中国三个地区幽门螺杆菌CagA羧基端多态性分析

目的分析我国不同地区幽门螺杆菌(H.pylori)的CagA羧基端可变区特征,比较CagA可变区序列差异。方法选取分离自西安、浙江、云南地区的41株H.pylori,PCR扩增CagA羧基端可变区。测序后使用Primer Premier 5软件将核苷酸序列翻译为氨基酸序列,使用Vector NTI Suit6软件将所有菌株的CagA羧基端可变区氨基酸序列进行比较分析。结果41株菌的CagA氨基酸序列可分为东亚型和西方型两类:38株分离株为东亚型模式,其中有31株为典型东亚型,7株为变异东亚型;1株分离株为典型的西方型模式,2株表现为片段缺失的变异西方型。结论中国不同地区H.pylori的CagA蛋白序列以东亚型模式为主,占92.7%(38/41);但在至少2个地区的菌株中发现有2株和1株菌CagA羧基端可变区为西方型模式。

鼠疫耶尔森杆菌YPO0388蛋白的原核表达与鉴定

目的构建表达鼠疫耶尔森杆菌(Yersinia Pestis)的假想蛋白YPO0388的重组质粒,为鼠疫耶尔森杆菌的诊断方法的发展提供支持。方法用PCR方法扩增出ypo0388基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中转化到大肠杆菌(E.co-liBL21(DE3)),用IPTG诱导目的基因表达,用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,用WesternBlot鉴定其免疫原性,并纯化出目的蛋白。结果根据单、双酶切鉴定和DNA测序结果显示,目的基因ypo0388已成功连接到表达载体pET32a(+)上,SDS-PAGE结果显示表达产物rYPO0388相对分子质量约为69.71kDa。重组蛋白经Western blot鉴定,能被兔抗鼠疫菌EV株血清识别。结论成功克隆并构建了pET32a-ypo0388重组基因原核表达系统,所表达的重组蛋白rYPO0388具有较好的可溶性与抗原性,有可能做为研制新型鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的备选抗原。

细胞焦亡与慢性心力衰竭患者的相关性研究

目的:通过检测慢性心力衰竭患者血清中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)和半胱氨酸天冬酶-1(Caspase-1)以及白细胞介素-1β(IL-1β)水平,研究细胞焦亡在心力衰竭过程中的变化规律及其意义。方法:选择在本院确诊的慢性心力衰竭患者180例(慢性心力衰竭组)以及健康体检者40例(正常对照组),依据纽约心脏协会(NYHA)的分级标准,其中Ⅱ级48例、Ⅲ级60例、Ⅳ级72例。入院后完善N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)以及左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左心室射血分数(LVEF)的超声形态学检查。通过ELISA检测所有样本血清中NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表达水平,统计分析慢性心力衰竭患者不同分级NLRP3、Caspase-1、IL-1β和相关指标的联系,研究细胞焦亡与慢性心力衰竭发生发展中的关系。结果:慢性心力衰竭组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NT-proBNP和LVEDD、LVEDV高于正常对照组,LVEF低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NLRP3、Caspase-1、IL-1β、NT-proBNP和LVEDD、LVEDV水平随着患者心功能分级逐级增高,而LVEF水平随着患者心功能分级逐级降低(P<0.05)。Pearson分析显示:NLRP3、Caspase-1、IL-1β与NT-proBNP、LVEDD、LVEDV呈正相关(r=0.398、0.396、0.398、0.506、0.499、0.505、0.449、0.422、0.424,P<0.01),与LVEF呈负相关(r=-0.400、-0.555、-0.438,P<0.01)。NLRP3、Caspase-1和IL-1β诊断心力衰竭受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积分别为0.768、0.805和0.799,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:慢性心力衰竭患者血清中的NLRP3、Caspase-1和IL-1β水平高于正常对照组,而且随心功能的恶化逐渐升高。细胞焦亡对慢性心力衰竭的发生发展有一定的指导意义。

Cdc42及YAP检测对非瓣膜性心房颤动诊断的相关性研究

目的:探讨非瓣膜性心房颤动(房颤)病人血清细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)和转录辅助激活因子Yes相关蛋白(YAP)表达水平及临床意义。方法:选取81例非瓣膜性房颤病人(其中阵发性房颤38例,持续性房颤43例)为研究对象,40例同期住院非房颤病人为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清Cdc42及YAP表达水平。同时结合相关血清学指标,统计分析非瓣膜性房颤病人的Cdc42及YAP水平,探讨两者与非瓣膜性房颤诊断的关系。结果:同对照组相比,房颤病人CRP、国家标准化比值、D-二聚体、LAD水平增高,LVEF水平降低,差异有统计学意义(P<0.01),房颤病人中,持续性房颤病人较阵发性房颤病人LAD增大,LVEF降低,差异有统计学意义(P<0.01);同对照组相比,房颤病人血清Cdc42和YAP表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.01),持续性房颤病人血清Cdc42和YAP表达水平较阵发性房颤病人升高,差异有统计学意义(P<0.01和P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,房颤病人血清Cdc42和YAP水平与D-二聚体、LAD呈正相关(P<0.05~P<0.01),与左心室射血分数呈负相关(P<0.01);Cdc42及YAP二者联合诊断房颤的受试者工作特征曲线下面积较单独诊断提高(P<0.05)。D-二聚体、LAD、Cdc42及YAP表达增加、LVEF减小均为影响房颤的危险因素(P<0.05~P<0.01)。结论:房颤病人血清Cdc42及YAP异常表达,可能参与房颤心房结构重构的发生发展,可用作早期潜在辅助诊断房颤的指标。

房颤患者血清ST⁃2、TGF⁃β2水平检测及其与房颤结构重构的相关性分析

目的:观察房颤患者血清ST⁃2(suppression of tumorigenicity⁃2,ST⁃2)、血清转化生长因子⁃β2(transforming growth factor⁃β2,TGF⁃β2)的水平变化,以及分析二者与已知左房内径(left atrial diameter,LAD)的相关性,探讨其与心房颤动发展的关系。方法:选取2019年12月~2020年7月在蚌埠医学院第一附属医院心内科就诊的心房颤动(atrialfibrillation,AF)患者126例,依据相关指南分为阵发性心房颤动组(45例)、持续性房颤组(42例)、永久性房颤组(39例)。选取同时期体检的64例正常窦性心律者为健康对照组,采用酶联吸附免疫法测定血清中ST⁃2、TGF⁃β2的水平,并分别与已测得的LAD进行相关性分析。结果:与对照组相比,各房颤组ST⁃2水平明显增高(P<0.05),且血清中ST⁃2水平:永久性房颤组>持续性房颤组>阵发性房颤组。与对照组相比,各房颤组TGF⁃β2水平明显增高,且血清中TGF⁃β2水平:永久性房颤组>持续性房颤组>阵发性房颤组。相关分析显示在各房颤组中ST⁃2水平与LAD大小呈正相关(γ=0.784,P<0.001);各房颤组中TGF⁃β2与LAD呈正相关(γ=0.815,P<0.001);各房颤组中ST⁃2与TGF⁃β2水平呈正相关(γ=0.777,P<0.001)。结论:ST⁃2及TGF⁃β2在心房颤动发展过程中关系密切,可以作为预测心房颤动预后新的指标并为房颤诊疗提供新的思路和借鉴。ST⁃2及TGF⁃β2与心房颤动发展存在相关性,高水平ST⁃2及TGF⁃β2可能预示着心房颤动患者预后及治疗效果较差。

糖尿病大鼠心肌损伤中程序性坏死通路相关蛋白的表达

目的:探讨程序性坏死(Necroptosis)通路相关蛋白在糖尿病心肌中的表达及其可能机制。方法:在大鼠高糖高脂饮食喂养基础上腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg制备糖尿病模型大鼠,其中正常组(CON组,n=6)、高脂高糖组(HC组,n=6)和糖尿病组(DM组,n=6);10周后超声检测左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)及左心室射血分数(LVEF);处死大鼠后测量心质量(HW)、体质量(BW)、心体比(HW/BW);ELISA法检测血液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及丙二醇(MDA)水平;心尖部组织行Masson染色;RT-PCR及Western blotting检测心肌组织中RIPK1、RIPK3、MLKL的含量变化。结果:与CON组比,HC组HW、TNF-α、IL-6、MDA水平增加,RIPK1、RIPK3和MLKL的蛋白表达量增加(P <0. 05~P <0. 01),但MLKL的mRNA表达量无明显变化(P> 0. 05);与HC组比较,DM组HW/BW升高,LVEF下降,TNF-α、IL-6及MDA水平增加,RIPK1、RIPK3、MLKL的mRNA及蛋白含量增加(P <0. 01),Masson染色蓝染加重。结论:高糖状态可诱导心肌损伤,增加心肌纤维化及氧化水平,可能与上调Necroptosis通路有关。

二十二碳六烯酸介导MAPK途径抗房颤的作用及机制研究

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)通过影响P38 MAPK途径调控胶原表达发挥抗房颤作用可能的机制。方法:将80只对乙酰胆碱(66μg/mL)-氯化钙(50 mg/mL)混合液敏感的SD大鼠随机分为对照组(CON组)、对照DHA处理组(DHA组)、房颤组(AF组)和房颤DHA处理组(DHA+AF组),每组20只复制大鼠房颤模型。BL-420F描记心电图、连续双刺激法测定心房有效不应期(effective refractory period,ERP)、全细胞膜片钳技术记录心房肌细胞动作电位时程(action potential duration,APD)变化,酶免疫吸附法(ELISA)检测大鼠心房肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达情况,蛋白印迹检测P38、P-P38及MKP-1表达情况。结果:大鼠房颤持续时间随实验时间增加而逐渐延长,而DHA可以缩短房颤持续时间(P<0.05~P<0.01)。AF组大鼠心房ERP、APD明显缩短、DHA可明显延长大鼠心房ERP、APD(P<0.01);各组P38表达无明显变化,与CON组相比,AF组大鼠P-P38表达水平明显升高,MKP-1表达明显下降(P<0.01);与AF组相比,DHA+AF组P-P38表达水平明显降低,MKP-1表达明显增加(P<0.01)。ELISA结果证实,DHA可明显下调大鼠心房肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达(P<0.01)。结论:DHA可能通过调控P38 MAPK信号转导通路介导胶原表达发挥抗房颤作用。

钙离子激活钾通道与肺动脉高压的研究进展

肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种难治性疾病,所有肺动脉高压的发生都表现为肺血管阻力增加和肺血管重构,最终导致右心室衰竭乃至过早死亡。据报道,钙离子激活性钾离子通道(KCa)在介导缺氧性肺血管收缩反应(Hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)和心血管疾病中发挥重要作用。该文对近年来有关钙离子激活钾通道与肺动脉高压的研究进展作一总结。

避孕失败谁之过

意外怀孕带来新思考 口服避孕药避孕，简便易行。世界上现有五六千万妇女在采用此法避孕。然而，鲜为人知的是，服避孕药妇女如果服用了某些药物，仍可导致避孕失败。

不同施肥处理对香榧苗生长的影响

以两年生香榧苗为研究对象,比较不同施肥处理对香榧苗生长的影响。本文选择饼肥、复合肥2种肥料,对不同栽培方式的香榧实生苗进行施肥试验。结果表明:两种肥料处理对香榧苗高和侧枝的生长量有影响,差异性达到极显著水平,其中施饼肥的效果较好,且安全性较高;在苗床苗中,饼肥处理下苗高2 a净生长量比复合肥处理提高了25.27%;在容器苗中,饼肥处理下苗高2 a净生长量比复合肥处理提高了110.57%。

孩子成长 拒绝错爱

然而，有多少父母却把有毒的爱给了孩子？近年来，无论是青少年犯罪还是自杀事件，那一桩一桩血的事实，像针一般扎进我们的眼睛。孩子是没有错的，他们出生后是一张白纸，关键在于家长是精心描绘还是胡乱涂鸦……

特发性血小板减少性紫癜与幽门螺杆菌感染关系研究进展

特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombo-cytopenic purpura,ITP)是一种原因不明、因血小板破坏过多伴巨核细胞成熟障碍引起的获得性出血性疾病,发病与血小板特异性自身抗体相关,由于发病机制尚未明确,临床治疗针对性差、效果欠佳。已发现细菌感染是影响ITP发病的重要因素之一,近年来报道幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染与部分ITP发病有关,根除HP对HP阳性ITP患者改善临床症状及血象恢复、激素治疗都具有显著效果,但也出现二者无明显相关的报道。两者的关联机制尚不明确。

鼠疫耶尔森杆菌蛋白YPO1996的融合表达与鉴定

目的在比较蛋白质组结果的基础上选择并构建pET32a-ypo1996,表达鼠疫耶尔森杆菌(Yersinia pestis)特异的假想蛋白YPO1996重组蛋白(rYPO1996),为新鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的研究提供备选抗原。方法根据鼠疫菌CO92株全基因组序列设计引物,用PCR方法扩增目的基因YPO1996,将其定向插入表达载体pET32a(+)上,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导,使重组质粒在工程菌中稳定高效地表达带组氨酸标签的融合蛋白,并亲和纯化该目的蛋白。通过SDS-PAGE方法对表达的蛋白产物进行初步分析,并用Western blot分析其抗原性。结果单、双酶切鉴定及DNA测序显示,目的基因YPO1996成功连接到表达载体pET32a(+)上,SDS-PAGE显示表达产物分子质量单位约为53.11 ku,与预期值相符。重组蛋白经Western blot鉴定,能被兔抗免疫鼠疫菌EV株血清识别。结论成功构建了pET32a-ypo1996重组基因原核表达系统,表达的重组蛋白rYPO1996具有较好的可溶性及抗原性,可作为研发新型鼠疫耶尔森杆菌诊断试剂的备选抗原。

MutS同源蛋白2可介导Vγ9δ2T细胞对人宫颈癌细胞的杀伤

目的：探讨Vγ9δ2 T细胞识别的肿瘤相关新蛋白质配体人MutS同源蛋白2（hMSH2）在宫颈癌免疫中的作用与意义。方法通过特异性抗体阻断宫颈癌细胞表面异位表达的hMSH2分子，分析Vγ9δ2 T细胞杀伤功能变化及IFN-γ、TNF-α分泌情况；使用ELISA检测宫颈癌患者血清hMSH2水平；使用肿瘤组织芯片（ TMA）分析hMSH2在宫颈癌组织中的表达情况。结果 anti-hMSH2抗体封闭后，Vγ9δ2 T细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用显著降低，分泌IFN-γ减少，TNF-α分泌无明显变化；宫颈癌患者血清hMSH2水平略高于正常人；hMSH2在宫颈癌组织中存在异常的核浆分布。结论 hMSH2可促进Vγ9δ2 T细胞杀伤宫颈癌细胞及分泌IFN-γ，在宫颈癌固有免疫中具有重要意义。

hMSH2参与Vγ9δ2T细胞介导的胃癌细胞株杀伤作用

目的：探讨Vγ9δ2 T细胞识别的肿瘤相关内源性新蛋白质配体MutS同源蛋白2（hMSH2）在胃癌免疫中的作用与意义。方法通过特异性抗体阻断胃癌细胞膜异位表达的hMSH2分子，观察Vγ9δ2 T细胞杀伤功能变化及IFN-γ和TNF-α分泌情况；使用肿瘤组织芯片（ TMA）免疫组化染色分析hMSH2在胃癌中的亚细胞分布。结果 hMSH2在胃癌细胞中存在较高水平的膜异位表达；anti-hMSH2抗体封闭后， Vγ9δ2 T 细胞对胃癌细胞的杀伤效率显著降低， IFN-γ分泌减少， TNF-α分泌则增多；hMSH2在不同类型、不同分期的胃癌组织中均呈异常的细胞膜、细胞质分布，但细胞核表达并未明显减低或缺失，作为非癌对照的浅表性胃炎组织标本hMSH2表达亦明显增强。结论异位表达的hMSH2可作为内源性应激性配体促进Vγ9δ2 T细胞杀伤胃癌细胞及分泌IFN-γ，在胃癌固有免疫中具有重要意义。

NaN3处理对乌桕种子萌发及幼苗生长的影响

【目的】研究乌桕(Sapium sebiferum)种子萌发、幼苗生长及光合特性对不同浓度NaN3诱变的响应差异,为乌桕幼苗早期优良品质突变体筛选技术提供理论依据。【方法】以乌桕种子为研究对象,设置NaN3浓度为0、5、10、15、20、25、30、35 mmol/L 8个诱变处理,测定其种子萌发率、幼苗生长指标、生物量、叶片的基本光合参数、叶片的叶绿素(SPAD值)和花青素(ACI值)等,比较其生长及光合能力的变化情况。【结果】不同浓度的NaN3对乌桕种子萌发、幼苗生长及光合能力的影响有显著差异,NaN3处理对乌桕种子的萌发率均起抑制作用,并随着浓度的增加抑制作用增强,35 mmol/L时萌发率最低,抑制指数达到74.31%;20 mmol/L处理下幼苗苗高、生物量、根系的总长度、比表面积、根尖数等显著高于其他浓度处理,且对NaN3浓度的响应趋势基本一致,表现为"低促高抑"现象;幼苗叶片在C4处理下的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)、水分利用率(EWUE)均最大,显著高于其他处理,胞间二氧化碳浓度(Ci)最低;NaN3处理对叶片的SPAD值和ACI值影响随着浓度的增加均呈现出先增后减趋势,当NaN3处理浓度为20 mmol/L时,SPAD和ACI值均最高;NaN3不同浓度处理,对叶片SPAD值的影响明显大于ACI值。【结论】随着NaN3浓度的增加,乌桕种子的萌发率呈降低趋势,接近半致死浓度为20~30 mmol/L,幼苗生长及Pn、Gs、Tr、EWUE、SPAD值和ACI值均表现为先增后减趋势,Ci和根冠比为先减后增趋势,对NaN3处理均有不同程度的响应。综合分析,诱变处理乌桕种子的适宜条件为NaN3浓度20 mmol/L处理6 h。此研究为开展乌桕NaN3诱变育种提供技术支持。