CaMKⅣ信号缺失促进肌损伤炎症并影响肌再生

目的探究CaMKⅣ信号对肌损伤炎症反应及肌修复的调控作用。方法采用CRISPR/Cas9技术构建CaMKⅣ基因缺失(CaMKⅣ^(-/-))小鼠,PCR表型鉴定。心脏毒素(Cardiotoxin,CTX)诱导野生B6鼠及CaMKⅣ^(-/-)鼠急性肌损伤。HE染色观察损伤肌内炎症程度及肌修复过程。Dystrophy、F4/80免疫荧光双标,观察损伤肌内巨噬细胞渗出差异。F4/80、Ly-6C、CD206、Ki67染色及流式检测,分析损伤肌内M1、M2巨噬细胞的数量和比例,以及M1、M2巨噬细胞的局部增殖能力。结果成功构建并繁殖CaMKⅣ^(-/-)鼠。HE及荧光染色观察证实小鼠体内CaMKⅣ信号缺失可致肌内炎症加剧、肌修复延迟。CaMKⅣ^(-/-)小鼠损伤肌内再生的中央核肌纤维(Dystrophin^(+))数量低于WT鼠,巨噬细胞(F4/80^(+))数量显著高于WT鼠,以M1细胞(F4/80^(+)Ly-6C^(+))为主,M2细胞(F4/80^(+)CD206^(+))比例低于WT鼠。CaMKⅣ^(-/-)鼠损伤肌内增殖巨噬细胞(F4/80^(+)Ki67^(+))数量显著高于对照鼠,但以增殖的M1细胞为主(Ly6C^(+)Ki67^(+)),M2细胞(CD206^(+)Ki67^(+))的增殖与对照鼠无显著差异。结论CaMKⅣ信号缺失可致肌损伤炎症加剧、促进损伤肌内M1巨噬细胞的渗出及增殖,延误肌修复。

肌纤维内源TGF-β信号促进急性损伤骨骼肌内巨噬细胞胞葬

目的探究骨骼肌内源TGF-β信号对肌毒素诱导的小鼠急性损伤肌内巨噬细胞胞葬的影响。方法选择野生C57BL/6鼠(对照)、肌纤维条件性TGF-β受体Ⅱ敲除鼠(SM TGF-βr2^(-/-))。Cardiotoxin(CTX)胫骨前肌(TA)注射诱导小鼠急性肌损伤。比较两组动物损伤肌内巨噬细胞渗出及表型、凋亡细胞数目、巨噬细胞胞葬差异。紫外照射法体外诱导细胞凋亡。体外分化培养原代野生鼠(WT),或SM TGF-βr2^(-/-)-鼠成肌细胞(MPCs),与巨噬细胞、凋亡细胞共培养,对比分析巨噬细胞胞葬差异。结果较之WT鼠,SM TGF-βr2^(-/-)鼠损伤肌内炎性渗出显著,以单核/巨噬细胞为主。M1细胞比例增加(P<0.05),但M2细胞比例、胞葬作用显著下调(P<0.05)。体外炎性环境中,TGF-βr2^(-/-)-MPCs共培养体系中的巨噬细胞胞葬、M2巨噬细胞比例较之WT-MPCs均显著下调(P<0.05)。结论内源TGF-β信号活化肌纤维参与调控巨噬细胞表型,可促进损伤肌内巨噬细胞胞葬,有助于局部炎症舒缓,加快肌修复。

CDMNP-PEG-CD磁纳米颗粒诱导的骨骼肌反应性分析

目的探讨SOMNP、CDMNP及CDMNP-PEG-CD磁性纳米颗粒置入小鼠骨骼肌所诱发的免疫反应性。方法以磁性Fe;O;与SiO;复合制备SOMNP,将聚乙二醇(PEG)、环糊精(β-CD)分子链接SOMNP合成CDMNP,进一步添加聚假单胞烷(polypseudorotaxanes)合成CDMNP-PEG-CD磁性纳米颗粒。分别将3种纳米颗粒置入B6小鼠腓肠肌。组化染色、免疫荧光及FACS分析,分别评估不同置入时段SOMNP、CDMNP和CDMNP-PEG-CD纳米颗粒所诱发的肌毒性及肌内炎性渗出特征。结果SOMNP链接β-CD、PEG/β-CD及polypseudorotaxanes将限制纳米颗粒的肌内扩散,导致CDMNP和CDMNP-PEG-CD在肌内的滞留时间延长、材料邻近区肌细胞坏死、肌内单核/巨噬细胞聚集。较之CDMNP-PEG-CD,CDMNP纳米颗粒吸引更多T细胞进入肌组织。结论SOMNP、CDMNP及CDMNP-PEG-CD纳米颗粒均为潜在的体内免疫诱导物。polypseudorotaxanes修饰赋予CDMNP-PEGCD纳米颗粒较好的体内相容性。

实验小鼠脂肪组织石蜡切片制作方法的改进

脂肪组织是机体重要的能量仓库,广泛分布于全身的皮下及内脏各处[1],薄层疏松的结缔组织将其分割成许多小叶结构[2],小叶内有大量的脂肪细胞。近年来,人们越来越重视对脂肪组织的研究[3-5],而这些研究都离不开形态学方面(如HE、免疫组化染色)的观察。因此,制作优质的脂肪组织切片标本至关重要。由于脂肪组织结构特殊,含有大量的油脂成分,如果组织固定、脱水脱脂不完全,切片时往往出现组织碎渣,有空洞、触摸较软、放置后蜡块表面有凹陷、不易保存等各种问题影响后续的观察及研究[6-8]。本实验室参照董学易等[9]的方法制作脂肪组织石蜡切片,虽基本满足形态学研究,但整个流程所用时间较长,效率较低,减慢了科研进程。为制作更好的脂肪组织石蜡切片,同时缩短制作时间,本科室在此基础上进行改进,并应用于免疫组化和免疫荧光染色,获得了较为满意的结果。

喉鳞状细胞癌中ZNF750的表达及与预后的关系

目的探讨ZNF750的表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征及预后的相关性。方法收集115例喉鳞状细胞癌及56例对应癌旁正常喉组织,另收集6对新鲜喉鳞状细胞癌组织及配对癌旁正常喉组织。采用Western blot法和免疫组化法检测喉鳞状细胞癌组织及癌旁正常喉组织中ZNF750蛋白的表达;采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险回归模型分析ZNF750蛋白表达与喉鳞状细胞癌患者预后的关系。结果ZNF750在喉鳞状细胞癌组织中的表达明显低于癌旁正常喉组织(P<0.05),ZNF750蛋白表达与喉鳞状细胞癌的淋巴结转移、TNM分期密切相关(P<0.05),同时喉鳞状细胞癌患者中ZNF750蛋白高表达组的总生存率均高于ZNF750低表达组(P<0.05)。结论ZNF750在喉鳞状细胞癌组织中的表达与淋巴结转移、TNM分期有关,其有望成为预测喉鳞状细胞癌患者预后的指标。

荧光碳量子点的特性及检测巯基化合物的研究进展

巯基化合物是生物体内一类重要的抗氧剂,包括半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽等生物硫醇类化合物,在体内参与一系列典型的生化反应,有助于维持正常的生理功能,当含量异常会导致多种疾病.因此,定量检测巯基化合物在相关疾病研究和诊断方面具有重要的意义.目前,利用高选择性、高灵敏度的荧光探针检测巯基化合物已成为前沿课题之一.碳量子点(CDs)因具有优良的荧光稳定性、极好的生物相容性、耐光漂白以及易制备等优良的性能,作为一类荧光探针检测巯基化合物得到了广泛的应用.类似于其他纳米探针,当荧光CDs用于检测巯基化合物时,基于信号检测的竞争机制,引入猝灭剂和巯基化合物竞争性结合荧光碳量子点,由于巯基化合物的高亲和力和强亲核性,使荧光恢复.本文综述了碳量子点的制备和特性,以及在检测巯基化合物方面的研究进展.

内质网应激与非折叠蛋白反应激活对骨骼肌纤维免疫行为的调控作用

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)诱导的炎症环境中,骨骼肌纤维内质网应激(ERS)与非折叠蛋白反应(UPR)的激活对肌纤维免疫行为的调控作用。方法 体外培养的C57BL/6小鼠原代成肌干细胞,经马血清分化成多核肌管后分成以下10组:1.对照组;2.IFN-γ组;3.衣霉素(TM)组;4.毒胡萝卜素(TG)组;5.IFN-γ+4-苯基丁酸(4-PBA)联合处理组;6.IFN-γ+TG+4-PBA联合处理组;7.IFN-γ+4μ8c联合处理组;8.IFN-γ+TG+4μ8c联合处理组;9.IFN-γ+GSK2606414联合处理组;10.IFN-γ+TG+GSK2606414联合处理组,并进行对应的处理。利用Real-time PCR检测相关肌细胞因子基因水平;免疫荧光观察UPR关键分子:真核翻译起始因子2α(eIF2α)、肌醇需要酶1α(IRE1α)、转录激活因子6(ATF6)在肌纤维内的表达;Western blotting检测肌细胞相关免疫分子和肌细胞因子及UPR关键分子;Luminex分析肌纤维内促炎症的肌细胞因子的蛋白水平。结果 IFN-γ诱导的炎症环境中,肌纤维H-2K~b、H2-Ea、Toll样受体3(TLR3)以及p-eIF2α、p-IRE1α表达上调;添加UPR抑制剂4-PBA的分组肌纤维H-2K~b、 H2-Ea、TLR3以及肌细胞因子的表达较IFN-γ组下调,添加IRE1α特异性抑制剂4μ8c的分组上述分子表达较IFN-γ组亦下调,而添加蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)特异性抑制剂GSK2606414的分组则无明显变化。结论 IFN-γ诱导的炎症环境中,UPR-IRE1α通路激活并抑制肌纤维免疫相关分子合成,从而进一步抑制肌纤维介导的免疫反应,有利于肌再生。