草鱼nrf1基因的克隆与表达及其应激响应研究

为研究跨膜转录因子核因子E2相关因子1(Nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,nrf1)在动物机体抗氧化应激过程中的作用,通过同源克隆获得草鱼nrf1基因序列,其开放阅读框为1560 bp,编码519个氨基酸;系统进化树分析表明草鱼nrf1与团头鲂(Megalobrama amblycephala)进化关系较近。对nrf1进行组织表达分析,结果显示nrf1在肝脏中表达水平最高,其次是心脏和肠道(P<0.05)。昼夜节律分析显示,在9:00时nrf1表达水平最高且显著高于3:00、12:00、18:00、21:00和24:00(P<0.05)。经急性氨氮胁迫处理24h和48h时,发现草鱼nrf1基因在低氨氮(5 mg/L)组和高氨氮(20 mg/L)组中表达量相对于对照组均显著升高(P<0.05);且低氨氮组nrf1表达量在24h时显著低于高氨氮组(P<0.05),而在48h时显著高于高氨氮组(P<0.05)。此外,研究使用3种不同蛋白源(鱼粉、菜粕和豆粕)饲料对草鱼进行生长实验,发现在养殖后14d、28d和35d,菜粕和豆粕组nrf1表达水平显著高于鱼粉组(P<0.05),其中28d时豆粕组nrf1表达量显著高于菜粕组(P<0.05)。综上所述,草鱼nrf1基因表达具有组织特异性,且受到水体氨氮浓度和饲料蛋白源的调控,研究为揭示鱼类nrf1基因的分子特征及其抗氧化应激反应中的功能奠定了理论基础。

低鱼粉饲料中黑水虻幼虫粉替代鱼粉对合方鲫生长性能、消化能力、血浆生化指标及相关基因表达的影响

实验以合方鲫2号幼鱼(31.50±0.50)g为实验对象,研究黑水虻幼虫粉(HM)替代饲料鱼粉(0、20%、40%、60%和80%)对合方鲫生长性能、饲料利用、消化能力、血浆生化指标及相关基因表达的影响。实验设计5组等氮(30%)等能(18.50 MJ/kg)等脂(6%)饲料,每组3次重复,每个重复25尾鱼,养殖时间74d。结果表明:增重率和特定生长率随饲料HM含量的升高呈现先升高后降低趋势,且在替代水平为20%时最大;饲料系数呈先降低后升高的趋势,20%替代组显著小于60%和80%替代组(P<0.05)。肥满度和脏体比均呈现先升高后降低趋势,且均在40%替代组最大;80%替代组肝体比显著高于0、20%和60%替代组(P<0.05),但与40%替代组无显著差异。全鱼水分和灰分无显著变化;20%和60%替代组粗蛋白显著低于0组(P<0.05);粗脂肪呈先升高后降低的变化趋势,在20%替代组达到最大值。血浆葡萄糖、总胆固醇含量及谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性无显著差异;血氨含量呈上升趋势,80%替代组显著高于0组;20%替代组血浆总氨基酸含量显著高于其他各处理组(P<0.05);60%和80%替代组血浆丙二醛含量显著低于20%替代组(P<0.05)。20%替代组肠道中lat2、pept1和cdx2基因的表达量均高于其他各处理组,asct2基因表达水平则在替代水平为40%时最大;肝脏中tor和igf1基因表达量均在40%替代组最大,gh和ghr基因表达水平则均在替代水平为60%时最高。黑水虻幼虫粉替代饲料中鱼粉的0—40%不影响合方鲫的生长,且在20%替代水平时可获得最大生长速率。