志贺菌属(Escherichia-Shigella)、韦荣氏球菌属(Veillonella)和库特氏菌属(Kurthia),其相对丰度均随着堆肥时间的延长逐渐下降,并被堆肥后期的优势菌群盐胞菌属(Halocella)和芽孢杆菌属(Bacillus)替代。LEfSe分析也表明,堆肥发酵能降低鸡粪中潜在的致病菌属相对丰度。【结论】鸡粪在堆肥过程中其细菌群落结构随着发酵时间的延长发生变化,厚壁菌门为鸡粪堆肥各阶段的主要类群,变形菌门和拟杆菌门主要存在温度较低的发酵阶段。首次发现盐厌氧菌门在堆肥过程中的相对丰度占比较高,并随着堆肥时间的延长逐渐升高。堆肥发酵能显著降低鸡粪潜在病原菌属的相对丰度。

一例布偶猫开放型子宫蓄脓的病例报告

子宫蓄脓是母猫常见的一种产科疾病,临床上多发生于未绝育、有生育史、老龄母猫。该病表现为大量脓液在子宫内蓄积,并伴随子宫内膜增生和细菌感染。对一例布偶猫开放型子宫蓄脓病例的临床诊断及治疗过程进行总结,以期为子宫蓄脓病例的诊治提供参考。

鸡粪饲料化利用及其在动物生产中的应用

随着我国养鸡业呈现规模化、集约化趋势,所产生的鸡粪也从少量分散转变为大量集中,鸡粪的处理和再利用问题日益被人们所重视。鸡粪饲料化是鸡粪处理利用的一种理想方式,既能解决环境污染问题,又能缓解蛋白质饲料紧缺现象。以鸡粪为研究对象,分析其营养特点及危害,从物理、生物和化学3个方面详细综述鸡粪饲料化利用技术,重点探讨了鸡粪饲料化后在特种养殖、生猪养殖、肉牛养殖、肉羊养殖及水产养殖等动物生产领域的应用,并提出了鸡粪饲料化利用存在的问题以及展望。

一例公猫膀胱结石的诊断与治疗

一只7月龄的雄性中华田园猫,表现烦躁不安、饮欲明显下降、频繁排尿、排尿困难等症状,经临床检查、血常规检查、X射线检查及B超检查,最终诊断为膀胱结石。通过对患猫进行膀胱切开手术取出结石、术后精心护理等得以顺利康复出院,为临床膀胱结石病例的诊断与治疗提供参考。

丁酸梭菌与富硒酵母对蛋鸡生产性能及粪便菌群结构的影响

【目的】探究混合饲喂丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和富硒酵母对蛋鸡生产性能和粪便菌群结构的影响,为提升蛋鸡生产性能和经济价值提供参考依据。【方法】以海兰褐蛋鸡为试验动物,对照组(CK)饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加丁酸梭菌类和富硒酵母(T1,添加1.0 g/kg丁酸梭菌和0.2 mg/kg富硒酵母;T2,添加2.0 g/kg丁酸梭菌和0.2 mg/kg富硒酵母;T3,添加3.0 g/kg丁酸梭菌和0.2 mg/kg富硒酵母)。预试期7 d,正试期28 d,期间测定蛋鸡的产蛋率、平均日采食量、平均蛋重、料蛋比和死淘率,试验结束时测定蛋形指数、蛋壳厚度、蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位和鸡蛋硒含量,并收集各组蛋鸡粪便,通过生物信息学方法分析其菌群结构。【结果】在生产性能方面,与CK相比,T1的产蛋率显著提高(P<0.05,下同),平均蛋重无显著差异(P>0.05,下同),平均日采食量和料蛋比显著降低,其他各组的平均日采食量和料蛋比略有下降;T1和T3的死淘率有所降低;各组的蛋白高度、哈氏单位和蛋形指数差异不显著;T1和T2的蛋壳厚度和鸡蛋硒含量均显著提高,且均以T1最高。在粪便菌群结构方面,与CK相比,T1和T2的ACE指数和Chao1指数升高,但差异不显著;T1的Shannon指数降低,Simpson指数升高,但差异均不显著。T1粪便的菌群丰富度和多样性均呈上升趋势;在门分类水平,CK的优势菌群为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),占比分别为74.02%、9.14%和7.03%,试验组的优势菌群均为厚壁菌门和变形菌门,其中,T1的变形菌门占比显著高于CK,厚壁菌门占比与CK差异不显著;在属分类水平,CK和试验组的优势菌群均为乳杆菌属(Lactobacillus),其占比间均无显著差异;T1和T2的梭形杆菌属(Lysinibacillus)占比均显著高于CK,其他属组成的菌属与CK均无显著差异。【结论】在基础日粮中添加丁酸梭菌和富硒酵母能提高蛋鸡的部分生产性能,且有利于促进蛋鸡肠道优良菌群结构形成,以添加1.0 g/kg丁酸梭菌和0.2 mg/kg富硒酵母的饲喂效果最佳。

猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定

【目的】纯化猪塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)SVV-CH-HB2016毒株,并制备其结构蛋白VP1、VP2和VP3的单克隆抗体。【方法】以蔗糖密度梯度离心法纯化的SVV-CH-HB2016病毒颗粒作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行细胞融合。通过间接免疫荧光试验(IFA)结合间接ELISA筛选阳性细胞株,制备能特异性分泌针对结构蛋白的杂交瘤细胞株。采用Western blotting和IFA方法分别检测单克隆抗体与重组表达蛋白及天然结构蛋白的反应性,并对单克隆抗体的病毒中和保护效果进行测定。利用空斑试验和实时荧光定量PCR方法探究中和性单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株吸附过程的影响,最后用抗体相加试验来分析14株单克隆抗体的抗原表位。【结果】在蔗糖密度梯度为5%~45%(W/V)时获得了纯度较好、浓度较高的SVV-CH-HB2016毒株结构蛋白,免疫小鼠血清抗体效价均达到了1∶12800,成功制备了17株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经验证14株单克隆抗体能与重组结构蛋白发生Western blotting反应,17株单克隆抗体能与病毒发生IFA作用;2G6、4A3和4C113株单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株感染的BHK-21细胞具有明显中和保护作用,也能有效抑制SVV-CH-HB2016毒株对293T细胞的吸附。经分析发现,除1F5与2E1、4B8与4F11外,其余10株单克隆抗体分别针对不同抗原表位。【结论】本研究初步建立了SVV的纯化方法,制备了17株特异性针对SVV-CH-HB2016毒株的单克隆抗体,为后期进一步开展SVV全病毒灭活疫苗的研发、ELISA检测方法的建立及保护性抗原表位的鉴定奠定了基础。

猪圆环病毒2型ORF2单克隆抗体的制备与鉴定

以杆状病毒表达系统表达PCV2ORF2重组蛋白为免疫原,旨在获得针对PCV2的特异性单克隆抗体。用Sf9细胞表达PCV2ORF2重组蛋白,通过层析柱和超滤管浓缩法纯化PCV2ORF2重组蛋白。将纯化的PCV2ORF2重组蛋白免疫6周龄的雌性Balb/c小鼠,3次免疫后,取免疫后小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA筛选,经过3次亚克隆获得4株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1H9、4C11、5B8和4F12株。IFA和Western blot试验说明,4株杂交瘤细胞分泌的抗体能与ORF2重组蛋白作用。特异性试验表明,4F12株单克隆抗体与猪圆环病毒2型(PCV2KQ22株)发生特异性反应,经抗体亚型鉴定1H9、4C11和5B8 3株亚型为IgG1/Kappa,4F12株为IgG2b/Kappa,1H9、4C11、5B8和4F12株小鼠腹水效价分别为105、104、106和105。表明获得了与PCV2特异性作用的单克隆抗体。

VA5免疫增强剂对鸽新城疫病毒灭活疫苗的增效作用研究

试验旨在探究VA5免疫增强剂对鸽新城疫病毒(NDV)灭活疫苗(ND4416株)的免疫增效作用。选取160只健康鸽随机分为4组:ND4416株灭活疫苗组(NDV组)、ND4416株灭活疫苗与免疫增强剂(VA5)混合组(NDV+VA5组)、La Sota灭活疫苗组(La Sota组)及生理盐水空白对照组(C组),进行免疫效力及免疫持续期试验。采用血凝抑制试验检测各组鸽免疫后不同时间点的血清抗体效价,结果显示,VA5免疫增强剂能够显著提高鸽NDV灭活疫苗血清抗体水平(P<0.05)。脾脏淋巴细胞转化试验结果显示,VA5能够有效刺激免疫鸽的淋巴细胞转化。在免疫后第30、90、180天,各组鸽子采用ND4416株进行攻毒试验,结果显示,NDV+VA5组在3个时间点的攻毒保护率均为100%,均高于La Sota组。免疫持续期试验结果显示,NDV+VA5组血清抗体水平在免疫后第21天达峰值11.20log2,第180天仍能达到7.50log2,攻毒保护率达100%,表明VA5免疫增强剂可延长鸽新城疫疫苗的免疫效力持续期至180 d。攻毒后体外排毒检测结果表明,VA5免疫增强剂能够缩短攻毒后鸽的体外排毒周期,减少体外排毒。综上,VA5免疫增强剂能够显著提高鸽NDV灭活疫苗的免疫效果,为研制效果更好的鸽NDV疫苗提供了基础依据,同时也为免疫增强剂的应用增加了试验数据。

复合益生菌对清远麻羽雏鸡生长性能、血清免疫指标及肠道菌群的影响

为了研究在日粮中添加益生菌对清远麻羽雏鸡生长性能的影响,试验将160只1日龄清远麻羽雏鸡随机分为4组,分别为对照组(饲喂基础日粮)、抗生素组(基础日粮+氟苯尼考200 mg/kg)及益生菌Ⅰ组(基础日粮+益生菌Ⅰ750 mg/kg,益生菌Ⅰ含有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌,活菌数≥2×10^(9) cfu/g)和益生菌Ⅱ组(基础日粮+益生菌Ⅱ500 mg/kg,益生菌Ⅱ含有乳酸片球菌和乳酸杆菌,活菌数≥3×10^(9) cfu/g),每组设置4个重复。试验期为42 d,于21日龄和42日龄时称重检测清远麻羽雏鸡的生长性能,于42日龄时采血检测血清免疫指标,采集盲肠内容物检测其微生物多样性。结果表明:与对照组相比,在42日龄时,益生菌Ⅰ组、益生菌Ⅱ组和抗生素组清远麻羽雏鸡的平均日增重分别提高了4.78%、6.79%和5.41%,均差异不显著(P>0.05);益生菌Ⅰ组和益生菌Ⅱ组料重比分别降低了5.51%、5.15%(P<0.05),抗生素组降低2.57%(P>0.05)。益生菌Ⅰ组白细胞介素-4(IL-4)含量较对照组提高24.03%(P<0.05),较抗生素组提高18.93%(P>0.05);γ干扰素(IFN-γ)含量较对照组降低16.20%(P>0.05),较抗生素组降低22.82%(P<0.05)。益生菌Ⅱ组IL-4含量较对照组和抗生素组分别提高10.14%和5.61%,差异不显著(P>0.05);IFN-γ含量较对照组降低13.34%(P>0.05),较抗生素组降低20.19%(P<0.05)。抗生素组清远麻羽雏鸡肠道菌群OUTs数、Shannon指数和Chao1指数低于益生菌组和对照组。益生菌Ⅰ组和益生菌Ⅱ组的厚壁菌门相对丰度较对照组分别提高24.92%和55.12%,差异显著(P<0.05)。益生菌Ⅰ组梭杆菌门相对丰度较对照组降低15.51%,差异不显著(P>0.05);益生菌Ⅱ组较对照组降低24.40%,差异显著(P<0.05)。益生菌Ⅱ组变形菌门相对丰度较对照组降低41.69%,差异显著(P<0.05)。抗生素组的副拟杆菌属相对丰度分别较对照组、益生菌Ⅱ组和益生菌Ⅰ组提高64.70%、19.63%和73.43%,差异显著(P<0.05)。说明益生菌可提升清远麻羽雏鸡的生长性能、免疫性能,且能丰富雏鸡盲肠菌群多样性。

塞内卡病毒Taqman实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据对GenBank中2015-2017年登录的18株国内塞内卡病毒(SVV)基因组序列比对分析结果,设计合成1对针对SVV 5’UTR区域的特异性引物和Taqman探针,通过优化荧光定量PCR反应条件,建立一种定量检测SVV的Taqman实时荧光定量PCR检测方法。该方法定量检测范围在10~109 copies/μL,检测下限为10copies/μL,比常规PCR检测灵敏度高约1000倍,同时检测口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、猪水疱疹病毒(VSV)、圆环病毒(PCV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)均为阴性,特异性良好;对50份疑似病料同时进行荧光定量PCR检测和常规PCR检测,结果显示荧光定量PCR阳性检测率(38%)高于常规PCR阳性检测率(25%),证实本试验建立的SVV Taqman实时荧光定量PCR检测方法可实现对SVV的临床诊断和定量分析。