迟缓爱德华氏菌荧光PCR方法的建立及初步应用

为构建一种灵敏、特异、准确的迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)检测方法,以gyr B为靶基因设计特异性引物和探针,经过优化反应体系和退火温度,建立了迟缓爱德华氏菌荧光PCR方法。随后对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评估,并应用该方法进行临床样品检测。结果显示:当引物和探针浓度分别为250和200 nmol/L,退火温度为55℃时,建立的迟缓爱德华氏菌荧光PCR方法荧光曲线标准,线性关系良好,最低检测限可达12.4 CFU/m L,且1 CFU/m L的细菌经35℃培养1 h后即可被检出;与猪链球菌2型以及无乳链球菌等14种常见水生动物病原体无交叉反应;重复性试验变异系数均小于0.95%;在100份临床样品中,检出阳性22份,与细菌分离鉴定结果一致。结果表明,本研究建立的迟缓爱德华氏菌荧光PCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,为迟缓爱德华氏菌病的临床诊断和研究提供了技术支撑。

三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒,该研究以荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibody virus neutralization FAVN)方法为参照,与3个ELISA试剂盒方法进行比对,进行一致性分析,并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示:三种不同的试剂盒中,试剂盒A与FAVN一致性最好,Kappa值为0.605,有较高的一致性,符合率为86%;试剂盒B次之,Kappa值为0.485,为中度一致,符合率为80%;试剂盒C与FAVN的一致性最差,Kappa值为0.310,符合率也最低,为74%。在敏感性和特异性方面,试剂盒A的敏感性最高,为92.1%,试剂盒B的特异性最高,为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。

罗非鱼湖病毒微滴式逆转录数字PCR检测方法的建立

建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的罗非鱼湖病毒反转录微滴式数字PCR (RT-ddPCR)检测方法,可为罗非鱼湖病毒的定量检测提供技术支持。参照NCBI中GenBank登陆的TiLV第3段全基因序列,选择hypothetical protein gene基因作为靶位基因设计合成了1对引物和探针,以TiLV-cDNA为模板,摸索、优化反应方法,建立与实时荧光RTPCR检测方法的线性关系,分析方法的敏感性、特异性、重复性,最后进行临床样品检测。结果显示,当引物、探针浓度分别为500、300 nmol·L^(-1)且退火温度为54.2℃时,建立的TiLV RT-ddPCR扩增反应效率最高、阴阳性微滴分布界限最明显、平均拷贝数较高;敏感性强,检测限低至2拷贝·μL^(-1),且在1~90 000拷贝·μL^(-1)范围内与实时荧光RT-PCR检测的线性关系较好(R2=0.995 8);检测变异系数低(4.86%);与其他5种常见的水生动物疫病病毒[鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus, KHV)、草鱼出血病毒(Grass carp reovirus, GCRV)、鲫造血器官坏死病毒(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2)、细胞肿大虹彩病毒(Red sea bream iridovirus, RSIV)]阳性样品未发生交叉反应;在临床样品的检测中,48份罗非鱼样品结果均为阴性,5份能力验证样品中3份为阳性,与能力验证满意结果一致。

如何做好动物疫病监测样品的采集

在动物疫病监测工作中,样品采集是进行动物疫病监测的重要环节,是开展动物疫病监测的前提工作,样品的质量和有效性直接影响到检测结果的准确性。因此,做好样品的采集工作,对动物疫病监测工作很重要。

兽医实验室仪器设备的期间核查

实验室的仪器设备是兽医实验室检测不可缺少的物质手段和保障基础，仪器设备的状态直接影响检测结果的准确性，甚至影响到兽医实验室的生物安全。

东莞2010～2016年猪弓形虫流行病学调查与分析

弓形虫病是一种由刚第弓形虫引起的,呈全球性分布的人畜共患寄生虫病,因宿主广泛,传染源复杂、人和动物感染率高,给人体健康和畜牧业发展带来严重威胁。弓形虫是专性细胞内寄生的原虫,多数宿主感染后无症状,但对一些免疫功能不健全和先天感染的人或动物来说可引起严重病变。母猪可通过胎盘感染胎儿,导致早产、流产、畸形胎等。随着东莞市社会经济的发展,养殖业以散养为主,养殖防疫和卫生条件无法规范进行,这势必会增加防控猪源弓形虫的难度。为了解东莞市猪弓形虫感染情况,预测今后我市弓形虫感染变化情况,为预防人畜共患病提供准确的数据,在2010~2016年期间,随机采集了东莞市32个镇(街)猪血清,使用正向间接血凝方法对猪弓形虫进行了流行病学调查。

种鸡H5+H7N9二价苗免疫效果的跟踪监测

为了解H5+H7N9二价苗对种鸡的免疫抗体水平,作者采用HI检测方法对种鸡进行跟踪监测,分别在免疫前及免疫后7、14、21、28、75d时采集血清样品进行抗体水平检测,并在21d时进行加强免疫。结果表明,在免疫前及一免后7、14、21d和二免后7d时,H5N1 Re-8株抗体水平均为100%,H7N9 H7-Re1株抗体水平在一免后14d已上升到合格水平,二免后7d已达到峰值逐步上升,并在二免后54d仍能保持100%。结果表明,H5+H7N9二价苗免疫效果理想,两种毒株间未出现互相影响。

东莞屠宰场存在环境污染问题及建议

东莞地处经济发达的珠江三角洲，外来务工人员众多，生猪消费量大（生猪屠宰量1万头／d），这些生猪集中屠宰加工过程中产生大量粪便、污水、有害气体、恶臭、胃内容物、病害肉及病死猪，若处理不好，会造成环境污染及疫病发生。近年来，因屠场污染引起的纠纷时有发生，已成为影响社会不稳定的因素。

不同试剂盒检测急性肝胰腺坏死病比对与分析

为加强水生动物防疫系统实验室能力建设,东莞市动物疫病预防控制中心参加了2020年由全国水产技术推广总站组织的对虾急性肝胰腺坏死病病原检测能力测试。按照中国水产科学研究院黄海水产研究所(以下简称黄海所)下发的《作业指导书》,对样品进行鉴定。检测结果为满意。另外,东莞市动物疫病预防控制中心以本次参测的样品为检测样品,选用3种商品化的对虾肝胰腺坏死荧光PCR检测试剂盒(A、B、C)进行试验分析,结果表明:A与C的检测结果与标准结果相同,B未检出阳性盲样。

东莞市羊小反刍兽疫抗体血清学调查

为了摸清东莞市羊小反刍兽疫免疫的情况,2016-2017年,在东莞市15个羊养殖场点和4个羊批发市场,共采集了418份羊血清,采用ELISA方法进行检测。结果为东莞市羊小反刍兽疫抗体阳性数281份,阳性率为74.34%,其中养殖场羊小反刍兽疫抗体阳性率为70.16%,批发市场羊小反刍兽疫抗体阳性率为62.50%。结果表明东莞市羊养殖场小反刍兽疫抗体基本上能达到国家规定大于70%的要求,但个别养殖场抗体水平偏低,存在小反刍兽疫病毒感染的风险;批发市场的羊抗体水平达不到国家规定的要求,羊的来源主要来自北方,经过长途运输的应激存在疫情发生的风险。

不同试剂盒检测锦鲤疱疹病毒效果比较

为提升实验室对锦鲤疱疹病毒病(koiherpesvirusdisease,KHVD)病原检测的能力,加强水生动物防疫系统实验室能力建设,本实验室参加了2020年由全国水产技术推广总站组织的锦鲤疱疹病毒病病原检测能力测试。按照中国检验检疫科学研究院下发的《能力测试作业指导书》,结合水产行业标准《鲤疱疹病毒检测方法第1部分:锦鲤疱疹病毒》(SC/T 7212.1-2011)对样品进行鉴定,检测结果为满意。另外,本实验室选用3种商品化的锦鲤疱疹病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒(A、B、C),以本次参测盲样为样品进行了试剂比对,试验结果表明:只有A与作业指导书要求的《SC/T 7212.1-2011》检测结果完全相同,B和C均未检测出阳性盲样。

应用ELISA方法检测非洲猪瘟抗体

为了验证ELISA方法检测非洲猪瘟抗体的可行性,在东莞市3个屠宰场采集92份猪血清,应用ELISA方法进行检测,结果为阴性和阳性质控均成立,非洲猪瘟抗体均为阴性。结果表明,ELISA方法操作简便,适合大规模样品非洲猪瘟抗体的监测。

荧光免疫层析法和ELISA方法检测O型口蹄疫抗体的比较

为了验证荧光免疫层析法检测O型口蹄疫抗体的可行性,在活牛交易市场采集60份牛血清,分别采用荧光免疫层析法和ELISA方法进行检测,结果为荧光免疫层析法检测抗体阳性率为61.67%,ELISA检测抗体阳性率为56.67%。比较两种方法的检测结果,有53份样品检测结果相符,符合率为88.33%。结果表明,应用荧光免疫层析法检测O型口蹄疫抗体可行,该方法操作简便、试验时间短适合基层大规模样品的监测,但仍可能存在假阴性或假阳性的问题。

鸡免疫疫苗后H7N9亚型流感病毒抗体消长规律研究

为了解鸡免疫重组禽流感(H5+H7)二价疫苗后,H7亚型禽流感病毒(Re-1株)抗体的消长规律,在一个蛋鸡场进行临床免疫试验。实验鸡群在181天龄开始首免重组禽流感(H5+H7)二价疫苗,分别在181d、188d、195d、202d、209d和256d采集血清进行H7N9亚型流感病毒抗体检测,结果为,鸡群在181d、188d、195d、202d、209d和256d的抗体滴度中位数分别为0.74log_2、3.30log_2、7.74log_2、5.37log_2、8.52log_2和8.93log_2。结果表明,鸡群免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗后,能够诱导产生H7N9亚型流感抗体,一免后14d,抗体滴度达到较高水平,随后抗体滴度开始下降,二次免疫后抗体滴度持续上升,在二免后54d还能维持较高的抗体滴度,抗体阳性达到88.89%。