SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

目的探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组:(1)Control组,以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组,转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-SHP2组,转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示,与Control组LX-2细胞凋亡率(3.08±0.73)%、(9.44±0.80)%及Ad-GFP组(3.25±0.85)%、(8.89±1.98)%比较,Ad-SHP2组(1.52±0.26)%、(2.44±0.93)%降低(P<0.05);Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组LX-2细胞的Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);Ad-SHP2组LX-2细胞的Bax蛋白相对表达量(1.55±0.21)低于Control组(1.99±0.15)及Ad-GFP组(2.00±0.16)(P<0.05);而Bcl-2蛋白相对表达量(2.13±0.25)则高于Control组(1.71±0.15)及Ad-GFP组(1.52±0.14)(P<0.05);但Ad-GFP组与Control组Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SHP2过表达通过升高Bcl-2/Bax抑制体外人肝星状细胞LX-2凋亡。

SHP2表达变化对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织中Akt表达的影响

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达及低表达对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)的影响。方法选取160只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、AdGFP组、Ad-SHP2组和Ad-shRNA/SHP2组,每组32只。采用腹腔注射CCl4法构建大鼠肝纤维化模型,经大鼠尾静脉分别将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP并携带靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP2注入大鼠体内。各组分别于造模第2、4、6、8周随机选取8只大鼠,留取肝组织标本。采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt的mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平,采用H-E染色法观察各组大鼠肝组织的病理变化,采用Masson三色染色法观察各组大鼠肝组织的胶原沉积情况。结果 靶向SHP2的shRNA及外源性野生型SHP2基因成功导入肝纤维化大鼠体内,并使大鼠肝组织中SHP2呈低表达或过表达。与模型组及Ad-GFP组比较,Ad-SHP2组大鼠的肝纤维化程度加重,而Ad-shRNA/SHP2组大鼠的肝纤维化程度则减轻。在同一造模时间点(第2、4、6、8周)对各组大鼠肝组织中Akt的m RNA和蛋白表达水平,以及p-Akt蛋白表达水平进行比较,结果显示Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组均显著高于对照组(P均<0.05),而各时间点的Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组的Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织中p-Akt表达水平相比较,AdshRNA/SHP2组在各时间点均显著降低(P均<0.05),Ad-SHP2组在各时间点均显著升高(P均<0.05),模型组与Ad-GFP组的p-Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 在CCl4诱导的大鼠肝纤维化病程中,肝组织中SHP2过表达可通过促进Akt磷酸化增强Akt的活性,而肝组织中SHP2低表达则可通过抑制Akt磷酸化减弱Akt的活性。

早期血液灌流对急性重症胰腺炎治疗的探索

目的通过检测急性重症胰腺炎(SAP)患者血清IL-18、TNF-α及IL-10的变化,探讨早期血液灌流(hemoperfusion)的治疗效果。方法 20例患者采取血液灌流治疗(血液灌流组),同期22例患者未行血液灌流治疗(常规治疗组)。测定和比较治疗后第1、3、7天血清白介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素10(IL-10)的水平。结果两组IL-18、TNF-α、IL-10比较有统计学差异(P<0.05);血液灌流组住院天数比常规治疗组明显缩短(P<0.05)。血液灌流组死亡2例,常规治疗组死亡5例。结论血液灌流能有效清除SAP患者的血清IL-18和TNF-α,促进IL-10生成,提高早期抢救成功率,缩短住院天数。

高脂血症性胰腺炎临床特点分析及治疗方法探讨

目的探讨高脂血症性胰腺炎的发病特点及诊治方法。方法分析该科自2005年7月～2011年7月收治的高脂血症性胰腺炎患者的临床资料。结果全组30例,年龄(33.7±13.4)岁,体质量指数男性(29.5±3.2),女性(23.4±5.6);反复发作10例;多伴有糖尿病、脂肪肝等疾病。其中轻型23例,重型7例,血三酰甘油平均值重型组较轻型组为高,经治疗后血TG降至5.65 mmol/L以下的平均时间及平均住院天数重型组较轻型组为长。其中有3例重型胰腺炎患者采取血液灌流治疗,其血TG降至5.65 mmol/L以下的时间及平均住院天数均明显缩短。结论 HAP有发病年龄轻、体型肥胖、可以反复发作的临床特点,且多有基础病。HAP在一般急性胰腺炎治疗基础上有其自身特点。

血液灌流对急性重型胰腺炎患者部分炎性因子的影响

目的:探讨早期血液灌流对急性重型胰腺炎(SAP)患者血清炎性因子的作用。方法:20例SAP患者在常规治疗基础上采取血液灌流治疗,比较治疗前、后血清白介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平及临床症状转归。并与同期未行血液灌流22例SAP患者比较。结果:血液灌流治疗后血清IL-18、TNF-α、CRP均比治疗前明显降低(均P<0.05);患者体温、心率、呼吸较治疗前降低(均P<0.05),住院天数比常规治疗组缩短(P<0.05)。结论:血液灌流能有效清除SAP患者血清IL-18、TNF-α,改善患者预后,提高早期抢救成功率。

以消化系统症状为主要表现的干燥综合征1例

患者女，39岁，农民。因“间断腹痛2个月，再发伴恶心、呕吐、腹泻3d”人院。患者于2个月前无明显诱因出现腹痛，为阵发性绞痛，伴有恶心、呕吐、腹泻，曾就诊于当地医院，诊断为“肠梗阻”，经治疗好转出院。

急性胰腺炎患者检测血清IL-18、TNF-α、IL-10的临床意义

①目的探讨血清IL-18、TNF-α、IL-10在急性胰腺炎(AP)患者中变化的临床意义。②方法健康对照组50例,轻症胰腺炎组(MAP)56例,重症胰腺炎(SAP)组患者22例。所有AP患者均在入院后第1、3、7天清晨空腹采血样测血清IL-10、TNF-α、IL-18浓度、并与对照组进进比较。③结果 SAP、MAP组IL-18、TNF-α比对照组明显升高(P<0.05);SAP组比MAP组升高,第1、3天有差别(P<0.05),第7天两组间无差别(P>0.05)。MAP组的IL-10在第1天比对照组明显升高(P<0.05),而SAP组的IL-10在第1天与对照组无差别(P>0.05),第7天比正常对照组、MAP组明显降低(P<0.05)。④结论 IL-18、IL-10、TNF-α参与急性胰腺炎的发病的过程,可作为早期评估胰腺炎症程度的指标,与病情的严重程度有关。

膈疝误诊为肠梗阻1例

患者男．66岁。主因间断性上腹痛伴恶心、呕吐、停止排便排气2d于2008年3月6日入院。患者于2d前进食少量黏食出现间断性上腹痛，餐后加重，呈隐痛，无阵发性加重，无腰背部放射痛，伴恶心、呕吐2次，呕吐物为胃内容物，无咖啡样物，无胆汁样物，呕吐后腹痛稍缓解。同时停止排便、排气。就诊于当地医院，查立位腹平片未见明显异常，为求进一步检查来我院门诊就诊。给予灌肠处理。灌肠后停止排便、排气症状无改善，

PTEN过表达抑制体外活化肝星状细胞Akt的磷酸化

目的:探讨过表达的野生型PTEN对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)Akt的影响。方法:体外培养活化HSC,以腺病毒为载体将野生型PTEN基因瞬时转染HSC;Western blot及实时荧光定量PCR检测HSC的PTEN、Akt表达;Western blot检测HSC的磷酸化Akt[p-Akt(Thr308)]表达。结果 :携带野生型PTEN基因的腺病毒成功转染HSC,使活化HSC的p-Akt(Thr308)表达下调(P<0.01),而对HSC的总Akt蛋白及mRNA表达没有影响(P>0.50)。结论:过表达的野生型PTEN通过抑制Akt的磷酸化,负性调节活化HSC的PI3K/Akt信号转导。

单人操作结肠镜在腹泻型肠易激综合征患者检查中的临床应用

结肠镜是目前检查大肠疾病最可靠、直接的方法，可为肠易激综合征（IBS）等功能性疾病提供诊断依据。目前结肠镜插入技术主要有两种：一种是双人结肠镜操作法，另一种为以“轴保持缩短法”为代表的单人结肠镜操作法。因单人操作法为单人独立操作，可增加双手操控协调性及准确性。

B型利钠肽和左室舒张功能障碍关系的研究

目的探讨B型利钠肽(BNP)浓度在无症状和有症状的左室舒张功能障碍患者中的变化及临床意义。方法对经超声心动图检测符合心脏单纯左室舒张功能障碍的60例心血管病患者根据临床症状分为无症状左室舒张功能障碍组(无症状组)和有症状左室舒张功能障碍组 (有症状组)。采用固相免疫放射分析法检测血浆BNP浓度,并与健康查体者20例(正常对照组) 进行对比分析。结果正常对照组、无症状左室舒张功能障碍组、有症状左室舒张功能障碍患者组血浆BNP浓度依次递增,差异有统计学意义(P<0．01)。结论血浆BNP浓度升高可反映左室舒张功能障碍及其严重程度。

高血压病患者血浆脑钠素与左室舒张功能的关系

目的:探讨高血压病患者血浆脑钠素(BNP)水平变化及其意义。方法:选择高血压病患者31例(患者组)及健康查体者20例(正常对照组),采用固相免疫放射分析法检测血浆BNP浓度。超声多普勒结合组织多普勒显像(TD I)测定左室结构、左室舒张功能及左室舒张末压(E/Em)。结果:①与正常对照组相比,高血压病患者组BNP浓度升高,左房内径(LA)增大、室间隔(IVS)和左室后壁(LVPW)增厚,有显著差异(P<0.01);但左室内径和左室射血分数(EF)无明显差异(P>0.05)。②患者组A峰升高、E/A比值和Em降低、E/Em侧升高,有显著差异(P<0.01)。结论:高血压病患者BNP浓度明显升高,检测BNP水平将有助于了解高血压病患者心脏结构和功能的改变。

PTEN过表达及突变对活化肝星状细胞黏着斑激酶信号转导的影响研究

目的探讨过表达的野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)及其突变体G129E(仅保留蛋白磷酸酶活性而丧失脂质磷酸酶活性)对活化肝星状细胞(HSC)黏着斑激酶(FAK)信号转导的影响。方法 2014年12月—2015年6月,利用瞬时转染技术,以腺病毒为载体将野生型PTEN及其突变体G129E转染到体外培养的活化HSC;实验分为4组:对照组:腺病毒转染时以DMEM基础培养基代替腺病毒;Ad-GFP组:转染表达绿色荧光蛋白(GFP)的载体空病毒Ad-GFP;Ad-PTEN组:转染携带野生型PTEN并表达GFP的重组腺病毒Ad-PTEN;Ad-G129E组:转染携带G129E并表达GFP的重组腺病毒Ad-G129E。应用Western blotting法检测活化HSC中PTEN、FAK、磷酸化FAK〔p-FAK(Tyr397)〕表达,实时荧光定量PCR法检测活化HSC中PTEN、FAK mRNA表达。结果腺病毒转染活化HSC 48 h,4组活化HSC中PTEN及其mRNA表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中Ad-PTEN组和Ad-G129E组活化HSC中PTEN及其mRNA表达高于对照组和Ad-GFP组(P<0.05);对照组与Ad-GFP组、Ad-PTEN组与Ad-G129E组活化HSC中PTEN及其mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组活化HSC中FAK及其mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中Ad-PTEN组和Ad-G129E组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达低于对照组和Ad-GFP组(P<0.05);对照组与Ad-GFP组、Ad-PTEN组与Ad-G129E组活化HSC中p-FAK(Tyr397)表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达的野生型PTEN及其突变体G129E均可通过抑制活化HSC的FAK磷酸化负性调控体外活化HSC的FAK信号转导。

蛛网膜下腔出血并发急性胰腺炎3例

蛛网膜下腔出血及急性胰腺炎均是临床急症，但在临床并发较少见。将2001年7月至2012年6月遇到的3例两种疾病并发的病例报告如下。1临床资料患者女，54岁。因头痛、恶心、呕吐2h，意识不清1h入院。患者于2h前无明显诱因出现剧烈头痛，恶心、呕吐，1h前出现意识不清急诊入院。既往有高血压病史5年，血压最高200／120mmHg，未规律服药。2型糖尿病病史8年，口服“中药”（具体不详），未监测血糖。否认胆石症病史，无烟酒嗜好。

肿瘤抑制基因PTEN对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的影响

目的探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达变化对体外活化肝星状细胞(HSC)纽蛋白(vinculin)的影响。方法分别将含有野生型PTEN基因及含有靶向PTEN的RNA干扰序列短发夹RNA(shRNA)的重组腺病毒转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,构建体外活化大鼠肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型;应用免疫荧光法并结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测活化HSC的vinculin分布及表达。实验分组:(1)Control组:以无血清无抗生素的DMEM培养液代替腺病毒液转染体外活化HSC;(2)Ad-GFP组:以仅带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的载体空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC;(3)Ad-PTEN组:以带有GFP基因并携带野生型PTEN基因的重组腺病毒Ad-PTEN转染体外活化HSC;(4)Ad-shRNA/PTEN组:以带有GFP基因并携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC。结果外源性野生型PTEN基因及靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,并成功构建体外活化肝星状细胞PTEN过表达及低表达模型。HSC的vinculin蛋白主要表达于胞浆,4组HSC的vinculin亚细胞分布未发生明显变化。Ad-PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(251.78±12.68)明显低于Control组(381.13±9.12)及Ad-GFP组(383.87±12.15),P<0.05;而Ad-shRNA/PTEN组HSC的vinculin蛋白荧光强度(770.77±20.12)显著高于Control组及Ad-GFP组(P<0.05);但Control组与Ad-GFP组之间HSC的vinculin蛋白荧光强度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PTEN表达变化对体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的亚细胞分布无明显影响,但PTEN过表达可下调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达,而PTEN低表达则可上调体外活化肝星状细胞骨架蛋白vinculin的表达。

野生型PTEN过表达对体外活化大鼠肝星状细胞ERK信号转导的影响

目的探讨野生型第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)过表达对体外活化大鼠肝星状细胞(HSC)的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导的影响。方法利用瞬时转染技术,以腺病毒为载体,将野生型PTEN基因转染体外培养的活化大鼠HSC;采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测HSC的PTEN、ERK1蛋白及mRNA表达;并应用Western blot技术检测HSC的磷酸化ERK(p-ERK)表达。结果外源性野生型PTEN基因在活化HSC大量表达,并显著下调HSC的p-ERK表达(P<0.05),而对HSC的ERK1蛋白及mRNA表达均无影响(P>0.50)。结论野生型PTEN过表达通过抑制ERK的磷酸化负性调控体外活化大鼠HSC的ERK信号转导。

大鼠纤维化肝组织中SHP1表达与肝星状细胞活化及增殖的关系

目的:探讨大鼠肝纤维化病理过程中肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP1)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法:随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法建立大鼠肝纤维化模型,Masson三色染色及HE染色检测大鼠肝脏组织的病理组织学变化,SHP1与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-SMA及SHP1表达,并分别对大鼠肝组织的SHP1表达及大鼠肝组织中活化HSC的SHP1表达与大鼠肝组织的α-SMA表达进行Pearson’s相关性分析。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,随着造模时间延长,大鼠肝纤维化逐渐加重。与对照组大鼠肝组织的SHP1阳性表达平均光密度值(MOD)(0.08±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP1阳性表达MOD(0.11±0.01、0.14±0.01、0.16±0.01、0.19±0.01)显著增加(P<0.05),并逐渐升高(P<0.05)。与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达MOD(0.04±0.01)比较,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达MOD(0.06±0.01、0.09±0.01、0.12±0.01、0.16±0.02)明显增加(P<0.05),并逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。SHP1与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模2周、4周、6周、8周大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比(26.49%±3.44%、37.14%±4.57%、44.90%±2.94%、58.09%±5.33%)逐渐升高(P<0.05)。上述大鼠纤维化肝组织的SHP1表达及大鼠纤维化肝组织中表达SHP1的活化HSC占总的活化HSC的百分比均与大鼠纤维化肝组织的α-SMA表达呈显著正相关(r值为0.926,0.984,P<0.05)。结论:在大鼠肝纤维病理过程中,肝组织及在体HSC的SHP1表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。