同源盒基因Lhx3和Lhx4在成年大鼠缺血性脑损伤后的表达变化

目的 揭示发育基因Lhx3和Lhx4参与成年动物中枢神经损伤修复的过程。 方法 线栓法制作局灶性脑缺血模型 ,阻断成年大鼠右侧大脑中动脉 ,缺血 2h后再灌注 ,分别于损伤再灌注后 3d、7d、14d和 2 1d取左右侧大脑皮层组织 ,采用RT PCR结合HPLC测定方法 ,相对定量分析上述不同损伤时相同源盒基因Lhx3和Lhx4在损伤侧与对照侧皮层运动神经元mRNA表达量的改变。 结果 正常成年大鼠大脑皮层运动神经元中 ,Lhx3和Lhx4基因均维持一定的表达水平 ,在局灶性脑缺血再灌注 3d、7d、14d后 ,大脑皮层运动神经元损伤侧的Lhx3和Lhx4基因表达均有明显改变 ,但变化规律不同。其中Lhx3在损伤后mRNA表达量较自身对照侧明显降低 ,而Lhx4的mRNA表达量较自身对照侧明显升高 ,该结果与成年大鼠坐骨神经夹伤后 ,脊髓中Lhx3和Lhx4的基因表达变化规律基本一致。 结论 LIM同源盒基因家族中的Lhx3和Lhx4基因不仅在神经元发育过程中起重要调控作用 ,而且可能参与成年动物中枢神经损伤的修复过程。

LIM同源盒基因家族在神经系统中的作用

LIM同源盒基因家族是同源盒基因的亚家族之一 ,它作为一类转录调节因子 ,通过其LIM结构域特异的分子内或分子间相互作用 ,在不同种类动物的神经系统发育中发挥了极为重要的调控作用。目前发现 ,该家族中的某些基因在成年动物及神经损伤再生过程中也可能有作用。随着对LIM同源盒基因家族研究的不断深入 。

成年大鼠同源盒基因Lhx4在外周和中枢神经损伤后的修复作用

目的:揭示作为发育基因之一的LIM同源盒基因是否参与调控成年动物神经损伤修复过程。方法利用坐骨神经夹伤的外周神经损伤模型,采用RT-PCR结合HPLC方法,比较分析外周和中枢神经损伤后Lhx4同源盒基因的表达变化规律。结果成年大鼠在外周和中枢神经损伤后Lhx4的mRNA表达量均有改变,坐骨神经夹伤3,7d后,损伤侧脊髓运动神经元中Lhx4mRNA表达量比对照侧明显增高;而脊髓半横断后损伤对侧的大脑皮层运动区中Lhx4mRNA的表达量即刻便发生改变,较对照侧有明显增高,且在脊髓损伤14d时仍可被检测。结论LIM同源盒基因家族中的Lhx4基因可能与成年动物外周和中枢运动神经元的损伤修复有关。

同源盒基因Lhx4在成年大鼠外周神经损伤后的表达变化研究

为探讨作为发育基因之一的LIM同源盒基因是否参与调控成年动物神经损伤修复过程,研究利用坐骨神经夹伤的外周神经损伤模型,采用RT-PCR方法并将其产物进行高效液相色谱分析,相对定量分析同源盒Lhx 4基因在成年大鼠脊髓腹侧运动神经元中不同损伤时相的表达变化;应用原位杂交方法进一步检测坐骨神经夹伤后Lhx4 mRNA在损伤及对照侧脊髓运动神经元的表达.结果显示,成年大鼠在坐骨神经夹伤3d,7d后,损伤侧脊髓运动神经元中Lhx4 mRNA表达量比对照侧明显增高,此结果亦被原位杂交实验证实.以上结果提示,作为一类重要的转录因子,LIM同源盒基因家族中的Lhx4基因可能在成年动物外周运动神经元损伤后的轴突再生和神经功能重建中起调控作用.

Alu—PCR的基本原理及其应用

1986年聚合酶链式反应即PCR技术的问世,为分离分析单拷贝特定DNA序列提供了有效方法。然而,此方法需要预先知道待分离DNA片段两侧的DNA顺序,因此,PCR技术的使用有其局限性。 为了能够快速从啮齿动物与人类单染色体杂交的体细胞中特异地扩增出人类DNA序列,可将与人类DNA重复序列同源的DNA序列设计成为PCR引物来进行PCR反应。其中。

阿的平保护纹状体神经元免受热处理损伤作用的研究

目的探讨预先使用阿的平对热处理所致的纹状体神经元损伤的保护作用及其机制,为热环境致细胞损伤的干预和药物研究提供参考。方法采用培养的大鼠纹状体神经元,培养液中加入不同浓度的阿的平,给予43℃热处理1h。台盼蓝染色鉴定细胞坏死,活性Caspase3免疫染色和原位末端转移酶法评价细胞凋亡。结果热处理明显影响神经元存活,导致细胞死亡,其中主要由细胞坏死过程介导;单独的阿的平对细胞毒性作用较小,预先使用阿的平能够减少热处理引起的细胞坏死。结论阿的平对热环境致纹状体神经元的损伤有保护作用,这种保护作用主要通过减少细胞坏死过程介导。

热环境中大鼠脑、肺损伤与米帕林的保护作用(英文)

背景:高温环境对生物体造成明显损伤,深入研究热环境损伤的机制、提高机体耐热损伤的能力,可为抗热环境药物研究提供参考。目的:观察预先使用米帕林,对热环境中大鼠损伤的作用,探讨急性热环境致机体脑、肺损伤作用和可能的保护措施。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点和材料:地点为军事医学科学院研究所。材料为二级Wistar大鼠,雄性,体质量160～200g,由军事医学科学院实验动物中心提供,饲喂专用,饮用自来水。方法:将大鼠随机分组,根据体质量灌胃给予不同剂量的米帕林,对照组给予相当体积的生理盐水,1h后进入41℃热环境。主要观察指标:检测大鼠体温变化和死亡时间,分析药物剂量与体温变化、存活时间的关系。对死亡大鼠进行主要脏器的病理分析,寻找热环境对机体损伤的主要靶器官。结果:41℃热环境明显影响大鼠的代谢和存活,进入热环境的大鼠体温经过短暂维持后迅速上升,大约在38min后死亡,死亡大鼠解剖发现肺明显出血和脑水肿,病理切片观察发现肺细胞和大脑神经元死亡明显;预先灌胃给予4.5～18.0mg/kg米帕林能够明显减缓大鼠在热环境下体温升高的速率,增加大鼠在热环境中的存活时间。9.0mg/kg剂量组体温上升速率减缓20%左右,存活时间延长超过50%。9.0mg/kg剂量组大鼠在进入热环境38min左右处死后。

阿的平对高功率微波损伤小鼠睾丸的保护作用

目的:探讨阿的平对高功率微波辐射小鼠睾丸的保护作用。方法:雄性小鼠随机分为4组,即正常组、辐射对照组、阿的平低剂量组(12.6mg/kg)、阿的平高剂量组(50.4mg/kg)。小鼠分别灌胃给予注射用水和不同剂量阿的平后,使用频率2.856GHz、脉宽500ns的微波源,进行50mW/cm2的微波远场照射30min。于照射后即刻、1d、2d、7d取小鼠睾丸。将小鼠睾丸组织病理切片观察其形态学变化;组织蛋白匀浆法提取睾丸组织蛋白检测热休克蛋白(HSP)70表达变化。结果:微波照射小鼠30min后,辐射对照组的睾丸组织从即刻至7d均有病理改变,曲精小管边缘不整齐,生精细胞水肿,排列紊乱,间质充血。给药组与对照组相比曲精小管排列基本整齐,边缘清晰,生精上皮细胞肿胀较对照组减轻。其中给药低剂量组在照射即刻至2d改善效果与高剂量组相似,但在7d时高剂量组的改善效果明显优于低剂量组。Western blot结果显示,在照后2d阿的平高、低剂量给药组与辐射对照组相比HSP70蛋白表达升高,在7d时只有阿的平高剂量组与辐射对照组相比HSP70蛋白表达升高。结论:阿的平可能是通过上调HSP70蛋白的表达,发挥其抗炎和抗凋亡作用,从而对高功率微波致伤的小鼠睾丸组织产生保护作用。

过滤染色法检查精子浓度的方法学研究

目的:开发一种快速精子浓度检测方法,并评价其可行性。方法:根据精子可被亚甲兰溶液染成蓝色,其颜色深浅与精子数量呈正相关原理,以经显微镜计数确认浓度的精子(2000万个/ml)为标准样本,加入亚甲蓝溶液染色,过滤,根据结果颜色,应用现代印刷技术制备出标准色标。以颜色深浅检验标本中精子浓度,对方法中涉及的过滤膜、染色液、染色时间、标准色标等关键参数进行确认,评价试剂盒检测结果。结果:通过对3000份成年男性精液样品检测结果表明,该试剂盒方法的灵敏度、特异性和准确性均在95%以上。结论:本方法所制试剂盒能够实现快速自检,适合医院检查前初步诊断,时间短,操作简单。

龙胆紫染色用于分析精子存活率的方法学研究

目的:探讨龙胆紫染色区分存活精子和死亡精子可能性,以提供一种判定精子存活率的新方法,为男性精液检测和质量评价提供依据。方法:采用不同浓度的龙胆紫溶液对精液样本染色,在光学显微镜下观察染色结果,讨论区分存活精子和死亡精子的标准,并计数一定数量的总精子数,计算存活率,并将计算结果与标准方法比较。结果:经过龙胆紫溶液(0.05%,M/V)染色后在显微镜下存活精子呈现淡蓝色,而死亡精子呈现深紫色,计算获得的存活率与伊红染色法(0.5%,M/V)的结果比较差异统计学意义(t=0.862,双侧P=0.403)。结论:一定浓度的龙胆紫染色后能够清楚地区分存活精子和死亡精子,该法获得的精子存活率结果可靠,龙胆紫染色法可以作为一种新的分析精子存活率的方法。

同源盒LHX4基因在成年中枢神经组织的表达

通过MTEarray分析 72种人不同组织中LHX4基因mRNA的表达 ,发现LHX4基因不仅在胚胎的中枢神经系统表达 ,也在成年的中枢神经系统保持着低水平表达。通过原位杂交的方法发现LHX4基因在成年动物脊髓腹侧的运动神经元和大脑皮层特异性表达 ,提示该基因可能在成年中枢神经系统 ,特别是在脊髓运动神经元中发挥作用。

热环境对纹状体神经元生长的影响

目的 :研究热环境对纹状体神经元生长、凋亡的影响 ,探讨热环境刺激对神经系统损伤的机理 ,为筛选新的预防和治疗热环境损伤的药物提供参考。方法 :原代培养的纹状体神经元用抗神经丝蛋白 (NF)、抗神经元特异的烯醇化酶 (NSE)和抗酪氨酸羟化酶 (TH)的抗体进行免疫细胞化学染色鉴定 ,计数NF阳性细胞百分比。细胞在(4 3 0± 0 2 )℃ ,10 %的CO2 条件下培养 1h造成热环境处理模型 ,立即用PI/H332 5 8双染色、台盼蓝染色、活性caspase- 3和原位末端转移酶 (TdT)染色等方法分别检测坏死和凋亡细胞 ,同时采用体视学分析神经元体积大小。结果 :正常培养的纹状体神经元在接种 7- 9d成熟 ,胞体饱满 ,呈NF、NSE和TH阳性。PI/H332 5 8双染色结果表明 ,急性热环境处理时发生的细胞凋亡的百分比较少 ,而坏死比例明显增加 ;台盼蓝染色计数结果表明 ,细胞总数明显减少 ,同时坏死细胞的比例增加了 10倍左右 ;活性caspase - 3和TdT以及细胞体积的分析结果表明 ,热环境刺激引起神经元细胞数目减少 ,同时小幅度增加了细胞凋亡的发生。结论 :4 3℃的热环境处理 1h ,导致纹状体细胞数目减少 ,引起细胞死亡主要通过坏死途径 ,凋亡比例较少。

热处理延缓维甲酸诱导P19细胞的生长及向神经元分化

研究热环境对P19细胞生长和RA诱导的向神经元分化的影响 ,为探讨热环境刺激对神经系统发育的影响提供参考。成熟的P19细胞在热环境的条件下培养 1h后 ,消化接种至培养皿中正常培养 ,于不同时间点取样分析细胞数目。热环境处理P19细胞后用维甲酸诱导分化 4d ,随后接种至培养皿中 ,参照神经元的原代培养方法培养12d ,用神经元抗体免疫鉴定 ,计数不同培养时间NSE、NF阳性神经元在总体细胞中的比例。结果发现接受热处理的P19细胞贴壁不良 ,生长始终缓慢 ,说明热环境刺激阻止细胞生长分裂。P19细胞经RA诱导分化后出现类似神经细胞的突起和纤维网络 ,而热环境导致P19细胞向神经元分化明显迟缓 。

大脑皮层缺血损伤后CSF-1R在中枢神经元的表达变化

目的:观察大脑皮层缺血损伤后,集落刺激因子-1受体(CSF-1R)在损伤区及其周围脑区表达的变化,探讨集落刺激因子-1(CSF-1)/CSF-1R信号在中枢神经系统缺血损伤、修复过程中的作用。方法:采用免疫组化技术和Western blot法,对正常和受缺血损伤刺激小鼠全脑CSF-1R免疫阳性神经细胞的分布及表达量进行对比观察。结果:缺血损伤能引起CSF-1R在中枢神经系统(CNS)广泛脑区神经元上的表达上调,不仅发生在损伤及其周围区,还出现在损伤对侧及许多远隔部位。结论:CSF-1/CSF-1R可能参与CNS缺血损伤的发生和修复过程。

G蛋白βγ亚基介导的磷脂酶A_2激活与β-AR失敏的关系

研究异丙基肾上腺素 (ISO)所致的体外培养大鼠肺 β 肾上腺素受体 ( β AR)失敏的机理 ,首先观察了不同浓度和不同作用时间的ISO对大鼠肺 β AR失敏的影响 ,可见ISO所致 β AR失敏呈良好的量 效和时 效关系 ;ISO对磷脂酶A2 (PLA2 )激活也呈时间和剂量依赖性 ,且PLA2 激活比 β AR失敏所需的ISO剂量低 .上述现象可分别被PLA2 特异性抑制剂对溴乙酰酚 (PBA)、地塞米松 (Dex)、Gi蛋白灭活剂百日咳毒素 (PTX)、抗Giα血清和抗Gβγ血清所抑制 ;而 5′ O 3 硫代三磷酸鸟甘 (GTP γ S)则能加重ISO所致β AR失敏和PLA2 激活 .以上结果提示 :体外培养的大鼠肺 β AR在激动剂长时期作用下 ,受体发生的失敏与G蛋白介导的PLA2 激活有关 ,此时β AR的信号转导途径由原来腺苷酸环化酶正偶联转变为G蛋白 βγ亚基介导的PLA2

快速精子浓度检测试剂盒的临床实验室检测评价

目的:探讨快速精子浓度检测试剂盒的准确性、灵敏性和特异性,以评价其临床应用价值。方法:应用快速精子浓度检测试剂盒和世界卫生组织推荐的显微镜计数法分别测定临床500例不育症患者的精子浓度,并进行两种方法的kappa一致性检验。结果:快速检测精子浓度检测试剂盒和显微镜计数法比较的准确性为97.6%,特异性为97.4%,敏感性为97.8%,Kappa值为0.956,两种检测方法的结果有很好的一致性。结论:运用快速精子浓度检测试剂盒能够基本满足临床需求,其标本处理简便,有良好的应用前景。

细胞膜电位的动态监测及其在银杏内酯研究中的应用

建立了一种简便、快速的膜电位的测量方法。采用亲脂性阴离子荧光探针DiBAC4(3)标记大鼠脑神经元细胞,以倒置荧光显微镜观察并记录细胞膜电位的变化。用所建方法研究了银杏总内酯,及银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对大鼠脑神经元细胞膜电位的影响。结果显示,加入银杏总内酯及各种银杏内酯后细胞出现去极化,膜电位迅速改变,随后回复至正常水平,银杏总内酯对细胞膜电位的影响大于各单体,其中以银杏内酯B的作用为主。

抗重组人肿瘤坏死因子-α(rHTNF-α)单克隆抗体特性及功能的研究

应用杂交瘤技木制备抗重组人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对于r-HTNF-α的纯化和TNF-α分子的抗原性及功能的研究将是一种主要工具。本实验对一组抗rHTNF-α单克隆抗体的特性和功能进行了研究。Western blotting结果表明Z_4、Z_8、Z_(12)、Z_ (20)、Z_(21)、B_3和E_6 抗体特异性地识别分子量为17000道尔顿的TNF-α它们与rIL-1、rIL-2、rIFNγ、rIFNα、和E coli菌裂解液无交叉反应。竞争性ELISA结果证实7种抗体分别识别TNF-α分子上5个不同的抗原决定簇。其中4个抗体可以识别TNF-α活性中心部位。两个抗体还可以识别天然TNF-α分子。

阿的平对高功率微波辐射小鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨阿的平对高功率微波辐射小鼠肺组织的保护作用。方法:130只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、辐射对照组、阿的平低剂量组(12.6 mg/kg)、阿的平高剂量组(50.4 mg/kg)。辐射对照组小鼠灌胃给予注射用水20 ml/kg,两阿的平组分别灌胃给予不同剂量阿的平,1 h后用50 mW/cm^2的微波照射30 min。正常组于实验7 d,其余3组于照射后即刻、1 d、2 d、7 d处死小鼠取肺脏,HE染色,观察肺组织形态学变化;Westernblot检测肺组织中热休克蛋白70(HSP70)表达的变化。结果:50 mW/cm^2微波照射30 min后,辐射对照组出现肺组织内瘀血现象,肺泡上皮细胞脱落,肺泡间隔变薄、断裂,支气管充血,直至照射后7 d。阿的平给药组肺间隔断裂减少,组织淤血现象减轻,照射后2 d组织形态的改善最为显著,尤以高剂量组保护作用更明显。从微波照射后即刻,辐射对照组和阿的平组的小鼠肺中HSP70表达开始升高,直至7 d。阿的平给药组与辐射对照组相比HSP70表达明显上调,尤以阿的平高剂量组上调明显,但两阿的平给药组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:阿的平能上调高功率微波辐射后小鼠的HSP70蛋白表达水平,减轻辐射后小鼠肺组织的病理损伤,对微波辐射小鼠的肺组织有一定的保护作用。

大鼠中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织基因表达谱的分析

目的:分析中枢和外周神经损伤后胞体分布区神经组织多基因表达谱的差异,探讨中枢和外周神经轴突损伤后再生差异的分子机制。方法:12只 Wistar 雄性大鼠随机分为右侧坐骨神经夹伤和胸段脊髓半横断两组。手术后7d,用 cDNA Microarray 技术检测1176个已知基因在与受损神经相应胞体分布区神经组织表达的变化,并分析其在中枢和外周神经损伤后表达的差异。结果:cDNA Microarray 分析的数据显示,有74个基因在外周和中枢神经损伤后同时变化,其中29个基因变化趋势一致,12个基因表达上调,17个基因表达下调。呈反向变化的基因有45个。结论:中枢和外周神经轴突损伤后,多种结构、功能基因表达发生变化;外周和中枢神经损伤后多种结构、功能基因表达存在明显的差异。