细胞松弛素D对棉铃虫核型多角体病毒复制和装配的影响

杆状病毒感染引起宿主细胞肌动蛋白骨架的构象变化 ,使之形成缆绳结构 .棉铃虫核型多角体病毒 (HaNPV)的衣壳蛋白也能使宿主昆虫的肌动蛋白发生凝聚 ,用细胞松弛素D抑制宿主肌动蛋白形成纤丝结构 ,病毒感染Hz AM1,空斑计数表明 ,0 1μg/ml细胞松弛素D可使棉铃虫核型多角体病毒的增殖下降 10 4倍 ,细胞松弛素D浓度增高到 0 5 μg/ml则测不到子代病毒粒子 .Western印迹分析表明 ,细胞松弛素D并不影响受染细胞中肌动蛋白的含量 .斑点印迹 (dotblot)也表明 ,病毒DNA的合成也没有受到影响 ,推测宿主细胞的肌动蛋白纤丝结构与病毒的复制有关 .在电子显微镜下观察超薄切片发现 ,在 0 5 μg/ml细胞松弛素D处理细胞中形成的病毒粒子形态与正常形态明显不同 ,提示细胞松弛素D抑制HaNPV的增殖是由于抑制病毒组装成完整有感染性的病毒粒子 .从而可以认为宿主昆虫细胞的丝状肌动蛋白对子代病毒的复制和组装是必需的 .

用酵母双杂交系统发现HaNPV衣壳蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用

成功的构建了棉铃虫细胞 (Hz- AM1)的 c DNA文库 (Ha- c DNA) ,然后以棉铃虫核型多角体病毒衣壳蛋白 VP39(Ha NPV- VP39)作为诱饵蛋白 ,通过酵母双杂交系统 (yeast two- hybrid system ) ,在棉铃虫细胞 c DNA文库中钓到了 VP39的相互作用因子基因 .通过 DNA测序和氨基酸序列分析表明 ,该基因为棉铃虫的肌动蛋白(actin)基因 .本实验从一个侧面反映了 VP39蛋白与棉铃虫肌动蛋白间的相互作用 .